细粒棘球蚴细胞系培育及其免疫研究

从细粒棘球蚴病人体内获取生发层和原头节作为培养材料 ,采用改良DMEM培养液和鼠胶原蛋白包被的培养瓶进行细胞培养 ,建立了适合人源细粒棘球蚴细胞体外培养的方法 ,并探讨棘球蚴细胞培养的制约因素。首次成功培育出一株人源细粒棘球蚴细胞系 ( 13G 5 ) ,至 1997年 3月 1日为止该细胞系已培养了 140d ,其间传了 2 1代。该细胞系主要以成纤维型细胞为主 ,呈贴壁生长 ;用该细胞系细胞接种于昆明 (Km)小鼠腹腔内 ,能形成具包囊样结构的类似包囊 ;接种鼠产生对囊液抗原的特异性抗体 ;ELISA能够检测出细胞系细胞代谢物中特异性抗原 ;该细胞系细胞和E .granulosus原头节、包囊液具有相同的EST酶带 ;使用该细胞系细胞的代谢物作为粗制抗原进行免疫预防接种 ,能使 6 0 %的Km小鼠获得完全抵抗E .granulosus感染的能力 ;该抗原能使 43 33%～ 77 42 %的包虫病人诊断出来。此外 ,检定了人源细粒棘球蚴染色体 ,染色体数为 14～ 18条 ,并首次对其进行了G 、C

日本血吸虫卵黄铁蛋白基因免疫小鼠的保护性研究

目的 研究日本血吸虫卵黄铁蛋白基因 DNA免疫小鼠诱导的保护性免疫力。方法 将构建的日本血吸虫卵黄铁蛋白基因真核表达重组质粒 p L XSN- Fer l经左后腿肌肉注射 BAL B/ c小鼠 ,共免疫 2次 ,间隔 2周。末次免疫后 5周以血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击感染后 6周计数成虫负荷及肝组织虫卵数和死亡卵百分比。设空质粒免疫组为对照组。结果 p L XSN- Fer l免疫小鼠 ,诱生的Ig G亚类主要是 Ig G2 a和 Ig G2 b;免疫组可产生较高水平的 Ig A和 IFN- γ应答。 p L XSN- Fer l免疫小鼠诱生一定程度的减虫率 34 .0 8% ,减卵率 36 .83% ,死亡卵百分比为 30 .13%。结论 p L XSN-Fer l免疫小鼠能产生较明显的保护性免疫力 ,值得进一步深入研究。

食管癌转移淋巴结放免显像定位的临床试验

目的:探讨放射免疫显像(radioimmunoimaging,RII)在食管癌转移淋巴结定位的临床应用。方法:1.131I标记抗人食管鳞癌单抗G9,形成标记化合物,在胸段食管鳞癌的术前病例,于纤维食管镜下,用纤镜专用注射针,在食管原发灶周围,粘膜下注射131IG9后行RII。2.完成RII后,对清扫淋巴结行放射性测定。结果:1.注药48h时RII在食管旁纵隔、贲门旁、胃小弯旁出现散在的细点状放射性浓集,拟为转移淋巴结所在。2.显像出现散在放射性浓集区域所清扫的淋巴结中,包含有转移淋巴结;无浓集区域,未发现转移淋巴结。3.全部有转移淋巴结的放射性比活度cpm/g均比无转移者高,且均数高出两倍多。结论:用131IG9在食管鳞癌行放射免疫显像,对转移淋巴结有定位作用。

数字图像处理技术在并殖吸虫自动分类中的应用研究

目的 建立并殖吸虫自动分类系统 ,并研制出并殖吸虫自动分类程序软件。方法 应用数字图像处理技术 (digi talimageprocessingtechnique)建立起并殖吸虫图像采集、处理及识别系统 ,并在此基础上研制出并殖吸虫自动分类程序软件。结果 得到高度清晰的并殖吸虫数字图像 ,分辨率高达 130多万象素 ;利用该技术能获并殖吸虫较为精确的分类参数实际值 ;研制出并殖吸虫自动分类程序软件 ,实际应用证明 :所建立的并殖吸虫自动分类系统能较好地对来自不同国家、地区的 7种并殖吸虫进行自动分类鉴定 ,准确率达 89.0 4%。结论 数字图像处理技术在

