碘标记bcl-2反义寡核苷酸的研究及其稳定性与生物分布的评价

为了建立Iodogen直接法碘标记反义寡核苷酸(ASON)方法,评价探针的稳定性及生物分布特征。用Iodogen对15merbcl-2mRNA的反义寡核苷酸进行直接标记,SephadexG-25凝胶柱纯化,测定标记率和纯度,评价标记ASON的稳定性。在BALB/c裸鼠及荷CNE2瘤小鼠中研究其生物分布特征。结果显示:1)在适当条件下,本法标记率可达85%,放射性纯度为90%,放射性比度为4.77×105Bq/μg(ASON)。2)标记ASON室温下96h保持较稳定,但新鲜血浆下部分分解。3)标记ASON在大多数组织器官中的放射性活度随时间减少迅速,大多数曲线呈示踪剂为两相分布。30min时胃肠道和甲状腺放射性浓集明显,提示标记探针体内不稳定。肿瘤对探针的摄取较少,免疫组化证实肿瘤组织bcl-2表达极低。结果表明Iodogen直接法碘标记反义寡核苷酸(ASON)方法简单可靠,可获得标记率高、纯度较高且稳定性较好的标记探针,但碘标寡核苷酸在体内因核酶的分解而稳定性较差。

舒拉明联合bcl-2基因反义寡核苷酸对前列腺癌细胞增殖的影响

【目的】探讨舒拉明联合bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸对前列腺癌细胞（LNCaP细胞）增殖的影响。【方法】采用^3H-TdR掺入法观察舒拉明和反义寡脱氧核苷酸对LNCaP细胞增殖的影响，流式细胞荧光免疫法检测bcl-2基因表达，放射免疫分析法检测PSA表达。【结果】舒拉明和反义寡脱氧核苷酸单独作用LNCaP细胞后，细胞^3H-TdR掺入率、bcl-2蛋白表达以及PSA水平明显低于对照组，呈现剂量依赖效应，二者联合应用抑制作用明显增强。【结论】舒拉明和bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸联合应用，可明显增强对前列腺癌细胞增殖的抑制，减少舒拉明用药剂量。

胞核雄激素受体测定对评价前列腺癌、肝癌受体状态的意义

背景与目的:雄激素受体(androgenreceptor,AR)与前列腺癌(prostatecarcinoma,PC)、原发性肝癌(hepatocellularcacinoma,HCC)的发生、发展有关,对临床治疗方案选择及预后的评估等有一定影响,准确判断肿瘤组织的AR状态有重要的临床意义。本研究旨在通过对胞核雄激素受体(nuclearAR,AnR)进行分析,探讨AnR对评估前列腺癌、原发性肝癌雄激素受体状态的意义。方法:取94例PC和192例HCC患者的肿瘤组织及癌周组织,采用受体放射配基结合分析法(radioligandbindingassay,RBA)对组织中胞浆雄激素受体(cytosolAR,AcR)、胞核雄激素受体的亲和力(affinity,KD)、最大结合容量(maximumconcentrationofreceptor,Bmax)进行分析。结果:PC患者中肿瘤组织AcR、AnR的Bmax值(58.82±34.73)、(543.70±249.44)fmol/mgprotein明显高于癌周组织的(21.63±14.89)、(89.20±47.32)fmol/mgprotein(P<0.001);其KD值(0.84±0.52)、(2.15±0.79)nmol/L与癌周组织的(0.78±0.49)、(2.24±0.84)nmol/L之间的差异无统计学意义(P>0.50)。HCC患者中,肿瘤组织AcR、AnR的Bmax值(18.09±16.87)、(59.93±34.12)fmol/mgprotein亦明显高于癌周组织的(10.87±7.60)、(25.54±20.10)fmol/mgprotein(P<0.001);其KD值(0.76±0.57)、(1.89±0.74)

抗鼻咽癌单克隆抗体BAC5单链抗体原核表达载体的构建和表达

【目的】构建抗鼻咽癌单克隆抗体 BAC5单链抗体的原核表达载体并观察其表达,为开展抗鼻咽癌单链抗体的进一步研究奠定基础。【方法】应用 RT-PCR 技术,扩增出鼻咽癌单克隆抗体 BAC5的轻链、重链可变区基因,通过一段编码肽的序列进行连接,构建 BAC5单链抗体表达载体 pET22b-scFv,导入 BL21(DE3)表达菌,并进行诱导表达。SDS-PAGE 凝胶电泳鉴定融合蛋白的表达。【结果】克隆基因序列符合小鼠轻、重链可变区基因特征;pET22b-scFv 表达质粒拼接正确;表达产物以包涵体形式为主。【结论】成功构建了能表达 BAC5单链抗体的原核表达载体。

