《基础化学》阶梯式课堂教学模式的探索

根据教育心理学和教学法理论,以"三为主"为指导思想,遵循四个教学设计原则,将教材思路、学生思路与教师思路结合在一起,构建由四个阶梯组成的阶梯式课堂教学模式,探索有利于提高学生素质和培养学生能力的课堂教学模式.在整个教学过程中,体现前有孕伏、中有突破、后有发展的特点,突出以教师为主导,学生为主体,掌握知识和应用知识为主线的教学思维,优化课堂教学过程,提高课堂教学效果.

注重医学生在教学改革中的主体作用

通过多种形式的教学改革活动,增强了医学生参与教改的主体意识,充分发挥了他们的学习潜力和创新能力,提高了学习效率,并有利于培养学生较高的思想道德素质、较好的科学素质和较完善的身心素质.

银杏内酯B对谷氨酸诱导脑皮质神经元凋亡及Ca^(2+)超载的影响

目的:观察银杏内酯B对谷氨酸诱导培养脑皮质神经元凋亡的拮抗作用,并探讨这种作用与神经细胞内游离Ca2 + 浓度改变的关系。方法:采用改良的方法原代培养胎小鼠脑皮质神经元,用噻唑兰(MTT)法检测神经元的存活情况;细胞凋亡采用形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳法和Hoechst332. 5 8核染色方法进行分析;用Fura - 2 /AM荧光指示剂法测定细胞内Ca2 + 浓度。结果:谷氨酸(0 .8mmol/L)能诱导神经细胞凋亡和胞内Ca2 + 超载,银杏内酯B(10 - 2 5 0 μmol/L)能减轻谷氨酸所致的细胞损伤,表现为神经元存活率提高,细胞形态的恢复和DNA断裂减少。结论:银杏内酯B可拮抗谷氨酸所致的神经细胞毒性作用,这可能与其能竞争PAF受体并降低神经细胞内[Ca2 + ]从而抑制谷氨酸诱导的神经元凋亡有关。

蛇葡萄素体内外对小鼠B16黑色素瘤侵袭和转移的抑制作用

目的 :研究蛇葡萄素对B16小鼠黑色素瘤体内外抗侵袭和转移的作用。方法 :B16细胞由尾静脉注入C5 7BL/ 6小鼠体内建立实验性肺转移模型 ,蛇葡萄素以 3个剂量从接种瘤细胞前一天腹腔给药 ,连续 18d ,于停药后第 2天观察肺转移瘤灶数。B16细胞经蛇葡萄素处理 3d ,用具有聚碳酸酯和重建基底膜 (Matrigel)的Tran swell小室侵袭模型 ,研究药物处理后细胞侵袭、趋化运动、粘附能力的改变。结果 :剂量为 15 0 ,2 0 0 ,2 5 0mg·kg-1的蛇葡萄素可抑制小鼠肺转移瘤灶形成 ,与溶剂对照组比 ,抑制率分别为 30 .97% ,4 0 .5 8% ,6 1.16 % (P <0 .0 5 )。经 2 0 ,4 0 ,80 μmol·L-1各浓度蛇葡萄素处理后 ,对B16细胞侵袭人工基底膜的抑制率分别为 36 .0 6 % ,5 9.5 8% ,79.0 9% (P <0 .0 1) ;对细胞的趋化运动抑制率分别为 5 1.5 9% ,5 6 .5 1% ,6 6 .75 % (P <0 .0 1) ;显著降低B16细胞与基质成分层粘连蛋白、纤维粘连蛋白及Matrigel的粘附作用。 结论 :蛇葡萄素具有抑制黑色素瘤的侵袭和转移的作用。

无偿献血人群中已育女性HLA抗体筛查及特异性分析

目的了解广州地区已育女性献血者中HLA-Ⅰ和Ⅱ类抗体的分布和特异性,评估这类献血者血液及其成分所含HLA抗体引起免疫性输血不良反应的风险。方法随机收集广州地区已育女性献血者标本343(人)份、未育女性献血者标本140(人)份,利用Lifecodes LifeScreen Deluxe(LMX)筛查标本的HLA抗体,阳性者再分别利用LIFECODES LSATMClassⅠ和LIFECODES LSATMClassⅡ鉴定抗体特异性。结果广州地区已育女性献血者中,抗-HLA阳性率25.07%(86/343),而未育女性献血者中抗-HLA阳性率3.57%(5/140)(P<0.05)。已育女性献血者中HLA-Ⅰ类抗体出现频率较高的分别是抗-A*11 28.8%(17/59)、抗-B*07 42.4%(25/59)和抗-Cw*07 20.3%(12/59),HLA-Ⅱ类抗体出现频率最高者是抗-DRB1*04 40.4%(19/47)。结论已育女性献血者HLA抗体出现的频率较高,这类献血者的血浆和单采血小板用于临床后势必增加HLA同种免疫反应的风险,应引起高度重视。

