IBM微机在生理实验中的应用

本文介绍了一套用于生理实验的软件和硬件系统。系统实现了对生物信号进行实时采集和显示,能把以前采到的波形数据再显示出来,能在指定的时刻输出触发脉冲信号,能方便地测量生物信号的幅度、时间、积分和斜率。本系统已在神经动作电位、肌肉收缩、心电和呼吸运动等实验中得到应用,取得了满意的效果。

鹰蛇巴戟方生理功效的研究

鹰蛇巴戟方生理功效的研究王庭槐，朱小南，林桂平中山医科大学生理教研室（５１００８９）鹰蛇巴戟方制成的鹰龙健酒，其主要组方有：养殖鹰、蛇、巴戟、狗脊、圆肉、杞子、冬虫草、白芍、黄精等。中医临床验证，证实该品有改善人体生理机能、调节人体平衡、驱风湿、强筋...

四逆汤改善缺血心肌能量代谢的作用及其机制探讨

目的：探讨四逆汤改善缺血心肌能量代谢的作用及其机制。方法：垂体后叶素性小鼠心肌缺血模型，四逆汤（浓度１０３ｇ生药／Ｌ）灌胃，剂量０１ｍＬ／２０ｇｗｔ·ｄ－１，心肌超微结构用电镜观察分析，心肌ＡＴＰ含量用高效液相色谱法测定，乳酸浓度用常规生化方法测定。结果：与缺血组相比，四逆汤组缺血心肌线粒体损伤显著减轻（Ｐ＜００５），糖原消耗显著减少（Ｐ＜００５），乳酸浓度显著下降（Ｐ＜００５），心肌营养血流量显著上升（Ｐ＜００１），氧自由基浓度显著降低（Ｐ＜００１）。结论：四逆汤具有显著改善缺血心肌能量代谢的作用。

新生大鼠心室成纤维细胞条件培养液的促心肌细胞肥大作用

利用新生大鼠心室成纤维细胞条件培养液孵育心肌细胞 ,证实成纤维细胞条件培养液能明显增大心肌细胞的表面积 ,增加心肌细胞的蛋白含量和 [3H] 亮氨酸 ( [3H] Leu)的掺入 ,上述作用以第 3天的条件培养液作用最强 ,具有剂量依赖性。ETA 受体拮抗剂BQ12 3能部分阻断成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大的作用 ,而AT1受体拮抗剂CV11974和α 肾上腺素受体拮抗剂regitin却无此效果。结果提示 :成纤维细胞条件培养液中含有促使心肌细胞肥大的物质 ,这些物质可能是内皮素 (ET 1)等。百日咳毒素 (PTX)和staurosporine也能部分阻断成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大作用 。

17β-雌二醇诱导血管内皮细胞一氧化氮释放及其与细胞内钙的关系

利用小牛胸主动脉内皮细胞 (BAECs)作为模型 ,观察 17β 雌二醇 (E2 )对BAECs一氧化氮 (NO)释放、一氧化氮合酶 (eNOS)mRNA表达和细胞内钙 ([Ca2 +]i)的影响 ,以及雌激素受体 (ER)拮抗剂tamoxifen和NOS抑制剂(L NAME)的作用。结果显示 ,E2 (10 -12 ～ 10 -8mol/L)呈浓度依赖性促进BAECs中NO的释放 ,以 10 -8mol/L浓度E2 处理BAECs 48h ,可见eNOSmRNA表达明显增加 ,这些作用均可被tamoxifen (10 -7mol/L)和L NAME (10 -6mol/L)明显抑制 ;E2 (10 -8mol/L)处理 48h可使BAECs静息 [Ca2 +]i 和ATP诱导的 [Ca2 +]i 上升幅度均显著增加。提示E2 能促进BAECs的NO释放和eNOSmRNA表达 ,该作用至少部分通过ER介导 ,并可能与细胞内钙动员有关。

清热利湿法对慢性乙型肝炎湿热证患者自然杀伤细胞、自由基水平的影响

清热利湿法对慢性乙型肝炎湿热证患者自然杀伤细胞、自由基水平的影响张诗军，马翠玉，陈泽雄，罗致强，马志楷，杨惠玲，郑芹我们对慢性乙型肝炎湿热证患者用自拟龙胆酸枣场清热利湿治疗，为了探讨其治疗机理，我们从自然杀伤细胞（ＮＫ）水平、自由基损伤方面进行了研究...

