雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质的提取及体外生物活性研究

雪旺氏细胞（ＳＣ）分泌多种神经营养因子促进周围神经再生，但ＳＣ分泌的各种蛋白质对周围神经再生的影响尚未完全阐明。为此，从成年大鼠瓦勒氏变性坐骨神经中分离出ＳＣ，经培养获得ＳＣ无血清条件培养液（ＳＣ－ＳＦＣＭ）。通过ＰＭ１０超滤浓缩、Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ和Ｂｉｏｔｒａｐ电洗脱，从ＳＣ－ＳＦＣＭ中分离出Ｄ蛋白带，分子量在４３～６７Ｋｄ之间。经ＭＴＴ检测，Ｄ带蛋白在２５～５０ｎｇ／ｍｌ浓度时对脊髓前角神经元表现出明显的体外成活作用。Ｄ蛋白带可能是一种有别于已知的ＳＣ源神经营养物质，其活性浓度达到了神经营养因子分子检测水平。

备用根大鼠脊髓后角提取液中神经营养活性组分的分离及生物活性测定

制作备用根大鼠脊髓后角提取液，取其分子量大于10kD的组分进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，发现手术侧和非手术侧的电泳区带数目大致相同，但手术侧样品的第四条蛋白质区带扫描的吸收峰面积百分比大于非手术侧样品的第四条区带，两者在量上可能有差别。将手术侧样品经交联葡聚精G-75凝胶层析，得到两个洗脱峰．第一峰洗脱液有促进体外培养的背根节神经元存活及其突起生长的作用，其电泳分析显示4条主带，分子量在40～80kD之间．实验结果提示部分去传入纤维支配的脊髓后角组织含有神经营养活性物质，该物质的分子量约在40～78kD之间．

重组DNA技术斑点杂交法检测生物检材的性别

介绍了用斑点杂交技术,以Y染色体特异的3.5kb DNA片段为探针检测人血痕、人的组织碎块、牙齿、头发、羊水等的性别。样本经制备相当于0.1ul新鲜血的血痕,0.05 mg的组织块,带毛囊的头发1根,1/20颗牙齿牙髓质和2ul的羊水经本法检查,均能确定其性别。组织块经用福尔马林固定1周后,同样可以判断其性别,血痕性别的盲测结果全部正确。同时,对9种常见动物的血痕亦作了检查,均未显示阳性反应。本法准确灵敏,操作简单,值得进一步推广。

广东菲牛蛭生长和生殖的研究

目的 研究室内菲牛蛭生长动态和生殖 ,为人工饲养菲牛蛭提供基础资料。方法 在同一个卵袋产下的幼蛭 ,放入盛有天然水的 80 cm× 6 0 cm× 5 0 cm的玻璃缸内饲养 ,每 10 d称牛蛭体重 1次 ,每天记录水温 ,每月换水一次 ,每次在野外采回的水要检测 10种化学成分。在活兔身上吸血 ,每次称出吸血量。观察生长发育变化、记录交配产卵过程。结果 从孵化出的幼蛭经 14个月时间 ,吸血 5 ,6次 ,生长发育达到性成熟 ,第 1,2 ,3次吸血为幼体阶段 ,第 4次吸血后进入亚成体阶段 ,第 5次吸血后 ,部分个体达到性成熟 ,有的个体第 6次吸血后进入性成熟。生长动态曲线是一跳跃曲线。记录了交配、产卵过程。结论 阐明牛蛭生长动态和生殖过程。在室内饲养牛蛭成功。

人前脂肪细胞的原代培养

【目的】建立人前脂肪细胞原代培养方法 ,以更深入地研究人体脂肪组织增生的生物学特征。【方法】选用成人的腹部脂肪组织 ,采用原代消化细胞培养法培养出棱形细胞 ;同时取皮肤组织 ,进行成纤维细胞培养作为对照。【结果】培养出的棱形细胞成分均一 ,增殖旺盛 ,分化率高。经形态学动态变化的观察 ,生长曲线及油红O脂肪染色抽取法测定 ,证明是功能活跃的前脂肪细胞 ,并在体外重现了其增殖的全过程。【结论】在成熟的脂肪组织中存在着可分化成熟、生成脂肪的前脂肪细胞。由于脂肪细胞是胰岛素作用的经典靶细胞之一 ,本实验为进一步研究与肥胖及胰岛素抵抗相关的疾病如多囊卵巢综合症等打下了基础。