微全分析系统专用微型电源的研制

芯片毛细管电泳(Chip-CE)是当前微全分析系统(μ-TAS)中最活跃的领域和发展前沿.Chip-CE包括微芯片、高压电源和检测器等3个主要部分.除微芯片外,高压电源和检测器2个部分仍然体积较大,是μ-TAS整机微型化有待解决的问题.……

广州市群体性食物中毒事件中诺如病毒分子流行病学分析

【目的】初步了解广州市社区食物中毒事件中诺如病毒的分子流行病学情况。【方法】在2003年10月至12月期间,从5个不同流行现场,采集急性期胃肠炎患者的粪便标本76份,用RT-PCR对标本中的诺如病毒核酸进行扩增,将阳性产物回收、纯化并测序,与GenBank中的相关序列进行比较分析,绘制系统发生树。【结果】76份样品中共检出阳性36份,阳性率为47.37%。从5个流行现场获得5个代表株,分别为DX1106、PY1106、HM1121、PY1202和HD1219,其中DX1106与PY1202的序列完全一致,而其他毒株间的序列同源性在35%～85%之间。系统发生树分析发现5个代表株都属于GⅡ组诺如病毒,但分属于不同的基因型。其中DX1106与PY1202株属于GⅡ-3型,HM1121和HD1219株属于GⅡ-4型,PY1106株介于GⅡ-6、7、8型之间,尚不能确定型别。【结论】广州市存在诺如病毒引起的食物中毒,流行优势株为GⅡ组,但其基因型别存在多样性。

脂肪组织中IRS-1相关的PI3K活性在多囊巢综合征胰岛素抵抗中的作用

【目的】探讨多囊卵巢综合征(PCOS)脂肪组织胰岛素受体底物I相关的磷脂酰肌醇3激酶(IRS-1-Associcrted-PI3K)的活性在PCOS发病中的作用。【方法】PCOS患者和对照者根据体质量指数(BMI)分为PCOS肥胖组、PCOS非肥胖组、肥胖对照组和非肥胖对照组,各12例,采用免疫沉淀、薄层层析、放射自显影半定量检测脂肪组织IRS-1相关的PI3K活性。【结果】脂肪组织中IRS-1-Associated PI3K活性在PCOS肥胖组为55%±24%,较非肥胖对照组84%±16%明显降低(P<0.001);肥胖对照组为46%±22%,PCOS非肥胖组为71%±26%,均较非肥胖对照组明显降低(P<0.001和P<0.05),PCOS肥胖组和肥胖对照组之间以及PCOS肥胖组和PCOS非肥胖组之间的差异均无显著性意义(P>0.05)。【结论】PCOS肥胖组和PCOS非肥胖组脂肪组织IRS-1相关的PI3K活性均较非肥胖对照组明显减弱,可能抑制胰岛素受体后的信号传导,并与PCOS胰岛素抵抗的发生有关。

毛细管电泳高频电导检测器的研制

设计了一种新的毛细管电泳检测器．根据高频电导滴定原理，将电导电极做成两个金属圆筒套于分离毛细管外，并向两个电极施加高频电压．经毛细管分离后的组分流过两个电极之间时，高频电流发生变化，得到毛细管电泳图．该检测器具有应用范围广、操作简便及重现性好等优点，已初步应用于混合无机离子的测定．

离心机训练后+Gz耐力相关基因的分离与鉴定

为探讨离心机训练提高正向加速度 (forwardacceleration ,+Gz)耐力的分子机制 ,应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)和斑点杂交技术筛选离心机训练 12d后测试高耐力组 (耐受 + 16Gz)与未训练对照组大鼠全脑的差异表达基因 .将获得的序列表达标签 (expressedsequencetag ,EST)进行特异性鉴定后 ,获得 7个上调EST ,其中 5个为已知基因的部分序列 ,2个为新EST ,它们的表达量均在训练 6d组最高 ,表明离心机训练可明显影响大鼠全脑特定基因的表达水平 ,这些基因表达水平的变化很可能与离心机训练提高机体

