阳离子脂质体介导的肺癌细胞基因转染效率的比较研究

【目的】提高阳离子脂质体介导的肺癌细胞基因转染效率。【方法】采用表达E .coliβ 半乳糖苷酶的 pCMVβ报告基因质粒及组化染色评价阳离子脂质体的转染效率。优化脂质体介导肺癌细胞基因转染效率的条件包括 :脂质体∶DNA电荷比率 ,DNA转染剂量 ,阳离子脂质体的类型。【结果】当阳离子脂质体∶DNA电荷比率 (+ / - )为 3∶1时 ,pCMVβ 的剂量为4μg/孔 (2 4孔板 )时 ,阳离子脂质体DOSPER介导肺癌细胞株SPC A 1转染效率最高 ,达 (11 9± 0 9) %。【结论】优化转染条件 ,脂质体可有效地将外源基因体外导入肺癌细胞。本实验为阳离子脂质体介导肺癌细胞功能性基因的转移及进一步的肺癌基因治疗打下了基础。

阳离子脂质体介导pE-CEA-cd-tk对CEA阳性肺癌的杀伤作用

目的 增强E .colicd/HSV 1tk自杀基因的细胞毒性 ,实现阳离子脂质体介导pE CEA cd tk/5 FC +GCV体系靶向杀伤CEA阳性肺癌。方法 PCR法分别扩增出CMV增强子 ,CEA启动子 ,cd tk ,构建真核表达载体 pE CEA cd tk ;MTT法检测pE CEA cd tk/5 FC +GCV体系的体外细胞毒性。体内实验采用肺腺癌细胞SPC A 1裸鼠皮下移植瘤模型。通过肿瘤局部或鼠尾静脉注射脂质体 /pE CEA cd tk复合物 ,腹腔注射GCV +5 FC前体药物进行治疗。结果 阳离子脂质体介导pE CEA cd tk/5 FC +GCV体系体外可靶向杀伤CEA阳性肺癌细胞 ,这种杀伤作用存在显著的细胞差异 ;体内可抑制小鼠皮下肺肿瘤结节的生长 ,荷瘤鼠存活期延长。结论 阳离子脂质体介导 pE CEA cd tk/5 FC +GCV体系体内外对CEA阳性肺癌均具有较强的杀伤作用。

利用电泳迁移分析法初步探讨肺癌细胞株CEA的转录调控

【目的】探讨癌胚抗原 (CEA)表达水平不同的肺癌细胞株在转录因子水平有无差异。【方法】利用电泳迁移分析法 (EMSA)检测这些细胞株与CEA启动子阳性足迹区探针结合的DNA结合蛋白。维甲酸 (RA)诱导分化A5 49细胞 ,检测诱导前后转录因子的变化。【结果】CEA水平高的细胞DNA结合蛋白的条带信号强 ,CEA水平低的细胞DNA结合蛋白的条带信号弱 ,CEA阴性细胞可见到较弱的DNA结合蛋白信号。结合条带信号在诱导后细胞组明显减弱。【结论】CEA基因特异性的表达部分依赖于转录因子的合成。转录因子量的改变与CEA表达的高低有关 ,并且提示RA对CEA阳性肺癌细胞的诱导是在转录水平起作用。