结直肠癌雌激素受体及孕激素受体的定量研究

背景与目的许多研究表明结直肠癌与雌激素相关,结直肠癌组织中表达雌激素受体(estrogenreceptor,ER)、孕激素受体(progesteronereceptor,PR),但多采用免疫组化方法检测,且结果不一,而ER.PR的定量研究不多。本研究拟定量测定结直肠癌组织及正常组织的ER,PR表达水平,并探讨它们之间的关系及与结直肠癌患者临床病理参数的关系。方法应用受体放射配基结合分析法(radioligandbindingassay,RBA)定量测定45例结直肠癌组织及结直肠正常组织的胞浆及胞核ER、PR的水平。结果45例标本结直肠正常组织及癌组织都表达ER、PR,胞浆ER表达癌组织高于正常组织,分别为7.96±3.69fmol/mgprotein和4.34±2.84fmol/mgprotein,(P<0.01);胞浆PR表达癌组织高于正常组织,分别为3.89±2.64fmol/mgprotein和2.50±1.73fmol/mgprotein,(P<0.01);胞核ER表达癌组织高于正常组织,分别为18.42±8.30fmol/mgprotein和11.24±5.44fmol/mgprotein,(P<0.01);胞核PR表达癌组织高于正常组织,分别为9.36±5.90fmol/mgprotein和7.84±7.41fmol/mgprotein,(P<0.05)。癌组织胞浆及胞核的ER表达与PR表达呈正相关,(P<0.01);正常结直肠组织胞浆ER表达与PR表达呈正相关,(P<0.01),而胞核内两者不相关,(P>0.05)。结直肠癌组织ER表达与患者年龄相关,大于45?

原发性肝癌组织中生长激素受体的表达及其意义

背景与目的:重组人生长激素(recombinehumangrowthhormone,rhGH)在调节代谢、降低外科病人死亡率方面,疗效明显,然而rhGH能否用于治疗原发性肝癌患者,目前存在较大争议。由于生长激素必须通过与其受体(growthhormonereceptor,GHR)结合方能发挥作用,因此本研究旨在通过了解原发性肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)组织生长激素受体的表达情况,探讨rhGH在肝癌患者中是否适用。方法:应用放射性配体法对40例HCC组织进行GHR的检测,以6例正常肝组织作为对照,肝组织GHR的受体最大结合量(RT)和平衡解离常数(Kd)采用Scatchard法计算;并分析肝癌GHR的RT值与肝癌临床病理特点之间的关系。结果:在正常肝组织与35例HCC组织中检测到单一的生长激素(GH)特异性结合位点(即GHR),对照组肝组织GHR的RT值为(39.5467±3.4770)fmol/mgprotein,Kd为(0.6167±0.1007)nmol/L,肝癌组织GHR的RT为(18.5416±4.1686)fmol/mgprotein,肝癌组织GHR的Kd值为(0.6319±0.1978)nmol/L,与正常肝组织相比,肝癌GHR的RT显著性降低(P<0.05),而Kd无显著性改变(P>0.05);肝癌组织GHR的RT值与肿瘤大小、患者临床分期呈显著性负相关,而与肿瘤分化程度、患者年龄、是否合并肝硬变无显著性相关。在5例肝癌组织未检测到GHR。结论:本组结果显示。

PYM-BAC_5和^(131)I-BAC_5联合导向治疗鼻咽癌的实验研究

背景与目的:现代的肿瘤治疗提倡综合治疗,肿瘤的导向综合治疗具有研究价值。本实验在研究鼻咽癌放射免疫治疗的基础上,观察平阳霉素(pingyangmycin,PYM)和131I与鼻咽癌单抗BAC5的偶联物PYM-BAC5和131I-BAC5对鼻咽癌细胞CNE2的联合抑制效果。方法:用葡聚糖T-40作中间载体偶联PYM和BAC5,用测定抑菌活性和免疫活性的方法鉴定偶联物。用氯胺T法制备131I-BAC5。设置单独用药组(游离PYM,131I-mIgG)、单独导向用药组(PYM-BAC5,131I-BAC5)以及联合导向用药组(PYM-BAC5+131I-BAC5)共5个实验组,用MTT法测定各药物组的抑制作用。结果:PYM-BAC5和游离PYM对CNE2的半数抑制浓度(IC50)分别为46.57μg/ml和316.70μg/ml;131I-BAC5和131I-mIgG对CNE2的IC50分别为4.42×105Bq/ml和>11.10×105Bq/ml;联合用药组中PYM-BAC5的IC50为7.01μg/ml,131I-BAC5的IC50为0.54×105Bq/ml。结论:(1)导向用药组的抑瘤效果明显高于非导向组;(2)联合导向用药组的抑菌效果明显高于单独导向用药组。