蛋白激酶C在血管紧张素Ⅱ抑制心肌细胞一氧化氮合成中的作用

实验用硝酸还原酶法测定培养新生大鼠心肌细胞亚硝酸盐 (NO 2 )和硝酸盐 (NO 3)总量 (NO 2 /NO 3) ,反映心肌细胞一氧化氮 (NO)生成情况 ,观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对心肌细胞NO生成的影响及其蛋白激酶C (PKC)在该效应中的作用。结果显示 :AngⅡ可减少心肌细胞NO的含量 ,并具有明显的剂量 效应关系 ;AngⅡ受体拮抗剂saralasin可明显抑制AngⅡ对NO生成的影响 ;L 精氨酸 (L Arg)明显增加心肌细胞NO的浓度 ,此效应可被一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂L NAME所抑制 ,L Arg未能消除AngⅡ抑制NO的作用 ;用佛波酯 (PMA)处理心肌细胞 ,其NO的生成明显减少 ,L NAME可加强此抑制效应 ;PKC抑制剂staurosporine (Stau)可明显削弱AngⅡ抑制心肌细胞NO生成的效应。结果提示 :AngⅡ具有抑制心肌细胞NO生成的作用 ,此作用可能是通过抑制心肌细胞NOS的活性而实现的 ;AngⅡ受体介导AngⅡ抑制心肌细胞NO生成的作用 ;激活PKC可使新生大鼠心肌细胞NO生成减少 ,NOS参与此抑制效应 ,新生大鼠心肌细胞NO生成过程的信号转导通路可能与PKC有关 ;PKC参与AngⅡ抑制心肌细胞NO的生成。

17β-雌二醇抑制内皮素诱导的血管平滑肌细胞增殖作用

目的和方法 :利用组织块贴壁法进行大鼠VSMC培养 ,胰蛋白酶分散细胞法传代 ,实验采用第 4～ 6代细胞。采用氚 胸腺嘧啶核苷 ([3 H] TdR)掺入和细胞计数来作为VSMC增殖的指标 ,以RT PCR的方法检测ETAR的表达 ,观察 17β 雌二醇 (E2 )对内皮素 1(endothelin l,ET 1)介导的血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖反应以及对内皮素A型受体(ETAR)表达的影响。结果 ::ETAR特异性拮抗剂BQ12 3能完全阻断ET 1介导的VSMC增殖反应 ;E2 可明显抑制ET 1促进VSMC增殖的作用。RT PCR结果显示E2 能抑制ETAR的表达 ,12h时抑制作用最为明显 ;E2 受体阻断剂Tamoxifen亦能部分抑制ET 1对VSMC的增殖及ETAR的mRNA的表达。结论 :ET 1促进VSMC增殖作用主要通过ETAR介导的 ,雌激素可通过抑制ETARmRNA表达来发挥对ET

ERKs及细胞内游离钙在内皮素-1诱导心肌细胞肥大反应中的作用

目的 :研究细胞外信号调节激酶 (ERKs)及细胞内游离钙 ([Ca2 + ]i)在内皮素 - 1 (ET - 1 )介导心肌细胞肥大反应中的作用及机制。方法 :利用培养的新生大鼠心肌细胞 ,①以蛋白合成速率、蛋白含量及细胞表面积为心肌肥大反应的指标 ;②用滤纸法测定ERKs活性 ;③用Fura - 2 /AM作为钙荧光指示剂测定心肌 [Ca2 + ]i浓度。结果 :①ET - 1浓度依赖性增加新生大鼠心肌细胞蛋白质含量和心肌细胞表面积、ERKs活性及 [Ca2 + ]i浓度 ,以上作用可被ETA 受体拮抗剂BQ1 2 3所完全抑制 ,被百日咳毒素 (PTX)部分抑制 ,而ETB 受体拮抗剂BQ788则无效 ;②ERKs激酶特异性抑制剂PD980 5 9可完全抑制ET - 1激活ERKs的作用 ,钙通道拮抗剂硝苯地平可明显抑制ET - 1介导的[Ca2 + ]i浓度增加 ,但二者皆仅部分抑制ET - 1介导的心肌细胞肥大反应 ;③蛋白激酶C(PKC)选择性抑制剂stau rosporine并不能明显抑制ET - 1介导的ERKs激活 ,但可抑制ET - 1介导的的 [Ca2 + ]i浓度增加及心肌细胞肥大反应。结论 :ET - 1主要通过ETA 受体并经PTX敏感的G -蛋白介导心肌细胞肥大反应 ,该作用至少涉及两条途径 :①通过PKC介导的心肌 [Ca2 + ]i浓度增加 ;②不通过PKC介导的ERKs激活。