毛叶茶提取物对不同细胞生长的影响及体内协同抗瘤作用

应用噻唑兰（ＭＴＴ）法测得毛叶茶提取物（ＥＣＰＣ）对人肝癌细胞（ＢＥＬ－７４０２）的半数抑制浓度（ＩＣ＿（５０））为３５１．１μｇ／ｍｌ；台盼蓝拒染法（ＴＢＥ）的ＩＣ＿（５０）为１１５．２μｇ／ｍｌ；用ＭＴＴ法测得ＥＣＰＣ对人红白血病细胞（Ｋ＿（５６２））的ＩＣ＿（５０）＞１０００μｇ／ｍｌ，ＴＢＥ法测得其对Ｋ＿（５６２）细胞的ＩＣ＿（５０）为８１．４μｇ／ｍｌ。ＥＣＰＣ对人胎儿肺纤维细胞（ＨＦＬＦ）和人胎儿肾细胞（ＨＦＫ）显示促生长作用。在药物浓度为６２．５、１２５．０、２５０．０、５００．０和１０００．０μｇ／ｍｌ的培养下，对ＨＦＬＦ细胞的生长促进率分别为—１０．４７、＋１５．４８、＋３１．９１、＋５３．０２和＋８３．３７％：对ＨＦＫ细胞的生长促进率分别为＋１４．１８、＋２６．６１、＋５２．６２、＋８８．１３和＋１０３．７１％。ＦＣＰＣ分别与阿糖胞苷（Ａｒａ—Ｃ）、环磷酰胺（ＣＴＸ）和阿霉素（ＡＤＭ）合用对网织细胞肉瘤（Ｌ＿２）的抑瘤率高于各个单药的抑瘤率。加用ＥＣＰＣ后Ａｒａ—Ｃ可从单用平均抑瘤率３８．２％升高到６４％；ＣＴＸ从平均３１．３％升高到４８．９％；ＡＤＭ从平均１５．２％升高到４５．５％，ｑ?

应用抑制性消减杂交分析全反式维甲酸和1,25-二羟维生素D_3诱导结肠癌细胞的相关基因

为探讨结肠癌细胞诱导分化的机制 ,采用抑制性消减杂交 (suppression subtractivehybridization,SSH)研究联合使用全反式维甲酸和 1 ,2 5-二羟维生素 D3诱导分化结肠癌 Lo Vo细胞前、后差异表达的基因 .经比较消减 c DNA文库的序列与基因库的序列 ,发现 :有 1个基因的序列与正常鳞状上皮细胞中的 1个表达序列标签 (expressed sequence tag,EST)高度同源 ,同时发现6个新 EST (基因库登录号为 AW2 66492、AW2 66493、AW2 66494、AW58751 8、AW58751 9和AW58752 0 ) .说明诱导分化涉及到多个基因的表达 ,结肠癌的发生是多基因综合作用的结果 .进一步研究这些基因和 EST的功能对于结肠癌的防治将有重要意义 .

离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达的影响

分析离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达的影响 ,并从中筛选正加速度 (forwardaccel eration ,+Gz)高耐力相关基因 .雄性SD大鼠在动物离心机上训练 ,刺激G值从 + 7Gz～ + 12Gz ,每天增加 + 0 5Gz ,第 12d重复 + 12Gz刺激 ,第 13d在离心机上通过测定动物的 +Gz耐力筛选出高耐力动物 ,立即断头处死 ,取全脑和心脏组织 ,分离其mRNA .将此mRNA与未处理动物相应组织来源的mRNA进行抑制性消减杂交 (SSH) ,获得的相关EST(expressionsequencetag ,EST)进行序列测定 ,并经BLAST进行计算机分析 .结果获得 88条与离心机训练相关的EST ,其中 4 4条为已知基因的部分序列 ,4 4条为未知基因的部分序列 .提示离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达有影响 ;这些相关基因可能与

糖皮质激素诱导大鼠胸腺细胞程序性死亡研究

用甲基强的松龙（ＭＰＳ）与大鼠胸腺细胞共同培养，４ｈ后胸腺细胞超微结构显示胞浆及核固缩，形成大量空泡，而线粒体等细胞器结构变化不大，ＤＮＡ电泳分析有大量小分子片段，分子量为１８０ｂｐ的整倍数，呈梯状结构。结果提示ＭＰＳ可诱导胸腺细胞程序性死亡。