^(188)Re-BAC_5对鼻咽癌细胞影响的实验研究

采用直接标记法制备188Re-BAC5,并测定标记物的免疫活性,应用噻唑蓝(MTT)法观察188Re-BAC5对体外单层培养的鼻咽癌细胞(CNE-2)的抑制作用。建立鼻咽癌(NPC)肿瘤多细胞微球模型,观察188Re-BAC5对微球生长的抑制和破坏作用。对照组为188Re-BSA、188ReO4。结果显示:188Re-BAC5的标记率在80%以上,标记后的免疫活性分数为61%±15%。MTT法结果表明,188Re-BAC5组的抑瘤率比对照组明显提高(P<0.05);在肿瘤多细胞微球的抑制实验中,188Re-BAC5对微球生长有强烈的抑制和破坏作用,疗效明显优于对照组。本实验提示,188Re-BAC5有可能在对人鼻咽癌的放射免疫治疗中起到良好的作用。

激素难治性前列腺癌组织中雄激素受体蛋白表达的研究

背景与目的:近来有研究报道,在激素难治性前列腺癌(hormonerefractoryprostatecarcinoma,HRPC)中发现有雄激素受体(androgenreceptor,AR)基因扩增,并提出AR基因扩增可能是导致激素治疗失败的一个新的分子机制。本研究拟对前列腺癌在激素治疗前和治疗失败后的AR蛋白表达作定量测定,进一步探讨AR表达与HRPC发生的关系。方法:采用放射配体结合分析方法测定28例晚期前列腺癌患者在激素治疗前以及治疗失败后原发癌组织中的AR蛋白含量。结果:28例前列腺癌在治疗前、后癌组织中的AR蛋白平均水平分别为(390.0±204.1)和(690.4±444.0)fmol/mgProtein,两者间差异有显著性(P<0.001)。其中10例在治疗后12个月内复发,其AR蛋白平均水平在治疗前、后分别为(398.2±199.5)和(448.2±274.1)fmol/mgProtein两者间差异无显著性(P>0.20),其余18例的AR蛋白平均水平在治疗前、后分别为(386.4±212.3)和(824.9±468.6)fmol/mgProtein,两者间差异有显著性(P<0.001)。结论:AR蛋白水平升高可能是前列腺癌对激素治疗不敏感的原因之一。

美多巴对帕金森病大鼠模型脑多巴胺转运体影响的自显影

【目的】研究美多巴对帕金森病大鼠模型脑多巴胺转运体的影响。【方法】立体定位右侧纹状体注射6-羟多巴胺制备偏侧帕金森病大鼠模型,模型成功后给予美多巴灌胃治疗5周。分4组(正常组、帕金森病模型大鼠组、帕金森病模型大鼠经美多巴治疗组、帕金森病模型大鼠未治疗组)行脑多巴胺转运体99mTc-TRODAT-1放射自显影,每组4只。图像分析得到左、右侧纹状体及小脑的光密度值,计算左、右侧脑多巴胺转运体的特异性放射性摄取比值(纹状体/小脑-1),比较各时间点(正常、术后4周、术后9周)多巴胺转运体比值的变化。【结果】正常大鼠脑多巴胺转运体对99mTc-TRODAT-1的特异性摄取比值左、右两侧无显著性差异;术后4周大鼠成为帕金森病模型后,大鼠两侧脑多巴胺转运体的比值较正常均降低,右侧(损毁侧)降低明显。术后9周未治疗组帕金森病模型大鼠双侧脑多巴胺转运体的比值均较4周刚成为模型时明显升高;经美多巴治疗后,双侧的比值均较未服药组明显降低,右侧(损毁侧)降低幅度更大。【结论】长期美多巴治疗可能会使帕金森病模型大鼠脑多巴胺转运体的数量减少。