蛇葡萄素抗黑色素瘤侵袭和转移的作用

背景与目的:我们先前的研究发现蛇葡萄素在体外对几种人肿瘤细胞以及在体内对小鼠移植性B16黑色素瘤具有抑制作用。为了进一步研究其抑制肿瘤转移的作用,我们研究了蛇葡萄素在体内外抗B16小鼠黑色素瘤侵袭和转移的作用。方法:B16细胞由尾静脉注入C57BL/6小鼠体内,建立实验性肺转移模型,蛇葡萄素以3个剂量从接种瘤细胞前一天腹腔给药,连续18天,于停药后第2天观察肺转移瘤灶数。B16细胞经蛇葡萄素处理3天,用具有聚碳酸酯和重建基底膜(基质胶Matrigel)的Transwell小室侵袭模型,研究药物处理后细胞侵袭、趋化运动、粘附能力的改变。结果:150、200、250mg/kg的蛇葡萄素可抑制小鼠肺转移瘤灶形成,与对照组比,抑制率分别为30.97%、40.58%、61.16%(P<0.05)。经20、40、80μmol/L蛇葡萄素处理后,对B16细胞侵袭人工基底膜的抑制率分别为36.06%、59.58%和79.09%(P<0.01);对细胞的趋化运动抑制率分别为51.59%、56.51%和66.75%(P<0.01);显著降低B16细胞与基质成分层粘连蛋白、纤维粘连蛋白及Matrigel的粘附作用。结论:蛇葡萄素具有抑制黑色素瘤的侵袭和转移的作用。

取代芳烃化合物电子结构与其对发光菌毒性关系的研究

应用量子化学半经验的MNDO方法计算了40个取代芳烃化合物的电子结构,探讨了化合物电子结构与其对发光菌毒性的关系.结果表明:(1)当化合物的分子极化度P、分子体积V、疏水参数logP较大时具有较大的水溶性和脂溶性,因而化合物的毒性较大;(2)当最高占据轨道(HOMO)能级和最低空轨道(LUMO)能级较低时,化合物容易接受电子具有较大的氧化性,取代芳烃的毒性也随之增大;(3)取代基的吸电子能力越强,吸电子基个数越多,苯环的正电性越大,化合物的毒性越大.得到的QSAR方程为:-logEC50=-2 230+0 202P-0 366EHOMO,据此可预测取代芳烃化合物对发光细菌的毒性.

带免疫佐剂CEA基因疫苗的构建及其稳定同步表达的研究

背景与目的:基因疫苗是目前肿瘤免疫基因治疗研究的热点。目前癌胚抗原阳性肿瘤的治疗效果不佳,本研究拟利用质粒pVAX1构建带有免疫佐剂白细胞介素2同步表达的癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)基因疫苗,探讨一种新的肿瘤生物治疗方法。方法:利用RT-PCR从患者肿瘤组织中钓取CEA目的基因cDNA;运用分子克隆技术,通过内部核糖体进入位点(IRES),将CEAcDNA和hIL-2cDNA连接于质粒pVAX1中,采用化学发光免疫法和ELISA双抗体夹心法分别检测CEA抗原和hIL-2因子的表达;同时用蛋白质分析软件分析和预测目的抗原的特性。结果:测序结果证实本实验所构建的重组质粒插入DNA序列无错配,质粒上所接入的CEAcDNA与GenBank公布的M29540和M17303的序列99.8%同源,经蛋白质分析软件预测,其抗原性、跨膜结构片段、信号肽位点和二、三级结构特征与同源癌胚抗原基本一致。hIL-2cDNA与母本序列100%同源。检测结果说明该重组质粒在体外CHO细胞株中可同步表达CEA和hIL-2分子。结论:从肿瘤组织中成功地获取了CEAcDNA,所构建的pVCEA2重组质粒能在体外细胞中同步表达CEA和IL-2蛋白分子,这为进一步体内实验研究基因治疗CEA阳性肿瘤提供了新的可能途径。