良性前列腺增生病人前列腺基质成分含量的变化

目的 :研究良性前列腺增生症 (BPH)不同体积前列腺基质成分含量的变化 ,并探讨前列腺体积对药物治疗的指导意义。 方法 :Masson染色及计算机辅助图像分析法 ,测定 3 0例BPH病人耻骨上切除前列腺基质成分 (平滑肌和结缔组织 )面积百分比 ,并与前列腺体积作相关性分析。 结果 :前列腺平滑肌面积百分比与体积呈显著负相关 (P <0 .0 1) ,前列腺体积 >4 0cm3组平滑肌和总的基质面积百分比 [( 7.5 6± 0 .69) %和 ( 2 5 .68± 1.5 8) % ]比体积 <4 0cm3组 [( 15 .60± 1.2 5 ) %和 ( 3 6.0 8± 2 .62 ) % ]明显减少 (P <0 .0 1)。 结论 :随着前列腺体积增长 ,平滑肌和总的基质含量减少而上皮成分相对增多 ,前列腺体积对BPH药物治疗的选择及提高疗效有参考意义。

脂质体介导的基因转染效率与肺癌细胞的增殖特性的关系

目的 :探讨阳离子脂质体介导的基因转染效率与肺癌细胞增殖特性的关系。方法 :采用pCMVβ报告基因质粒及自杀基因E .colicd的真核表达载体评价脂质体介导的基因转染效率。肺癌细胞增殖特性的检测包括绘制细胞生长曲线、计算细胞群体倍增时间、流式细胞仪测定肺癌细胞的细胞周期分布。结果 :肺癌细胞的类型对脂质介导的基因转染效率具有显著影响。细胞增殖速度越快 ,处于分裂期 (G2 /M)的细胞越多 ,则脂质介导的基因转染效率越高。结论 :脂质介导的基因转染对细胞增殖的依赖 。

地塞米松诱导裸鼠脾细胞程序性死亡的研究

本文用地塞米松（ＤＥＸ）与裸鼠脾细胞共培养，发现ＤＥＸ能有效地诱导脾细胞（包括ＮＫ细胞）发生细胞程序性死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ，ＰＣＤ）或凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）从而明显抑制脾ＮＫ细胞活性。结果表明：（１）常规电镜显示细胞收缩但胞膜完整，核凝缩，呈现典型的ＰＣＤ特征。（２）加入ＤＥＸ的脾细胞ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳呈现特征性梯状图谱，片段大小为１８０ｂｐ或其倍数，（３）脾ＮＫ细胞活性测定结果表明ＤＥＸ浓度在１０￣（－８）～１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ范围内可诱导出明显的ＰＣＤ现象发生；而当浓度太低（１０￣（－１０）ｍｏｌ／Ｌ）时则ＰＣＤ现象不明显；当浓度太高（１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ）时ＰＣＤ现象也不明显，呈现特有的剂量效应关系。（４）动力学结果显示（根据电镜及电泳图）在ＤＥＸ作用１２ｈ已开始有典型的ＰＣＤ现象发生，２４ｈ后则以坏死现象为主。

三氧化二砷诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡及其作用机制的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人鼻咽癌CNE2Z细胞的生物学效应及其作用机制。方法:台盼蓝计数法计算As2O3的IC50;CNE-2Z细胞经As2O3处理后,通过流式细胞仪、荧光染色及DNA电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪测定bcl2和bax阳性细胞百分率;罗丹明123染色后进行线粒体膜电位分析。结果:As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制CNE2Z细胞生长,其IC50为(1.35±0.30)μmol/L;0.5～2.0μmol/LAs2O3处理CNE2Z细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,荧光显微镜下可见明显的细胞凋亡形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带;As2O3对bcl2的表达没有影响(P>0.05),但能显著增加bax的表达(P<0.01)及降低线粒体膜电位(P<0.01)。结论:As2O3在体外可诱导鼻咽癌CNE2Z细胞凋亡,其机制可能与上调bax表达和降低线粒体膜电位有关。

光润金线蛭种群数量动态与水体化学因子关系的研究

1994～ 1998年 ,在广州市郊菜田水沟每月观察淡水蚂磺光润金线蛭种群数量 ,测定水体 10个化学因素 ,用逐步回归分析方法研究光润金线蛭种群数量和化学因素关系 .结果表明 ,每年种群数量动态不同 ,每年种群数量最多是 4～ 6月份 ,占全年种群数量的 5 7.14 %～ 71.18% .影响每年种群数量变化的主要化学因素为pH、PO3 -4、Na+ 、Ca2 + 、Mg2 + .影响 5年种群动态的主要化学因素为Fe3 + .

