糖尿病发病过程中大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙泵活性以及血流动力学变化的研究

目的探讨糖尿病发病过程中大鼠主动脉平滑肌细胞钙泵活性变化与血流动力学变化之间的联系以及对糖尿病大血管病变产生和发展的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,第4、8、12、16周用彩色多普勒对各组主动脉进行血流参数测量。然后处死各组动物取其主动脉并分离得到肌浆网蛋白和胞膜蛋白,分别测定SERCA和PMCA的活性。结果4wk开始随着病程延长糖尿病组大鼠腹主动脉峰值血流速度、平均血流速度较对照组明显降低(P<0.05),而搏动指数和阻力指数则明显增高(P<0.05);12wk开始血管内径逐渐减小(P<0.05),16wk时内膜中膜厚度明显增加(P<0.05);PMCA的活性在早期(4wk)轻度增高,从12wk开始明显降低(P<0.05);SERCA活性在8wk起较对照组明显降低(P<0.05)。结论随着糖尿病病程逐渐延长,糖尿病大鼠主动脉血管结构发生改变,功能损坏;PMCA和SERCA活性改变导致的胞内钙离子调控紊乱参与了糖尿病大血管病变的发生和发展。

丹参素与川芎嗪对心血管系统的协同作用

目的探讨丹参素与川芎嗪在心血管方面的协同效应,为其复方制剂提供科学依据。方法通过大鼠颈静脉插管滴注受试药(丹参素、川芎嗪、丹参素+川芎嗪),观察对在体大鼠平均动脉压(MAP)、心率(HR)的影响;采用lange-ndorff离体心脏灌流技术对大鼠心脏灌流给予受试药,lab-chart生物信号采集仪器记录观察各受试药对左心室收缩压(LVSP)、左心室发展压(LVDP)、心率(HR)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)以及冠脉流量(CF)等心功能指标的影响。结果在体实验中,丹参素组平均动脉压降低约7%,川芎嗪组降低约12%,而丹参素+川芎嗪组降低约26%,但各组均对大鼠心率影响不明显。在离体心脏灌流实验中,丹参素+川芎嗪组与空白对照组、丹参素组和川芎嗪组相比,具有较强的负性肌力作用,能明显降低LVSP、LVDP、+dp/dtmax和HR,且升高-dp/dtmax和CF,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论丹参素、川芎嗪联合应用对心血管的效应有协同作用。

钙泵及与其相关的心血管疾病

钙泵对维持细胞内钙离子的平衡起主要作用,而钙离子同时与肌肉收缩、神经传导、细胞分泌有关。弄清钙泵的特性以及研究病理状态下钙泵的活性改变,对于弄清心血管疾病病因以及治疗和预防均有重要意义。

PKC及蛋白酪氨酸磷酸化信号通路对血管平滑肌细胞表型转化过程中容积调节性氯通道的作用

【目的】比较蛋白激酶C(PKC)及蛋白酪氨酸磷酸化信号通路对大鼠股动脉平滑肌细胞(femoral artery smoothmuscle cells,FASMC)和股静脉平滑肌细胞(FVSMC)上容积调节性氯通道的调节作用的差异,同时观察这一调节作用在动静脉平滑肌细胞表型转化过程中的变化。【方法】分别选取FASMC和FVSMC的原代,四代和八代作为观察血管平滑肌细胞表型转化的模型。采用全细胞膜片钳技术记录血管平滑肌细胞表型转化过程中容积调节性氯通道(VRCC)的变化以及蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂genistein、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)抑制剂sodium orthevanadate和蛋白激酶C激动剂PDBu对这一变化的调节作用。【结果】低渗溶液在动脉和静脉平滑肌细胞均可激活VRCC,且动脉平滑肌细胞的VRCC活性大于静脉平滑肌细胞。PTK抑制剂genistein对原代、4代、8代大鼠FASMC和FVSMC的VRCC活性均具有明显抑制作用且随着培养代数增加而逐渐增强;PTP抑制剂sodium orthevanadate对原代、4代、8代大鼠FASMC和FVSMC的VRCC活性均具有增强作用但逐渐减弱;PKC激动剂PDBu对原代、4代、8代大鼠FASMC和FVSMC的VRCC活性均具有抑制作用且逐渐增强。与同代的FASMC相比,genistein,sodium orthevanadate和PDBu对FVSMC的VRCC活性的调节作用更强。【结论】蛋白酪氨酸激酶、酪氨酸磷酸酶和蛋白激酶C对股静脉平滑肌细胞VRCC的调节作用强于股动脉平滑肌细胞。且随着血管平滑肌细胞由收缩型向合成型转化,VRCC的活性及酪氨酸蛋白的磷酸化调节作用均有逐渐增强的趋势,而蛋白激酶C对VRCC的抑制作用增强。