成人骨髓间质干细胞定向诱导为神经元样细胞的研究

目的 :体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞。方法 :采用Ficoll -Paque液 (1 0 77× 10 3 g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,分别采用含巯基乙醇和硫代甘油等试剂的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增 5代可获 5× 10 7个细胞。加入巯基乙醇等或硫代甘油等诱导剂诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF表达阳性 ,GFAP阴性。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为神经元样细胞。

从胚胎干细胞诱导发育为浆细胞的体外实验研究

目的：建立胚胎干细胞体外定向诱导分化为浆细胞的体系，为研究造血发生的基因调控及Ｂ淋巴细胞发育过程奠定基础。方法：分阶段培养，第一、二阶段使用半固体培养，分组加入细胞因子、２－巯基乙醇和胚胎细胞条件培养液，用流式细胞仪、免疫组化及Ｗｒｉｇｈｔ’ｓ染色鉴定细胞，第三阶段移入骨髓基质细胞滋养层。结果：第一阶段：加入ＳＣＦ、ＴＰＯ、ＩＬ－６、ＩＬ－３、Ｅｐｏ、和Ｇ－ＣＳＦ，４ｄ后细胞大片坏死，仅加入２－巯基乙醇可形成胚胎体。第二阶段：加入ＳＣＦ和ＴＰＯ，细胞增殖缓慢，再加入条件培养液，发育３～４ｄ可形成ＣＤ３４＋的细胞集落。第三阶段：移至骨髓基质细胞饲养层后，发育为浆细胞。结论：胚胎干细胞在体外可定向分化为浆细胞。胚胎干细胞在早期发育不需要细胞因子，胚胎细胞的条件培养液可促使其向造血细胞发育。

G蛋白、蛋白激酶C和Na^+-H^+交换在内皮素-1诱导培养心肌细胞肥大反应中的作用

内皮系-1（ET-1）是一种强的生长因子，并诱导心肌细胞肥大反应。在本实验中，我们探讨了G蛋白、蛋白激酶C（PKC）和Na＋－H＋交换在ET-1诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大反应中的作用。ET-1（10－10～10－7mol／L）促进3H－亮氨酸掺入，增加细胞蛋白质的含量和心肌细胞的表面积，且呈剂量依赖性，它们的EC50分别为5．2×10-10，5．2×10－10和7．3×10－10mol／L。用蛋白激酶C（PKC）抑制剂，Staurosporin（2nmol／L）预处理心肌细胞，可完全阻断ET-1诱导的心肌细胞的这些肥大反应，而蛋白激酶C激动剂，佛波酸酯（PMA）（10－8～10－6mol／L）呈剂量依赖性促进心肌细胞的肥大反应。用Na＋－H＋交换抑制剂，氨氯毗咪（10-4mol／L）预处理心肌细胞，可抑制ET－1诱导的心肌细胞肥大反应，但不影响PMA诱导的心肌细胞肥大反应。百日咳毒素（150ng／ml）预处理心肌细胞，可明显抑制ET－1诱导的心肌细胞肥大反应。这些结果提示，ET-1诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大反应是与百日咳毒素敏感的G蛋白相耦联，蛋白激酶C和Na＋．H＋交换可能在ET-1诱导的心肌细胞肥大反应中是重要的细胞内信使转导途径。