吡贝地尔对帕金森病模型大鼠脑多巴胺D_2受体的影响

目的研究常用抗帕金森药多巴胺受体激动剂吡贝地尔对脑多巴胺D2受体的影响。方法立体定位右侧纹状体注射6-羟多巴胺制备偏侧帕金森病大鼠模型,模型成功后予吡贝地尔灌胃治疗[30mg/(kg·d)]5周。分4组(正常组、术后4周帕金森病模型大鼠组、术后9周帕金森病模型大鼠经吡贝地尔治疗组、术后9周帕金森病模型大鼠未治疗组)行125I-依匹必利(125I-epidepride)大鼠脑多巴胺D2受体放射自显影。图像分析得到纹状体与小脑的平均光密度值,计算并比较各组左、右两侧脑多巴胺D2受体的特异性放射性摄取比值(纹状体/小脑-1)的变化。结果正常大鼠脑多巴胺D2受体对依匹必利的特异性放射性摄取比值左、右两侧差异无统计学意义;成为帕金森病模型后,右侧(损毁侧)比值较正常稍升高,但差异无统计学意义;未治疗组帕金森病模型大鼠双侧比值较刚成模型时均明显降低,右侧(损毁侧)比值仍较左侧高;经吡贝地尔治疗后,双侧比值较未治疗组进一步降低,右侧(损毁侧)降低甚,比值较左侧低。结论长期吡贝地尔治疗可能会使帕金森病模型大鼠双侧脑多巴胺D2受体的数量减少,损毁侧减少为甚。

吡贝地尔对帕金森病大鼠模型脑多巴胺转运体影响的自显影研究

目的 研究常用抗帕金森药多巴胺受体激动剂吡贝地尔(泰舒达)对脑多巴胺转运体的影响。方法立体定位右侧纹状体注射6-羟多巴胺制备偏侧帕金森病大鼠模型,模型成功后予吡贝地尔灌胃治疗[30 mg/(kg·d)]5周。分4组(正常组、帕金森病模型大鼠组、帕金森病模型大鼠经吡贝地尔治疗组、帕金森病模型大鼠未治疗组)行大鼠脑多巴胺转运体田99Tcm-TRODAT-1放射自显影。图像分析得到纹状体与小腑的平均光密度值,计算并比较各组左、右两侧脑多巴胺转运体的特异性放射性摄取比值(纹状体/小脑-1)的变化。结果 正常大鼠脑多巴胺转运体对99Tcm-TRODAT-1的特异性放射性摄取比值左、右两侧无显著性差异;成为帕金森病模型后,两侧比值较正常均降低,右侧(损毁侧)降低叫显。未治疗组帕金森病模型大鼠双侧比值均较刚成模型时明显升高;经吡贝地尔治疗后,双侧比值均较未治疗组显降低,右侧(损毁侧)降低更甚。结论 长期吡贝地尔(泰舒达)治疗可能会使帕金森病模型大鼠脑多巴胺转运体的数量减少。

许旺细胞源神经营养因子在运动神经元轴突逆行运输的研究

目的 研究许旺细胞源神经营养因子能否被脊髓运动神经元逆行运输。 方法 氯氨T氧化法标记许旺细胞源神经营养因子 ,新生SD大鼠经一侧小腿肌内注射12 5I标记的许旺细胞源神经营养因子 ,测定左、右侧腰段脊髓的放射性记数。 结果 注射侧腰段脊髓放射性记数明显高于对侧。结论 脊髓运动神经元可以逆行运输许旺细胞源神经营养因子。

肠外营养中胰岛素输注方式对其活性和浓度以及血糖影响的随机对照研究

目的比较胰岛素加入全合一营养袋内或经静脉泵同步输注时胰岛素活性、浓度以及患者血糖的变化。方法将2006年4月至8月20例上消化道肿瘤术后无糖尿病的患者随机分为滴注组和静脉泵组。滴注组为胰岛素直接加入全合一营养袋中静脉滴注，静脉泵组为胰岛素加入注射器内泵入。于开始输液、输液至1000ml、输液至2000ml和余液100ml时测量胰岛素活性百分比、浓度以及患者的血糖水平，连续测量3d。结果两组胰岛素的活性百分比和浓度均随时间有下降趋势，活性百分比两组间差异无统计学意义（P=0．347）。两组间和组内各时点血糖差异无统计学意义（P〉0．05）。两组患者未发生与血糖水平相关的并发症。结论胰岛素加入全合一营养袋内或经静脉泵同步输注两种方式对胰岛素活性、患者血糖和与血糖相关并发症的影响无明显差异。胰岛素可安全地加入营养袋内输注。