灯盏花素对缺氧和中高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖及VEGF表达的抑制作用

目的：观察高糖（30mmol／L）、中高糖（15mmol／L）及低氧各处理因素单独及合用对体外培养的人视网膜血管内皮细胞（human retinal endothelial cells，HREC）增殖作用及vEGF表达的影响，同时观察灯盏花素对增殖及VEGF表达的抑制作用。方法：采用CCK-8法检测H砌配的增殖情况，免疫印记和酶联免疫吸附测定VEGF蛋白的表达。

糖尿病血管平滑肌细胞钙离子稳态调节的改变与细胞增殖

糖尿病已成为第三大威胁人类健康的疾病。目前虽然在临床上能有效控制患者血糖水平,但是糖尿病患者最终死亡于合并症。研究表明,糖尿病可加速动脉粥样硬化,粥样斑块的平滑肌细胞显示更强的增殖能力。Ca2+作为胞内重要的信使参与细胞的许多生理活动,如细胞的增殖、凋亡等等。胞内钙离子的升高主要来源于胞外钙离子的内流与胞内钙池的释放。胞内钙池主要由IP和ryanodine两大钙池系统组成,它们共同调节着胞内钙离子运动。

丹参素配伍川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的研究丹参素配伍川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法采用线栓法制备SD大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型。实验SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组、模型组、丹参素组(1.2 mg·kg-1)、川芎嗪组(60mg·kg-1)、丹参川芎嗪注射液组[(1.2mg丹参素+60mg川芎嗪)kg-1]、尼莫地平注射液组(1.2mg·kg-1)。造模24 h后,测定神经行为学评分、脑组织含水量、脑梗塞体积、血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)含量,并进行组织病理学检查。结果与模型组相比,丹参素组、川芎嗪组、丹参川芎嗪注射液组大鼠的神经行为明显改善,脑含水量和脑梗塞体积显著降低(P<0.05或0.01),血清中SOD活性升高,Glu含量降低(P<0.05或0.01),HE染色显示组织间隙较小,病理损伤小于模型组。丹参川芎嗪注射液组保护作用最优,说明两单味药配伍使保护作用增强。结论丹参素配伍川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血有协同的保护作用。

丹参川芎嗪对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的通过对大鼠离体心脏灌流不同剂量受试药丹参川芎嗪(SLI),探讨受试药对离体心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用。方法采用Langendorff离体心脏恒压灌流系统建立心肌缺血/再灌注模型。SD大鼠随机分为五组(n=11),包括空白对照组(Control)、模型组(Model)、SLI高剂量组(High)、中剂量组(Middle)、低剂量组(Low)。将分离后的大鼠心脏连接在Langendorff离体灌流仪器上,先平衡灌注20min,再全心停灌20min,然后复灌60min;空白对照组连续灌流100min。采用labchart生物信号采集仪器记录观察各受试药物组对心功能的影响。结果与模型组相比,SLI各剂量组I/R的相关指标LVDP、+dp/dtmax明显升高(P <0.05),冠脉流出液中LDH、CK、MDA含量显著降低(P <0.05),而SOD水平则明显升高。HE染色结果显示,模型组心肌细胞着色不均、纤维排列紊乱、心肌形态不完整,心肌纤维间可见中性粒细胞浸润,部分心肌细胞坏死,而SLI各剂量组均不同程度地改善了这一改变。结论 SLI能减轻离体心肌缺血/再灌注诱导的冠脉损伤,对心脏功能恢复具有促进作用,其机制可能与改善心肌舒缩功能,清除氧自由基有关。