PPD对豚鼠实验性哮喘气道炎症的作用

目的 探索结核菌素纯蛋白衍生物 (purifiedproteinderivative ,PPD)对豚鼠实验性哮喘气道炎症的作用。方法 实验采用 31只豚鼠 ,体质量 2 50g左右 ,分为对照组、卵蛋白 (ovalbumin ,OVA)致敏组和PPD治疗组。用OVA(Ⅲ级 )致敏豚鼠复制豚鼠哮喘模型。结果 经过OVA致敏的动物气道支气管肺泡灌洗液 (BALF)和肺组织中嗜酸粒细胞以及BALF中白细胞总计数有明显增加 ,PPD可不同程度地降低肺组织嗜酸粒细胞的气道浸润 ,并使BALF中炎性细胞总数降低。

成年大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞

目的 探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞（ａｄｕｌｔ ｒａｔ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ｒＭＳＣｓ）的体外 增殖和特异性诱导分化为神经元样细胞的能力。方法 分别采用３种不同的诱导方法体外定向诱导第三至五代的 ｒＭＳＣｓ向神经元样细胞分化，并分别应用相差显微镜观察神经元样细胞和免疫细胞组化检测神经元样细胞所表达 的神经元特异性标志［神经元特异性烯醇化酶（ｎｅｕｒｏｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｏｌａｓｅ，ＮＳＥ）和神经丝蛋白（ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ，ＮＦ）］及 星形胶质细胞特异性标志［胶质纤维酸性蛋白（ｇｌｉａ ｆｉｂｅｒ ａｃｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＡＰ）］，并进行神经元样细胞定量分析。结 果 所采用的３种定向诱导方法都能使ｒＭＳＣｓ特异性诱导分化为神经元样细胞，此神经元样细胞都能特异性地表 达出ＮＳＥ和ＮＦ，而不表达ＧＦＡＰ。经过定量计数分析发现用上述方法处理ｒＭＳＣｓ后出现ＮＳＥ阳性的细胞约为 ７５．５％±３．５％，出现ＮＦ阳性的细胞约为７７．２％±２．８％。结论ｒＭＳＣｓ能在体外扩增、传代，并能被定向诱导分 化为神经元样细胞。

17β-雌二醇下调血管平滑肌内皮素A型受体的表达

为进一步探讨雌激素对心血管的保护作用 ,实验在双侧卵巢去势大鼠模型和培养的血管平滑肌细胞(VSMCs)上 ,观察 17β 雌二醇 (E2 )对血管反应性及VSMCs增殖的影响 ,以RT PCR和Westernblot检测内皮素受体(ETAR)的表达。结果显示 :去势雌性大鼠血管对内皮素 (ET 1)的反应性明显增高 ,ETAR特异性受体阻断剂BQ12 3能完全阻断ET 1对VSMCs增殖的影响 ,E2 能明显抑制ET 1对VSMCs增殖的作用 ,RT PCR结果显示E2 能抑制ETARmRNA的表达 ,Westernblot进一步证实E2 能抑制ETAR蛋白表达 ;E2 受体阻断剂Tamoxifen能部份抑制ET 1对VSMCs的增殖及ETAR的mRNA和蛋白的表达。以上结果提示 :ET 1促VSMCs增殖的效应主要是由ETAR介导的 ,雌激素能通过下调ETAR来抑制ET 1对VSMCs促增殖的作用和血管对ET 1的反应 。

增强型体外反搏对冠心病患者血清一氧化氮和丙二醛的影响

目的：探讨增强型体外反搏对冠心病患者血清一氧化氮（ＮＯ）和丙二醛（ＭＤＡ）的影响。方法：采用硝酸盐还原酶法测定６９例冠心患者（反搏组３１例，药物组３８例）和３５名正常人血清中ＮＯ２－和ＮＯ３－的含量，以反映ＮＯ的浓度，同时检测血清中ＭＤＡ的含量，观察冠心病患者增强型体外反搏过程中及反搏后血清ＮＯ和ＭＤＡ的动态变化。结果：治疗前，反搏组和药物组冠心病患者血清ＮＯ含量（３８８８±１７０３）μｍｏｌ／Ｌ，（４０７８±７３８）μｍｏｌ／Ｌ明显低于正常人水平（７０８６±７６１）μｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜００５。经过３个疗程的增强型体外反搏治疗，患者血中ＮＯ含量明显增高（１０５４７±２５５８）μｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜００５，对照组经过６周药物治疗，血中ＮＯ也有一定程度的增高（４８５２±１００４）μｍｏｌ／Ｌ，但仍低于正常水平。与此相反，治疗前反搏组和药物组冠心病患者血清ＭＤＡ含量（５７４±０５３）ｎｍｏｌ／Ｌ，（５７１±０５９）ｎｍｏｌ／Ｌ明显高于正常人水平（３８７±０６５）ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜００５。经过３个疗程的增强型体外反搏治疗，患者血中ＭＤＡ含量明显降低（４０４±０６５）ｎｍｏｌ／Ｌ，?

