病毒性肝炎临床诊治的基础与应用研究

病毒性肝炎是我国最重要的传染病之一，可导致严重慢性肝病，并且与肝细胞癌密切相关。近５年来，我们改进肝炎病毒核酸诊断技术，建立热变性ＨＣＶＲＮＡ直接扩增技术、ＲＴＰＣＲ夹心斑点杂交技术、ＨＢＶ前Ｃ区点突变检测技术，以及克隆ＨＣＶ、ＨＧＶ基因序列。此外，对广东甲型肝炎流行病学调查与输血传播ＨＣＶ、ＨＧＶ及ＴＴＶ人群感染的情况、慢性ＨＢＶ感染者病情反复发作的因素、ＨＣＶ与肝癌关系、干扰素、Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ的临床治疗观察、基因治疗的应用基础研究，以及中西医结合治疗病毒性肝炎等作了一系列研究。这些技术的改进与研究成果，迅速应用到临床防治工作中，对当前病毒性肝炎诊治工作起到积极的推动作用。

重组HBsAg的纯化及动物免疫原性研究

用乙型肝炎病毒(HBV)DNA转染工程细胞株MT-5,收获培养上清液,经超过滤浓缩、PEG沉淀和3次超速离心,得到纯化的HBsAg。经SDS-PAGE银染色后,纯化的HBsAg显示两条多肽,分子量分别为23k和27k,与血源HBsAg的多肽成分相同,为HBsAg的两条特异性多肽。经PAGE银染色结果显示,纯化的HBsAg中杂蛋白含量符合疫苗制备要求。用上述方法提纯HBsAg,回收率可达44.1％以上。 将纯化的HBsAg吸附于氢氧化铝佐剂,免疫Balb/c小鼠,并与血源HBsAg对照,抗体半数阳转剂量(ED50)分别为0.501μg和0.832μg,说明基因工程HBsAg的免疫原性似优于血源HBsAg。

地高辛素标记乙型肝炎病毒DNA探针的制备及应用

采用随机引物法以地高辛素标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(dig-II-dUTP)标记克隆的乙型肝炎病毒(HBV)DNA adw/pAM6,制得高特异性和高敏感性的HBV DNA探针。用于斑点杂交检测HBV DNA,最大敏感度为0.lpg。用于检测HBsAg阳性血清,HBV DNA阳性率为82.7％(91/110),与市售同类药盒相比,阴阳结果一致,与缺口翻译的生物索探针相比,检出率有显著提高(P<0.01)。用于肝癌组织与血清HBV DNA研究,与既往用~32P探针所得结果相符。该探针操作简单、使用方便、出结果快速、价格便宜又无需特殊设备,故适于在临床单位尤其是基层医疗单位应用推广。

乙型肝炎疫苗在免疫功能低下人群中的应用

免疫功能低下的人群易受乙型肝炎病毒感染,且不易恢复,所以对这类人群的预防更为重要。本文介绍了乙型肝炎疫苗在肾功能衰竭、肿瘤、Down氏综合征以及其它免疫功能低下病人中的应用剂量、方法和预防效果。