镇肝熄风汤对绝经综合征动物模型雌激素受体的影响

目的:观察镇肝熄风汤对动物模型的性激素水平(FSH、LH、E2)及胸主动脉雌激素受体(Estrogen receptor,ER)的影响。方法:建立动物模型,设置对照组、模型组、雌激素组、镇肝熄风汤组,治疗4周后,对各组的FSH、LH、E2、ER等指标进行检测。结果:①去势后模型组较对照组血清E2含量下降(P<0.05),镇肝熄风汤组较模型组血清E2含量上升(P<0.05);②大鼠血清FSH、LH含量过低,FSH<0.05IU/L,LH<0.07IU/L,无法比较;③模型组与对照组相比,ER下降,镇肝熄风汤组与雌激素组ER水平均升高(P<0.05)。结论:镇肝熄风汤可提高去势大鼠E2水平,具有调节生殖内分泌的功能,同时可提高胸主动脉胞浆ER水平。提示镇肝熄风汤治疗绝经综合征和抗动脉粥样硬化的机制可能是通过提高雌激素的数量及雌激素受体的表达,加强其靶器官和组织的生物学效应。

胆碱乙酰基转移酶活性快速测定诊断臂丛损伤的实验研究

目的寻找一种简单快速、能在手术中准确客观地判断臂丛损伤神经残端功能的方法。方法选用成年雌性SD大鼠45只,随机分成两组,分别制成臂丛节前和节后损伤的动物模型,采用放射性同位素的方法测定损伤后不同时间臂丛神经中胆碱乙酰基转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)的活性,然后用统计学的方法总结其中规律。结果节前、节后两种损伤类型胆碱乙酰基转移酶的活性均随时间降低,节前组ChAT活性随时间迅速降低,很快达到正常活性的1/10(675±258) cpm；节后组ChAT活性随时间缓慢降低,90 d后只降低到正常活性的1/2(4906±1119)cpm。结论术中快速测定ChAT的活性可以用来定量地区分臂丛损伤后的神经残端功能,以判定残端的可利用性。

^188Re-BAC5联合PYM-BAC5导向治疗鼻咽癌的体外实验研究

目的 在前人工作的基础上，分别设计了内放疗和化疗靶向治疗药物——鼻咽癌单克隆抗体^188Re标记物^188Re鼻咽癌单克隆抗体（BAC5）]和BAC5与平阳霉素（PYM）的耦联物（PYM-BAC5），观察了两药联合使用对体外培养的鼻咽癌细胞（CNE2）的抑制作用。方法直接法标记^188Re-BAC5以SnCl2、2-巯基乙醇（2-ME）和柠檬酸-酒石酸作还原剂和耦联剂，葡聚糖T-40被氧化成多醛基葡聚糖（PAD）用以耦联PYM和BAC5。四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测2种抗肿瘤药物对体外培养CNE2的抑制作用，并以^188ReO4-、188Re-mlgG和PYM为对照组，生理盐水为空白对照组。结果^188Re-BAC5标记率为92％～95％，放射性浓度为5254kBq／ml；PYM．BAC，中m（PYM）：m（BAC，）=1：0．526，n（PYM）：n（BAC5）=1：51。2种药单独治疗组、联合治疗组及各自对照组的抑制效应都呈明显的剂量-效应关系。但^188Re-BAC5，对CNE2的抑制作用随放射性浓度的增加而增加，半数抑制浓度（Ic50）为264kBq／ml，抑制作用明显强于^188ReO4^-（IC50=882kSq／m1）和^188Re-mIgG（IC50=1062kSq／ml）组。PYM-BAC5的IC50为10．07μg／ml，而单纯PYM的IC50为63．60μg／ml；合用药中^188Re-BAC5的IC50为32．1kBq／ml，PYM-BAC5的IC50为1．70μg／ml，分别明显小于2种药单用时各自的IC50，以上各组差异均有统计学意义（t=22．62和37．70，P〈0．01）。结论靶向治疗组（^188Re-BAC5）抑瘤效果明显好于非靶向组；联合靶向治疗组（^188Re-BAC5＋PYM-BAC5）的抑瘤效果明显好于单独用药组。