抗华支睾吸虫噬菌体抗体库的构建

目的 构建抗华支睾吸虫噬菌体抗体库 ,以期筛选出抗循环抗原的抗体组合。方法 应用噬菌体表面呈现技术 ,从感染华支睾吸虫病人淋巴细胞中提取总 RNA,逆转录成 c DNA后 ,用相应引物 PCR扩增出重链 Fd和轻链基因 ,经 Xho 和 Spel、Sac 和 Xba 双酶切 ,先后克隆入噬粒载体 p Comb3,再电转化大肠杆菌 XL1- blue菌株 ,辅助噬菌体 VCSM13超感染。结果 从感染华支睾吸虫病人淋巴细胞中扩增出约 70 0 bp重链 γ1 、γ3Fd段和轻链 κ、λ基因 ,分别和 p Com b3连接后成功导入 XL 1- blue,得到滴度为 7.5× 10 1 0 cfu/ ml,库容量为 5 .6× 10 6 噬菌体抗体库。结论 抗华支睾吸虫 Fab段噬菌体抗体库的构建 ,为进一步筛选抗华支睾吸虫循环抗原单克隆抗体奠定了基础。

食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体的制备及其特性的初步鉴定

【目的】制备抗食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体 ,用于寻找肿瘤的标志物和癌的病理诊断。【方法】以食管癌组织核基质为抗原 ,采用足垫法免疫Balb/c小鼠 ,运用杂交瘤技术建立分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株 ,制备食管癌细胞抗原片和食管癌冰冻切片 ,采用免疫组化检测并采用蛋白印迹法 (Westernblotting)分析 ,鉴定是否为特异性单克隆抗体。【结果】获得一细胞株 (1 7/E)能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株 ,1 7/E能与食管癌细胞和其他 10种癌细胞的核仁反应 ,不与正常食管上皮细胞核仁反应。Westernblotting分析表明 ,1 7/E与食管癌组织核基质 41ku处有一反应带 ,与正常食管组织核基质无反应。【结论】 1 7/E可能是对食管癌等多种肿瘤细胞核仁抗原的特异性单克隆抗体 ,为深入研究肿瘤细胞核仁抗原的生物学特性及肿瘤病理诊断提供了有效的制剂 ,并具开发的潜在价值。

登革病毒(NGC株)C与prM全长基因的扩增与克隆

目的 从登革病毒 (NGC株 )中快速分离基因组RNA ,RT -PCR扩增及克隆C和 prM全长基因 ,从而为研究蚊虫细胞对登革病毒的细胞内免疫研究奠定基础。方法 以Trizol试剂从C6 / 36细胞培养上清中提取基因组RNA ,RT -PCR扩增全长C和 prM基因 ,T -A重组入pGEM -T载体 ,重组质粒的双酶切、PCR与测序鉴定。 结果与结论 应用Trizol试剂从蚊细胞培养液上清中快速分离到高纯度和完整登革病毒RNA基因组 ,成功扩增与克隆出全长登革病毒C和

食管癌转移淋巴结放免显像定位的研究

目的：为放射免疫显像在诊断食管癌淋巴结转移中的应用，提供基础研究支持。方法：①免疫组化(LSAB法)测定不同组织冷冻切片和抗人食管鳞癌单抗G9的反应；②125I标记G9，形成标记化合物，在荷食管癌裸鼠腹腔注射125I-G9后的连续3天内，测定各主要组织、器官的放射性。结果：①LSAB显示，食管癌原发灶和转移淋巴结呈阳性反应，正常食管和无转移淋巴结阴性。②125I-G9在裸鼠体内分布显示，肿瘤组织的放射性计数均明显高于其它器官/组织；各器官/组织的T/NT值在2～7之间；放射自显影的结果也显示，肿瘤部位有大量的放射性浓集。结论：①单抗G9能选择性定位于食管癌原发灶与转移淋巴结的癌细胞胞膜。②125I-G9在荷食管癌裸鼠有肿瘤组织导向作用，显像效果良好，提示放射免疫显像在食管癌转移淋巴结定位，有潜在的临床应用前景。

