间充质干细胞对B细胞增殖及免疫调节功能的影响

【目的】研究观察间充质干细胞(MSC)在体外培养体系对B细胞增殖和免疫调节作用的影响。【方法】采用密度梯度离心法分离健康捐献者来源的骨髓30 mL。用含100 mmol/L胎牛血清的L-DMEM培养基对分离出的MSC进行贴壁培养。培养至第6代时,进行多向分化和细胞表型鉴定。获取健康供者外周血单个核细胞,并通过流式细胞仪分选出CD19^+B细胞,进行荧光染料CFSE标记,然后分成单独培养组(CD19^+B细胞)和共培养组(按CD19^+B∶MSC:=5∶1的比例共培养),两组均采用CpG+CD40L刺激,96 h后检测B细胞的增殖情况,并通过流式细胞荧光分选技术(FACS)检测CD19^+CD5^+B细胞的百分比及其分泌的IL-10水平;进一步观察单独培养组和共培养组的CD19^+B细胞对CD4^+T细胞增殖以及分泌IFN-γ的影响,最后加入IL-10中和抗体,再次验证B细胞对CD4^+T细胞增殖以及分泌IFN-γ的影响。【结果】健康捐献者来源的MSC具有多向分化能力,并表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166,不表达CD45和CD34。与单独培养组比较,共培养组中的CD19^+B细胞与MSC在体外共培养3 d后,CD19^+B细胞增殖比例明显提高,并显著抑制CD4^+T细胞分泌IFN-γ的功能。进一步分析CD19^+B细胞的亚群,发现与单独培养组比较,共培养组中的CD5^+B细胞数量的百分比由(21.31±1.22)%增加至(31.27±0.92)%(P=0.014);而且其IL-10的分泌水平由(1.09±0.08)%增加至(2.44±0.06)%(P<0.001)。当在共培养组中加入IL-10中和抗体后,发现与MSC共培养的B细胞抑制CD4^+T细胞增殖和分泌IFN-γ的功能的能力明显减弱。【结论】MSC能促进CD19^+B细胞的增殖,同时具有增强CD19^+B细胞抑制CD4^+T细胞分泌IFN-γ,这可能与分泌IL-10的CD19^+CD5^+B细胞的表达增加相关。