丹参注射液诱导间质干细胞分化为神经元样细胞

【目的】丹参注射液体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞。【方法】采用Ficoll Paque液离心分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,分别采用含丹参注射液或硫代甘油等试剂的无血清达乐伯克改良必需基本培养基 (DMEM )诱导MSC分化为神经元 ,免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白(NF M )、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、巢蛋白 (nestin)的表达。【结果】成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 0 5× 10 6,15代可获得 (2～ 3)× 10 12 个细胞 ,细胞流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD44、CD90、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性。加入丹参或硫代甘油诱导后 ,MSC胞体收缩 ,突起伸出 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF M、nestin表达阳性 ,GFAP阴性。

成人骨髓间质干细胞定向诱导为脂肪细胞的研究

目的 :体外定向诱导成人骨髓间质干细胞 (MSC)分化为脂肪细胞。方法 :采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液 (1 0 77× 10 3 g/L)离心分离成人MSC ,体外扩增 ,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达 ,地塞米松、IBMX、胰岛素、indomethacin定向诱导MSC分化为脂肪细胞。油红O检测中性脂肪 ,光镜下细胞计数。结果 :成人骨髓间质干细胞在体外扩增 5代可获得 1× 10 8个细胞。流式细胞仪检测结果显示CD2 9、CD44、CD90、CD10 5、CD16 6表达阳性 ,CD14、CD34、CD45、CD11a为阴性。诱导 48h后 ,细胞内有脂滴出现 ,随着时间延长 ,脂滴逐渐增加并融合为脂泡。细胞由梭形转变为圆形或多角性。细胞计数结果显示 85 %以上细胞转变为脂肪细胞。结论 :成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为脂肪细胞。

热休克反应对缺血-再灌心肌保护作用的机制探讨

目的：探讨热休克反应对大鼠缺血-再灌心肌保护作用的可能机制。方法：SD大鼠，随机分为对照组及热休克组，动物经热休克处理恢复2或24h后复制缺血再灌模型并进行各项检测。结果：①热休克处理后心肌组织内SOD活性显著高于对照组，MDA含量则显著低于对照组。②热休克组心肌组织内乳酸及ATP含量均显著高于对照组，糖原含量则显著低于对照组。③热休克反应能诱导HSP70i的转录。结论：热休克反应对缺血-再灌心肌的保护作用与心肌能量代谢的改善、抗氧化能力的增强以及HSP70i的转录合成增强有关。

内皮素-1对培养新生大鼠心肌细胞原癌基因c-fos表达的诱导

本实验用无血清的培养新生大鼠心肌细胞，探讨内皮素１（ＥＴ１）对原癌基因ｃｆｏｓ表达的作用。结果显示：ＥＴ１可显著诱导ｃｆｏｓ的表达，其表达的高峰在３０ｍｉｎ，２ｈ恢复到正常水平，并呈剂量依赖性反应和被ＥＴＡ的特异性受体拮抗剂ＢＱ１２３所阻断；蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）激动剂ＰＭＡ可诱导ｃｆｏｓ表达，而ＰＫＣ抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ则可阻断ＥＴ１诱导的ｃｆｏｓ表达；钙通道阻断剂硝苯吡啶预处理心肌细胞对ＥＴ１诱导的心肌细胞的ｃｆｏｓ表达无明显的作用。这些结果提示，ＥＴ１诱导ｃｆｏｓ表达是通过ＥＴＡ受体介导的，ＰＫＣ在此过程中起重要作用。