HIV/AIDS患者和正常人T淋巴细胞亚群、表型及其相关性的比较研究

目的 探讨HIV/AIDS患者T淋巴细胞亚群、表型和CD4 凋亡细胞之间的相关性及其临床意义。方法 用流式细胞仪法对HIV/AIDS患者和年龄相配的HIV阴性人群的T淋巴细胞亚群、表型和CD4 凋亡细胞的绝对和相对计数进行测定 ,比较这些指标在两组人群中的差别和分析各项指标之间的相关性。结果 在HIV/AIDS患者组 ,CD2 5细胞表型与CD4 计数呈正相关 ,HLA DR细胞表型的绝对计数也与CD4 计数呈正相关 ,但其百分率却与后者无相关性。与对照组比较 ,患者组的CD4 和CD2 5双阳细胞 (CD+ 4、CD+ 2 5)百分率降低而总体HLA DR水平升高。在患者组CD4 细胞凋亡百分率与CD4 计数呈负相关。结论 与CD4 计数和百分率以及CD4 和CD8的比值相结合 ,CD2 5水平有助于判断HIV感染的进程和判断疗效。CD4细胞凋亡可能有助于判断晚期艾滋病。

蛔虫变应原致喘豚鼠后肺泡灌洗液中炎性细胞的动态变化

目的 动态观察用人蛔虫变应原激发豚鼠哮喘后 ,支气管肺泡灌洗液 (BALF)中炎性细胞总数及细胞分类的动态变化 ,探讨蛔虫变应原致喘机理。方法 用人蛔虫变应原激发豚鼠哮喘后 1h、2 4h、72h ,观察BALF炎性细胞总数及细胞分类的动态变化。结果 在激发后 1h、2 4h、72h阳性激发组豚鼠BALF中白细胞总数分别为 72 8± 6 3,10 0 2± 78,12 74± 12 2 (单位为 :细胞数 /ml) ,远高于阴性对照组 (分别为 4 84± 4 4 ,4 6 6± 6 1,4 98± 73)和佐剂对照组 (分别为 4 88± 75 ,5 13± 10 5 ,4 93± 78) ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。阳性激发组中BALF内嗜酸性粒细胞 (EOS)分别为 176± 32 ,30 6± 4 7,2 76±4 9 ,均比正常阴性对照组和佐剂对照组增多 ,具有显著性意义 (P <0 .0 1)。而阳性激发组 72hEOS胞浆中嗜酸性颗粒数目远远低于 2 4h组 ,细胞核浆比增加 ,表明EOS已经大量脱颗粒。结论 用蛔虫变应原诱发豚鼠哮喘后 ,使得大量炎性细胞渗出、浸润 ,对气道上皮形成炎性损伤 。

放射免疫显像在食管癌分期中的应用

目的探讨放射免疫显像(RII)在食管癌分期的应用。方法1LSAB法测定组织切片和抗人食管鳞癌单抗G9的反应;2125I标记G9,在荷食管癌裸鼠腹腔注射125IG9后的连续3d内,测定各主要组织、器官的放射性;3食管鳞癌术前经纤维食管镜在原发灶周围黏膜下注射131IG9后行RII;4对清扫淋巴结行放射性测定。结果1LSAB显示癌原发灶和转移淋巴结呈阳性,正常食管和淋巴结阴性;2125IG9在裸鼠体内分布显示,肿瘤组织的放射性计数均明显高于其它器官/组织;3镜下注药48h时RII在食管旁纵隔、贲门旁、胃小弯旁出现散在的细点状放射性浓集,浓集区域所清扫的淋巴结中,包含有转移淋巴结;无浓集区域,未发现转移淋巴结;4全部有转移淋巴结的放射性比活度均比无转移者高,且均数高出两倍多。结论1单抗G9能选择性定位于食管鳞癌细胞膜;2125IG9在荷食管癌裸鼠有肿瘤组织导向作用,显像效果良好;3用131IG9在食管鳞癌行RII,对转移淋巴结有定位作用可作为cTNM分期的选择手段。