缺损运动神经元的大鼠脊髓内胚胎脊髓移植物的存活与生长

SD大鼠于出生24h内行左侧坐骨神经钳压术,造成左侧腰段脊髓前角运动神经元缺损。5～12周后,作为脊髓移植的受体鼠。供体为胚龄13～14d的SD大鼠胚胎,取其脊髓腹侧组织块作为移植物,植入受体鼠左侧腰段脊髓的背外侧部。将受体鼠右侧带神经的坶长伸肌移放到脊椎旁,神经的断端插入胚胎移植物处。术后动物存活6～8周,行组织学(包括电镜)、AChE组织化学、ChAT免疫组织化学和HRP逆行追踪等观察。结果显示:大多数移植物能在受体鼠内存活,其某些部分与受体组织形成较好的融合。移植物内可见神经元,有些较为幼稚。HRP阳性神经元出现在移植物内或毗邻移植物的受体组织中。胆碱能神经元分布在移植物内。以上结果表明,移植的胚胎脊髓运动神经元在受体内不仅可以存活,而且有继续分化、迁移和支配移植的靶肌肉的可能。

碱性成纤维细胞生长因子对移植的胚胎脊髓组织存活与生长的影响

用胚胎脊髓腹侧组织块植入缺损运动神经元的大鼠脊髓内;同时把带有神经的拇长伸肌移放到脊髓移植物旁.其神经的断端插入移植的部位.应用碱性成纤维细胞生长因子作用脊髓移植物,经HRP逆行追踪。

胰岛素对大鼠移植的胚胎脊髓组织存活与生长的影响

用ＨＲＰ逆行追踪技术和体视学方法，探讨了胰岛素对移植在缺损运动神经元的脊髓内的胚胎神经元存活与生长有无促进作用。将１３～１４ｄ胚龄大鼠脊髓腹侧组织块，移植到受体大鼠左侧腰段缺损运动神经元的脊髓背外侧部。同时将受体鼠右侧带神经的 长伸肌移在左侧腰段脊椎旁，使其神经断端插入脊髓移植物的同一位置内。胰岛素组的胚胎移植物及覆盖其表面的硝酸纤维素膜，均经胰岛素生理盐溶液浸泡过，对照组仅用单纯生理盐溶液浸泡。术后大鼠存活６周。在移植的肌肉内注入ＨＲＰ作逆行追踪。结果：１．胰岛素组胚胎移植物的体积为０．４２５２±０．０７３６ｍｍ３；对照组的为０．１３８３±０．０２９６ｍｍ３。２．胰岛素组移植物神经元胞体体积为０．０１７２±０．００４１ｍｍ３；对照组的为０．００３０±０．００１１ｍｍ３。３．胰岛素组移植物神经元数目为５５１８±１３４３个；对照组的为１２１４±４３７个。４．胰岛素组移植物内和移植物邻近的受体脊髓组织中，可见ＨＲＰ阳性神经元，而对照组则未观察到。以上结果提示：胰岛素能促进移植的胚胎脊髓神经元的存活与生长；有些神经元还支配了移植的肌肉，其中一些神经元很可能迁移到了受体脊髓组织中。

纹状体源性神经营养因子治疗帕金森病大鼠模型的实验研究

【目的】探讨纹状体源性神经营养因子 (SDNF)在帕金森病 (PD)治疗方面的应用前景。【方法】建立 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)诱导的大鼠“半”PD模型 ,进行早期一次性注射SDNF ,以及损伤两周后重复注射SDNF ,以观察SDNF对模型鼠的治疗作用。【结果】早期一次性注射SDNF能明显阻止中脑黑质多巴胺 (DA)神经元数量的减少。而损伤两周后重复注射SDNF ,虽不再能改变DA神经元的数量 ,但能降低模型鼠由阿朴吗啡 (APO)诱导的旋转 ,以及增加损伤侧纹状体内DA含量和降低HVA(高香草酸 ) /DA值。【结论】SDNF对 6 OHDA诱导的中脑DA神经元的变性有阻止作用 ,同时对残留DA神经元的功能有增强作用。

神经前体细胞的分离培养及绿色荧光蛋白基因的转染

【目的】为替换中枢神经损伤后死亡的神经元提供方便追踪观察的神经前体细胞。【方法】应用含碱性成纤维生长因子 (bFGF)的无血清培养技术 ,从新生大鼠海马组织分离培养神经前体细胞 ,并借助免疫组织化学技术检测这些细胞巢蛋白 (nestin)的表达以及细胞分化后神经丝蛋白 (NF)和胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。采用磷酸钙法将绿色荧光蛋白(GFP)基因转染目的细胞内。【结果】从海马组织分离的细胞具有分裂能力 ,能表达nestin。分化后一些细胞能表达NF ,而另一些细胞则表达GFAP。GFP基因修饰的细胞能发出荧光。【结论】从海马组织分离的细胞能表达nestin ,属于神经前体细胞 ,它们具有明显的增殖能力。有些神经前体细胞已经分化为神经元和神经胶质细胞。GFP基因已成功转染到神经前体细胞内 ,并表达了GFP。