体外反搏对心肌梗死犬一氧化氮系统的影响

目的 :探讨体外反搏对心肌梗死犬一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)和其基因表达的影响。方法 :19只健康杂种犬随机分为对照组、缺血组和缺血 +反搏组 (反搏组 ) 3组 ,采用开胸结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌缺血模型 ,用改良硝酸还原酶法测定心肌缺血前后血清NO含量、以及心肌组织的NO含量和NOS比活性 ,采用免疫组化方法检测缺血区心肌组织的NOS亚型即诱导型NOS(iNOS)和内皮型NOS(eNOS)的蛋白合成 ,用原位杂交方法检测构成型NOS(cNOS)信使核糖核酸 (mRNA)的基因表达。结果 :在冠状动脉结扎前和结扎后 6 0min ,3组犬血清NO含量均无明显差异 (P >0 0 5 ) ;结扎后 12 0min和 180min时 ,反搏组犬血清NO含量明显高于缺血组 (P <0 0 5 )。正常组和反搏组犬心肌组织NO含量和NOS比活性均大于缺血组 (P <0 0 5 )。免疫组化结果表明心肌缺血时iNOS蛋白合成增多 ,而eNOS蛋白合成减少 ;体外反搏对iNOS有抑制作用 ,对eNOS有促进作用。此外心肌缺血时cNOSmRNA的表达明显减少 ,反搏可促进cNOSmRNA的表达。结论 :体外反搏促进NO的产生可能是其抗心肌缺血性损伤的重要机制之一。

接种CEA重组痘苗病毒对小鼠CEA^+肿瘤抑制作用的机制探讨

目的探讨CEA重组痘苗病毒(rV-CEA)治疗CEA＋肿瘤的机制。方法以我室构建的rV-CEA, 腹腔接种供体C57/BL小鼠，取其脾细胞及腹腔巨噬细胞(MΦ)，分别过继转移给荷CEA＋-HePa肝癌细胞的C57/BL小鼠，检测该供体小鼠脾细胞、腹腔MΦ及相应受体的脾细胞体外杀瘤细胞的效应。结果接种rV-CEA的供体小鼠的脾细胞及腹腔MΦ过继免疫给受体小鼠，具有明显抑制受体CEA阳性肿瘤生长的作用。体外实验表明，该供体脾细胞及接种了供体MΦ的受体脾细胞对同一靶细胞的杀伤活性明显增强，但供体MΦ体外的细胞毒活性无明显增加。结论rV-CEA对CEA＋肿瘤的抑制作用，可能主要通过CEA特异性免疫反应激活T细胞而实现。MΦ作为抗原提呈细胞可通过激活T细胞而杀伤肿瘤细胞，具体机制值得进一步研究。

飞行(学)员ACE基因的多态性

血管紧张素转化酶 (ACE)第 16内含子的插入 缺失多态性与运动员耐力水平有关 .为了解这一多态性与飞行员飞行耐力的关系 ,对不同阶段飞行人员ACE第 16内含子基因型进行了分析和比较 .结果显示 ,ACEDD基因型百分率在招飞体检应征人员为 12 5 %、基础飞行学院学员 (未飞 )为 11 5 %、飞行学院初教机飞行学员为 10 0 %、歼击机飞行员为 3 0 % .歼击机飞行员组D等位基因频率及DD基因型明显低于其他 3组 (P <0 0 1) ,而后 3组之间无明显差异 (P >0 0 5 ) .进而观察到 ,飞行员体能测试成绩优者 ,无DD基因型 .提示 ,飞行员体能表现与ACE第 16内含子的插入 缺失多态性有关 ,具有I等位基因者 ,体能较好 ,飞行耐力也较好 .

CEA重组痘苗病毒免疫治疗CEA阳性肿瘤机制的研究

目的 :探讨癌胚抗原重组痘苗病毒 (rV CEA)治疗癌胚抗原 (CEA)阳性肿瘤的机制。方法 :使用我室构建的rV CEA腹腔接种供体C5 7 BL小鼠后取其脾细胞过继转移给经6 0 Coγ射线亚致死量照射的荷CEA+ HePa肝癌细胞的C5 7 BL小鼠 ,并同时检测该供体小鼠脾细胞体外杀瘤细胞效应。结果 :接种了rV CEA的供体小鼠的脾细胞过继免疫给受体 ,具有明显抑制CEA阳性肿瘤细胞生长的作用。结论 :本研究提示rV CEA对CEA阳性肿瘤的抑制作用可能主要是通过CEA特异的免疫反应激活T细胞而实现的 ,其机制值得进一步研究。