萌动激活赤灵芝孢子粉致畸、致突变和抗突变的实验研究

目的与方法 采用大鼠致畸胎、小鼠骨髓细胞染色体畸变 (CA)分析检测萌动激活赤灵芝孢子粉的致畸胎、致突变和抗突变性。结果 :①灵芝孢子粉小鼠骨髓细胞CA率与阴性对照组比较差别无显著性 (P >0 0 5 )。②灵芝孢子粉对孕鼠体重、胚胎早期发育、胚胎生长发育、以及胎鼠的骨骼发育和内脏器官发育均无不良影响。③灵芝孢子粉各剂量对 4 0mg/kg、5 0mg/kg环磷酰胺 (CP)诱发的小鼠骨髓细胞染色体畸变率有明显的抑制作用 (P <0 .0 5 ,P <0 0 1) ,抑制率分别为 5 6 2 %、34 1%、39 8%和 6 7 8%、5 9 9%、5 2 0 % ,对 5 0mg/kgCP诱发的CA抑制率在 5 2 .0 %以上 ,并有剂量反应关系。结论 :萌动激活赤灵芝孢子粉未见致畸胎和细胞染色体损伤作用 ,对化学物引起的染色体损伤具有一定的拮抗或保护作用。

噻唑蓝比色法检测细菌生长和存活状况的研究

建立了细菌生长和存活状况检测的噻唑蓝 (MTT)比色分析法。将S .aureus和E .coli菌以平板菌落计数法计数活菌数量 ,将一定数量细菌或经煮沸处理细菌加入微孔板 ,同时加入MTT ,于 36～ 37℃培养 ,加入DMSO溶解 ,于 51 0nm波长处测定A值 ;将一定数量活菌 ,加入不同数量MTT ,孵育不同时间 ,用不同量DMSO溶解 ,于不同波长处测定A值 ,以优化细菌MTT比色分析法条件。结果表明 :(1 )MTT能被活细菌利用 ,形成的fomazan数量与细菌浓度成线性关系 ;(2 )细菌经煮沸后MTT显色 ,A值明显降低 ,与煮沸时间成正比例 ;(3)MTT加入后在 0～ 2h内A值与作用时间成正相关 ;(4)MTT浓度增加 ,A值有一定程度增大 ;(5)以DMSO为Formazan溶解剂 ,其最大吸收波长范围为 51 0～ 530nm ;(6)以菌液体积的 2、3、4倍量加入DMSO均可较好地溶解Formazan颗粒。MTT比色分析法能反映活细菌的生长 ,存活状况 ;其较适宜的参数 :MTT终浓度0 3mg ml,作用时间 2h ,溶解剂DMSO量为菌液量 2倍 ,最大吸收波长范围为 51 0～ 530nm。

内皮抑素转基因治疗裸鼠人肝癌的实验研究

目的构建表达人内皮抑素的重组真核表达载体,研究阳离子脂质体介导转染内皮抑素基因对裸鼠人肝癌生长的抑制作用。方法将含有IL-2信号肽和人内皮抑素基因全长cDNA插入真核表达载体pcDNA3.0产生重组质粒pCD-sEndo,脂质体Dosper介导将pCD-sEndo质粒转染至人肝癌细胞株SMMC-7721,RT-PCR和Western blot检测内皮抑素的表达。建立裸鼠人肝癌模型,按随机数字表法随机分成4组,分别瘤内注射Dosper+pCD-sEndo(Dosper+pCD-sEndo组)、Dosper+pcDNA3.0(Dosper+pcDNA3.0组)、Dosper(Dosper组)和生理盐水(生理盐水组),分时段测量肿瘤的体积;注射结束后1周处死动物,切取肿瘤,免疫组化检测肿瘤组织微血管密度(MVD),TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡指数(AI)。结果成功构建携带人内皮抑素基因和IL-2信号肽的真核表达质粒pCD-sEndo并经酶切鉴定证实;体外转染内皮抑素基因的SMMC-7721细胞,RT-PCR可以检测到内皮抑素mRNA表达,Western blot显示转染细胞培养液中有内皮抑素蛋白表达,而转染空白质粒者中没有;体内实验中,Dosper+pCD-sEndo组裸鼠肿瘤生长受抑,于第12 d起明显小于Dosper+pcDNA3.0组、Dosper组和生理盐水组(P<0.05)。Dosper+pCD-sEndo组平均MVD为6.2±2.5,明显低于生理盐水组(32.8±6.4)、Dosper组(27.8±6.4)和Dosper+pcDNA3.0组(25.5±5.5),P<0.05;Dosper+pCD-sEndo组肿瘤细胞平均AI为24.5±7.3,生理盐水组、Dosper组和Dosper+pcDNA3.0组分别是7.6±2.5、9.5±3.0和11.2±3.6,前者明显高于后三者(P<0.05)。结论瘤内注射携带内皮抑素基因的阳离子脂质体,可减少裸鼠体内种植性人肝癌的微血管数目,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长。