丹参川芎嗪注射液对缺氧/复氧损伤脑基底平滑肌细胞的保护作用

目的探讨丹参川芎嗪注射液对缺氧条件下脑基底平滑肌细胞的保护作用,并比较丹参素、川芎嗪、丹参川芎嗪注射液三者的药效差异。方法用Na_2S_2O_4与细胞共孵育,建立大鼠脑基底平滑肌细胞缺氧/复氧损伤模型。对照组换上新鲜培养基;模型组给予缺氧液;丹参川芎嗪低、中、高浓度组分别给予0.01,0.1,1μmol·L^(-1)丹参川芎嗪注射液孵育6 h;丹参素组给予0.1μmol·L^(-1)丹参素孵育6 h;川芎嗪组给予0.1μmol·L^(-1)川芎嗪孵育6 h;丹参素+川芎嗪组给予0.1μmol·L^(-1)丹参素+0.1μmol·L^(-1)川芎嗪孵育6 h。观察脑基底平滑肌细胞一般形态学及凋亡相关形态学的改变、检测脑基底平滑肌细胞存活率、脑基底平滑肌细胞外液乳酸脱氢酶活性、以及Bcl-2/Bax的表达。结果与模型组相比较,给药组脑基底平滑肌细胞的存活率上升(P<0.05或0.01),Bcl-2/Bax的比值升高(P<0.05),降低了低氧损伤引起的细胞外液乳酸脱氢酶的升高(P<0.05)。结论丹参川芎嗪注射液对缺氧造成的脑基底平滑肌细胞损伤具有保护作用,其保护作用优于丹参素、川芎嗪。

乙酰紫草素对糖尿病小鼠肝脏糖代谢的调控作用

目的观察乙酰紫草素对糖尿病小鼠血糖的改善作用,探究乙酰紫草素对糖尿病小鼠肝脏糖代谢的调控机制。方法8周龄雄性C57小鼠6只和db/db小鼠18只随机分为正常组、糖尿病对照组、二甲双胍组(200 mg/kg)和乙酰紫草素组(200 mg/kg),每组6只。根据分组对小鼠灌胃40 d,监测小鼠血糖变化,检测小鼠口服葡萄糖耐量。采用全自动生化分析仪检测小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,ELISA试剂盒检测小鼠血清胰岛素水平,TG和糖原检测试剂盒检测小鼠肝脏TG和糖原水平;苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色及过碘酸-雪夫(PAS)染色观察小鼠肝脏病理改变,Western blot检测小鼠肝脏葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、蛋白激酶Cζ(PKCζ)、胰岛素受体底物(IRS)、pIRS、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、pPI3K、蛋白激酶B(AKT)、p AKT、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和pGSK3β蛋白的表达水平,免疫组化检测小鼠肝脏GLUT2表达。结果乙酰紫草素可使小鼠血糖显著下降,提高血清胰岛素含量(P<0.001,F=25.55),改善胰岛素抵抗;乙酰紫草素可降低血清中TC(P<0.01,F=11.94)、TG(P<0.01,F=9.135)和LDL-C(P<0.01,F=17.77)含量,提高HDL-C含量(P<0.01,F=17.35),减轻肝细胞脂肪变性,改善脂代谢异常,增加肝糖原含量(P<0.001,F=10.71)。乙酰紫草素可上调GLUT2、PKCζ、IRS、pIRS、PI3K、pPI3K、AKT和pAKT的表达水平,下调GSK3β和pGSK3β的表达水平。结论乙酰紫草素可改善小鼠糖尿病,其可能与改善脂代谢异常、调控GLUT2及调节IRS/PI3K/AKT/GSK3β通路从而调节肝脏糖原合成有关。