新生乳鼠视网膜细胞诱导骨髓间质干细胞向视网膜神经样细胞分化

目的探讨体外培养的新生乳鼠视网膜细胞对骨髓间质干细胞的诱导分化作用。方法取成年Wistar大鼠股骨全骨髓细胞体外培养,经多次传代后获得高纯度的骨髓间质干细胞。以新生乳鼠视网膜细胞作诱导条件,采用分层共培养的方法诱导骨髓间质干细胞。倒置相差显微镜观察骨髓间质干细胞与新生乳鼠视网膜细胞共培养后形态的改变;免疫组织化学法检测诱导后的细胞巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(NF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微丝微管相关蛋白-2(Map-2)、Thy11、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)等特异性标记物的表达;RT-PCR进一步分析诱导后细胞表达nestin、NF、NSE、Thy11及Ran等mRNA的情况。结果新生乳鼠视网膜细胞作诱导剂,诱导48h后可见部分细胞长出突起并向视网膜神经元特性样的细胞分化,最长可维持10d。结论骨髓间质干细胞在体外培养的新生乳鼠视网膜细胞的诱导作用下可以向视网膜神经元样细胞分化。

大剂量葡萄糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡

目的检验大剂量葡萄糖水平对培养的原代人视网膜毛细血管内皮细胞(humanretinalcapillaryendothelialcells,HRCEC)的直接影响。方法HRCEC细胞从捐赠人眼中分离得到。细胞在含有5mmol/L或25mmol/L葡萄糖的培养基中培养6d。应用锥虫蓝染色测定细胞活力、流式细胞计数分析细胞周期、TUNEL分析细胞凋亡。结果HRCEC细胞在25mmol/L葡萄糖中培养6d,细胞活力显著下降。通过流式细胞计数和TUNEL测定,凋亡细胞的数目在大剂量葡萄糖培养基中显著升高。结论大剂量葡萄糖可诱导人视网膜毛细血管内皮细胞凋亡,这有可能是促进糖尿病性视网膜病发展的原因。

双(三氯甲基)碳酸酯法合成L-聚谷氨酸苄酯

通过L 谷氨酸和苄醇反应制得L 谷氨酸苄酯 ,再和活性试剂双 (三氯甲基 )碳酸酯反应得到L 谷氨酸苄酯的N 羧酸酐 ,最后由三乙胺引发聚合得L 聚谷氨酸苄酯。和传统的光气法制备L 聚谷氨酸苄酯比较 ,该方法具有可定量、安全、方便。

纤溶酶原Kringle5缺失突变体抑制血管内皮细胞增生的研究

目的纤溶酶原蛋白水解片段Kringle 5(K5)具有治疗血管增生性疾病的潜在临床应用价值,但是K5已获得美国专利。本研究应用基因突变和基因重组技术获得缺失突变型(K5Mut1)并检测其体外活性。方法除去K5外环两端的N端和C端15个氨基酸残基以降低其相对分子质量,但同时保留K5分子中的所有3个二硫键以保留完整的外环结构域,并在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,获得突变型K5 Mut1 (Cys1-80);MTT法分析突变型K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞和周皮细胞的抑制作用。结果K5 Mut1以浓度依赖的方式抑制原代培养的视网膜内皮细胞,EC50(抑制50%细胞增生的药物浓度)约为35 nmol/L,是完整K5活性的2倍。在同样浓度范围内,K5 Mut1并不抑制同源的周皮细胞,表明K5 Mut1特异性抑制血管内皮细胞增生。结论K5 Mut1是一种比K5作用更强的血管增生抑制因子,在糖尿病性视网膜病、年龄相关性黄斑变性和实体肿瘤等血管增生性疾病的治疗中具有潜在的应用价值。

纤溶酶原Kringle5的抑制血管增生作用

纤溶酶原Kringle 5是纤溶酶原中与血管抑素相连的另一个联环结构域 ,它能抑制内皮细胞的增殖、迁移 ,并能诱导内皮细胞凋亡和细胞周期停滞 ,具有很强的抑制血管生成活性 ,是抑制活性最强的纤溶酶原水解片段。同时它具有分子量小、性质稳定、毒副作用小、特异性高等优点 。

5-氟尿嘧啶-聚[N-(2-羟乙基)-L-谷酰胺]的合成及缓释性能研究

以聚谷氨酸苄酯为原料,用乙醇胺进行胺解得水溶性的可生物降解的聚[N-(2-羟乙基)-L-谷酰胺];用光气/甲苯液活化5-氟尿嘧啶,将其以共价键形式键合在高分子上,得5-氟尿嘧啶的高分子前药。用IR、UV、1HNMR及DSC对其结构进行表征,用紫外光谱测定其药物含量,载药高分子的接药率约为38.4%,高分子前药在pH=7.2的磷酸盐介质中42天内的药物累积释放量为57.53%。实验结果表明,5-氟尿嘧啶以共价键的形式键合在聚[N-(2-羟乙基)-L-谷酰胺]之上,在体外有明显的缓释效果。