疟疾诊断方法的研究进展

疟疾是一种严重危害人类健康的蚊媒传染病.迄今为止,显微镜镜检(厚血膜,薄血膜)仍是疟疾诊断的金标准.但是显微镜镜检做为一种诊断方法又存在一些问题.由于疟原虫形体小,形态相似,难以染色和检出,要有经验的人员才能做到正确的诊断;同时,镜检费时费力,不适合大规模样品的检测[1]. 七十年代初,随着免疫学技术的发展,间接荧光抗体[1,2]和ELISA[3]均很快在疟疾诊断中得到应用.然而,这些方法也有自身的缺点:首先难以区分是现在还是以前的疟疾感染;其次,疟疾流行区人群的循环抗体水平高,用血清学检测流行区个体的抗体指标意义不大.再有生产特异纯净的抗原成本较高,而且天然抗原的制备技术落后还会直接降低其特异性和敏感性. 近年来,随着分子生物学技术和生物化学技术的提高,以分子(疟原虫结构成份及代谢产物)或DNA为基础的疟疾诊断方法不断涌现.现将疟疾诊断技术方面的进展做一简要的综述.

弓形虫感染与细胞凋亡

本文概述了细胞凋亡(apoptosis)的生物特性、弓形虫感染与宿主细胞凋亡及协同HIV感染导致的淋巴细胞凋亡的相互关系。

恶性疟原虫ABRA基因真核表达重组质粒的构建及序列分析

目的 构建恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株ABRA基因真核表达重组质粒 pcDNA3-ABRA ;测定ABRA基因序列 ,并了解FCC1/HN株与其它分离株ABRA序列的差异。方法 根据ABRA基因已知序列设计合成一对引物 ,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增ABRA基因 ;将ABRA基因定向克隆入真核表达载体 pcDNA3,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ;用酶切 ,PCR扩增鉴定筛选到的重组质粒阳性克隆。以正确的重组质粒为模板 ,用双脱氧链末端终止法测定ABRA基因序列 ,应用软件辅助分析ABRA序列及进行同源性比较。结果 PCR扩增得到特异的FCC1/HN株ABRA基因 ;经双酶切及PCR鉴定表明获得正确的 pcDNA3-ABRA重组质粒。测序表明 ,FCC1/HN株ABRA基因大小为 2 2 2 0bp ,编码 73 9个氨基酸。恶性疟原虫FCC1/HN株与Camp ,3D7,FC2 7株ABRA基因编码氨基酸序列主要在C -端存在少量不同 ;FCR3株与以上 4株ABRA基因编码氨基酸序列相比 ,只有少量的氨基酸替换。结论 从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中获取ABRA基因 ,成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-ABRA ,并测定了FCC1/HN株ABRA基因的序列 ;FCC1/HN株与其它分离株ABRA基因有很高的同源性。

恶性疟原虫FCC1/HN株Pf332基因的克隆和测序

目的 构建恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株红细胞膜相关巨大蛋白 (Pf3 3 2 )部分基因的真核表达载体 ;并测定Pf3 3 2基因序列 ,了解FCC1/HN株与 3D7、PaloAlto株Pf3 3 2基因序列的差异。 方法 根据已知Pf3 3 2基因序列设计合成一对引物 ,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pf3 3 2基因片段 ;将Pf3 3 2部分基因定向克隆入真核表达载体pcDNA3,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ;阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增鉴定 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用分子生物学软件辅助分析Pf3 3 2序列及进行同源性比较。 结果 PCR扩增得到特异的FCC1/HN株Pf3 3 2基因片段 ;经双酶切及PCR鉴定表明获得正确的 pcDNA3-Pf3 3 2重组质粒。测序表明 ,获得的FCC1/HN株Pf3 3 2基因片段大小为 12 60bp ,编码 4 2 0个氨基酸残基。恶性疟原虫FCC1/HN株与 3D7、PaloAlto株间Pf3 3 2基因片段编码的氨基酸残基中分别有 1个、15个位点不同。结论 从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中获取Pf3 3 2基因片段 ,成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-Pf3 3 2 ;FCC1/HN与 3D7株间比FCC1/HN与PaloAlto株间的Pf3 3 2基因序列的同源性高。