纹状体和中缝核外植块促进体外培养的中脑多巴胺神经元的发育

为了探讨神经元与其靶组织之间的相互作用及作用因素，建立了不同时期的纹状体外植块与１４ｄ大鼠胚胎中脑黑质神经元联合培养；１４ｄ大鼠胚胎中缝核外植块与黑质神经元联合培养。结果表明，生后２周、新生及１４ｄ大鼠胚胎纹状体外植块和１４ｄ大鼠胚胎中缝核外植块，对中脑黑质多巴胺神经元的形态发育有明显促进作用，其中包括长突起神经元数目和神经元突起长度的增加。上述３个时期的纹状体外植块，对中脑黑质多巴胺神经元的作用无显著性差异，而成年大鼠纹状体外植块则无作用。在形态学观察的基础上，还检测了中脑多巴胺神经元对外源性多巴胺的摄取力，１４ｄ大鼠胚胎纹状体和中缝核外植块能使中脑多巴胺神经元的３Ｈ－多巴胺的摄取力明显增高。以上结果初步表明，一定时期的纹状体和中缝核，对中脑黑质多巴胺神经元的发育有促进作用，并提示这种作用可能是通过释放神经营养因子而实现的。

甲苯胺蓝染色法显示体外培养的神经突起

显示体外培养的神经突起的常用技术之一是经典Bodian蛋白银染色法.我室曾对此法进行过改良,不仅获得满意的染色效果,而且成功率高.但此法与其它银染技术一样,染色时间长,需要在37℃恒温箱内孵育24小时以上.本文介绍一种简便的甲苯胺蓝染色法,只需数小时就可达到类似上述的染色效果.在染色标本数量较多的情况下,此法尤为适用.1 材料和方法1.1 将盖片培养物(涂有胶原基质的盖片及附着在其基质上培养的鸡胚背根节神经突起生长晕)放入10%中性福尔马林溶液内固定1小时.1.2 自来水冲洗15分钟,用蒸馏水洗1次.1.3 把盖片培养物放入盛有1%甲苯胺蓝溶液的染色皿内,室温下染色2～4小时.染液的配方是:硼砂(Bo-rax),1克;甲苯胺蓝(Toluidine blue),1克;蒸馏水,

胶质细胞与神经再生

神经再生是神经科学研究中的一项重要课题,也是临床医学上亟待解决的问题之一。由于神经细胞是体内高度分化的细胞,具有特殊形态结构和功能,而且它又属于有丝分裂后细胞(post-mitotic cell),即在发生过程中,一旦形成它就失去了分裂能力。因此,其再生问题远较其他组织复杂和困难,已知只限于神经纤维能再生,即神经元轴突的再生长^(〔1〕)。

哺乳动物脊髓损伤后的可塑性研究

哺乳动物脊髓损伤后的可塑性研究曾园山，吴良芳（中山医科大学组织学胚胎学教研室神经科学研究室，广州５１００８９；华西医科大学组织学研究室）通常认为，成年哺乳动物中枢神经系统（ＣＮＳ）受损伤后难以再生，甚至不能再生。而近３０多年来的研究却发现，在成年哺乳...

纹状体源性神经营养因子的分离纯化和生物鉴定

纹状体是中脑黑质多巴胺神经元的主要靶组织，我们先前的研究曾指出：纹状体提取液能增强体外培养的中脑黑质神经元的存活和发育。本研究是在此基础上进一步应用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶层析、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）、反相高效液相色谱（Ｒ－ＨＰＬＣ）、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等的分析，结合生物鉴定，从纹状体提取液中分离出纯化的活性因子——纹状体源性神经营养因子。该因子的分子量为１１．５ｋＤ，等电点为９．３９，它能促进体外培养的１４ｄ龄大鼠胚胎中脑黑质神经元的存活和神经突起的生长，以及对外源性多巴胺的摄取，其作用具有量依赖性关系。

