NGF/GDNF基因修饰神经干细胞植入AD模型鼠脑内的存活、分化及表达

目的 观察NGF GDNF基因修饰神经干细胞 (NGF NSC和GDNF NSC)在AD模型鼠脑内的存活、分化及基因产物的表达。 方法 将BrdU标记的NGF NSC和GDNF NSC单独和联合移植入穹窿海马伞切断的大鼠侧脑室内。移植后 3周 ,用免疫组织化学方法对脑切片进行BrdU、Nestin、GFAP、NF、NGF及GDNF单标或双标染色。 结果 脑室内见到大量BrdU阳性细胞。部分移植细胞向脑实质迁移 ,在切口周围、穹窿海马伞、海马、胼胝体、隔区、室管膜下区及血管壁旁均可见到BrdU阳性细胞。在皮质和切口周围可见较多的BrdU +GFAP双标细胞 ;在海马内可见较多的BrdU +NF双标细胞 ;在脑室内 ,两者均可见到。在脑室、皮质和海马等处均检测出BrdU +NGF和BrdU +GDNF免疫双标阳性细胞。 结论 NGF GDNF基因修饰NSC能在宿主脑内较好地存活 ,并能分化成神经元和星形胶质细胞 。

NGF和GDNF基因重组逆转录病毒体外感染神经干细胞及其鉴定

目的 探讨神经干细胞 (NSC)直接作为基因靶细胞能否被重组逆转录病毒感染以及感染后目的基因的表达。 方法 分别用NGF和GDNF基因重组逆转录病毒上清液感染NSC 2d ;G418筛选后加入bFGF扩增培养 ;取感染后的NSC培养液 (NGF GDNF条件培养液 )培养PC12细胞和中脑腹侧神经元 ;用免疫组织化学染色方法检测中脑腹侧多巴胺神经元的形态改变以及感染后NSC对目的基因的表达。 结果 经G418筛选后 ,约 5 0 %感染NGF和GDNF基因重组逆转录病毒的NSC呈G418抗性 ;这些感染后的NSC开始分化 ,分裂球向四周长出放射状突起 ,部分细胞沿突起向外迁移生长 ;感染NGF基因的NSC呈星形 ,胞体较大 ,突起较粗。感染GDNF基因的NSC呈梭形 ,胞体较小 ,突起较长。经NGF条件培养液培养的PC12细胞 ,数量增多 ,突起明显变长。经GDNF条件培养液培养的中脑多巴胺神经元 (TH阳性细胞 )其胞体亦增大 ,突起伸长。大部分G418抗性的NSC出现NGF和GDNF免疫染色。 结论 神经干细胞可直接作为基因靶细胞 ,能被NGF和GDNF基因重组逆转录病毒有效感染而表达和分泌有生物学活性的NGF和GDNF。

神经生长因子/胶源性神经营养因子基因修饰神经前体细胞单独和联合移植促进阿尔茨海默病模型鼠海马胆碱能纤维网的重建

目的 :观察神经生长因子 (Nervegrowthfactor,NGF) /胶源性神经营养因子 (Glialcellline derivedneurotroph icfactor,GDNF)基因修饰神经前体细胞 (Neuralprogenitorcell,NPC)单独和联合移植对阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease,AD)模型鼠海马胆碱能纤维网的促重建作用。方法 :将NGF/GDNF基因修饰的NPC单独和联合移植入FF切断的大鼠侧脑室内。移植后三周取海马切片进行AchE纤维组织化学染色。结果 :CA1区和齿状回的NGF组、GDNF组和NGF +GDNF组的AchE纤维数分别为 3 2 %和 5 0 %、1 8%和 2 4 %、2 4 %和 5 8% ,明显高于损伤组(4 %和 6% )和NPC组 (7%和 9% ) ,P均 <0 .0 1 ;NGF组也高于GDNF组 (P <0 .0 5和P <0 .0 1 )。结论 :NGF/GDNF基因修饰的NPC单独和联合移植均能不同程度地促进AD模型鼠海马胆碱能纤维网的重建 ,其中NGF组和NGF