纹状体提取液增强体外培养的中脑黑质神经元的发育

制备新生２ｄ龄大鼠纹状体提取液及其不同分子量的组分，用快速自动比色微量分析法检测它们对体外培养的１４ｄ龄大鼠胚胎中脑黑质神经元的影响。结果表明，纹状体提取液有支持中脑黑质神经元生存及增强其活性的作用，而且具有剂量依赖关系，其最适浓度为１．２５μｇ／ｍｌ。纹状体提取液还能促进中脑黑质神经元对２Ｈ－ＤＡ和３Ｈ－ＧＡＢＡ的摄取，同对照组相比，有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。通过检测纹状体提取液小于１０ｋＤ、１０～３０ｋＤ和大于３０ｋＤ３种不同分子量组分对中脑黑质神经元的作用，证明有活性的部分是分子量为１０～３０ｋＤ的组分。

雪旺细胞移植对中枢神经再生的影响

雪旺细胞是一种有多项生理功能的神经胶质细胞。本文在作用机制、培养方法及其对神经元轴突再生和功能修复方面 ,简述了它对中枢神经再生的促进作用及其研究进展 ,为进一步应用雪旺细胞治疗中枢神经损伤提供资料。

中缝核提取液对体外培养的中脑黑质神经元存活和生长的影响

中脑黑质是中缝核５－ＨＴ神经元最早期的靶组织之一。为了分析神经元对其靶细胞的作用是受某种特异性蛋白或神经营养因子的影响，本文用中缝核提取液作用于体外培养的中脑黑质神经元，证明了该提取液能促进中脑黑质神经元的存活和生长，其活性部分是分子量大于３０ｋＤ的组份，经ＳＤＨ－聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳，呈现一条主带，分子量在４３ｋＤ左右。

不同靶细胞在基因治疗中枢神经损伤中的应用

近年来基因治疗逐步运用到CNS损伤及再生的研究中 ,获得理想的靶细胞是CNS基因治疗的一个关键问题。一般认为能用于基因修饰并植入CNS内进行基因治疗的理想靶细胞应具备以下几个要素 :容易被修饰、具有表达和分泌转基因产物的能力、具有在体外及移植后在宿主内生存的能力 ,以及基因修饰前已经具有促神经元生长的固有特性等等。目前运用于CNS基因治疗的靶细胞主要是雪旺细胞、成纤维细胞、星形胶质细胞、神经干细胞和成肌细胞。本文对这些靶细胞本身在中枢神经再生方面的作用。

脊髓移植在替换缺损运动神经元中的作用

胚胎脊髓移植物神经元能够在缺损运动神经元的受体脊髓内存活；有的已分化为运动神经元，定向迁移到缺损运动神经元的区域，替换那里的毁损神经元，并发出神经纤维支配移植的靶肌肉。这种脊髓移植可为治疗一些脊髓病、伤提供有用的线索。

神经干细胞的特性及其在修复脊髓损伤中的应用前景

通常认为 ,成年中枢神经系统 (centralnervoussystem ,CNS)损伤后其自身的修复能力是有限的 ,死亡的神经元是不能由CNS自身产生新的神经元或邻近的神经元来替换。然而 ,近年来神经干细胞 (neuralstemcells,NSCs)的研究已改变了这些观点 ,现已发现CNS的一些区域终生存在产生新神经元的能力。此外 ,通过移植神经干细胞来修复损伤的神经系统是有可能的。

阿片类物质对神经元生长、发育及其可塑性的影响

阿片类物质及其受体可能通过一些复杂的机制调控着神经系统神经元的发育，使其按一定的数量和一定的时程分化、生长和成熟。而且，阿片类物质对哺乳动物中枢神经系统可塑性变化有一定的促进作用。本文可为进一步探讨阿片类物质在神经系统发育及可塑性方面所起的作用提供一些有用的线索。

巨噬细胞条件培养基神经营养活性成分的分离、纯化和鉴定

用快速自动比色微量分析法检测巨噬细胞条件培养基（ＭφＣＭ）对体外培养的生后７ｄＳＤ大鼠小脑皮质神经元的作用。结果表明，ＭφＣＭ内分子量大于３０ｋＤ的组分（加入量４０μｌ／孔）对神经元（细胞密度１×１０＾６／孔）具有明显的神经营养活性，与对照组相比有显著性差异（Ｐ〈０．０１）。盖片培养法证明，此组分还具有促神经元突起生长的作用。另外，把ＭφＣＭ进行Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶层析及生物活性鉴定，

巨噬细胞及其中枢神经营养作用

巨噬细胞(Macrophage,MΦ)在体内的分布及功能相当广泛和复杂,特别是近几年来相继揭示了它的许多未被了介的功能,例如我们实验室通过对脑创伤组织提取液的研究,发现巨噬细胞有对中枢神经元的神经营养作用,对巨噬细胞的生理功能及其与神经元的相互关系提出新的见解和认识。