探索脑太极治癌仪仿生物理治癌的新途径:激活脑内抑制性神经递质调治肝癌小鼠的重复实验研究

目的:破译ET脑波相关频率密码,仿生物理创新制造成脑太极治癌仪(NTJ仪),在2002年实验抑瘤率有显著性差异基础上,2003年再做重复实验,激活大脑中枢抑制性神经递质,抑制肝癌小鼠的原癌基因作用,及其抑癌基因抗肿瘤中枢调节机制进行探讨。方法:将肝癌接种后的肝癌小鼠40只随机分成3组:生理盐水阴性对照组(阴性对照组)11只,环磷酰胺阳性对照组阳性对照组)10只,(NTJ治癌仪治疗组(N治疗组)19只。测定抑瘤率,SuperTJET高级脑电分析系统测定大脑神经递质,活动状态神态)、皮毛光泽度、大便性(状。结果:NTJ治癌仪对肝癌小鼠的抑瘤率为52.9%,阳性对照组为79.4%,两组比较差异有显著性意义P<0.001)。与抑制性神经递质(的新发现所产生的功效,是相互对应成正比的。治疗癌症起主导作用的大脑抑制性神经递质:γ-氨基丁酸、5-羟色胺、乙酰胆碱含量均有显著性提高。结果与2002年实验基本一样。治疗组小鼠的神态、皮毛光泽、大便情况都有显著改善。结论:①重复实验结果进一步论证大脑抑制性神经递质被激活。②可能通过中枢神经系统将调控信号逐级放大,使细胞进行正常发育、分化、衰老、凋亡,起到抑制癌细胞生长作用。③重复结果基本一致,而且可以提高小鼠的生活质量,从科学角度论证了NTJ仪治疗肝癌小鼠的可信性、实用性和科?

体外药敏试验指导的恶性脑胶质瘤预见性化疗

目的探讨体外药敏试验指导恶性脑胶质瘤化疗的临床效果及意义。方法对恶性脑肿瘤标本常规采用MTT法进行7种化疗药物体外药敏试验,以指导临床化疗方案的制定。将临床化疗效果与体外药敏结果相比较,分析二者间的符合情况。结果对147例人脑恶性肿瘤手术标本进行体外药敏试验,获得药敏结果的85例,其体外药敏的总成功率58%,早期阶段成功率只有33%,后期到达82%。其中68例为恶性胶质瘤,31例接受化疗。进入疗效评价的共22例,共化疗84个周期,平均3.8个周期。采用一个化疗方案化疗者17例,2个方案化疗者3例,3个方案化疗者2例,总计疗效评价29例次。体外药敏试验结果与临床治疗效果的总符合率为82.8%,阳性符合率为71.4%,阴性符合率为93.3%。体外药敏试验预示的敏感性为90.9%,特异性为77.8%。根据药敏试验结果进行化疗的临床结果:完全缓解(CR)2例,部分缓解(PR)2例,稳定(SD)6例,进展(PD)4例,客观有效率为(CR+PR)为28.6%,疾病控制率为(CR+PR+SD)为71.4%;药敏试验没有发现敏感药物者(凭临床传统用药)组无CR、PR,SD1例,PD14例,客观有效率为0%,疾病控制率为(CR+PR+SD)为6.7%。客观有效率及疾病控制率在药敏试验敏感组显著高于耐药组(P<0.05)。结论MTT体外药敏试验对排除无效药物、筛选敏感药物进行个体化的化疗,提高临床化疗效果,具有重要意义。

小棒短指软珊瑚Sinularia microclavata中的生物活性氧化甾醇

从南中国海采集的小棒短指软珊瑚SinulariamicroclavataTix＿Dur中首次分离得2个氧化甾醇。通过各种近代波谱分析方法,鉴定出它们分别为孕甾＿5＿烯＿3＿醇＿20＿酮(pregnenolone)(1)和9,11＿开环＿24＿亚甲基＿5α＿胆甾＿7＿烯＿3β,6α,11＿三羟基＿9酮(2)。1和2均有较强的细胞毒活性。

小鼠T-bet基因重组腺病毒载体的构建

【目的】构建小鼠T-bet基因重组腺病毒载体,为T-bet基因在支气管哮喘治疗中的作用研究提供有效的T-bet生物表达系统。【方法】采用内切酶从质粒T-bet/GFP-RV中切获约1.7kb的小鼠T-betcDNA片段,与穿梭质粒pShuttle连接,再通过稀有酶切位点将含T-betcDNA的表达盒与Adeno-X腺病毒载体骨架连接,构建重组载体pAdeno-T-bet,测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变,并转染HEK293细胞,出现CPE后取含病毒上清的细胞培养液抽提病毒DNA行PCR鉴定。【结果】PCR及酶切证实:T-betcDNA正确克隆到穿梭质粒pShuttle中,带T-betcDNA的表达盒成功重组到腺病毒载体基因组E1A缺失区,并在HEK293细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺病毒pAdeno-T-bet。【结论】本实验成功构建了小鼠T-bet基因重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒。

清热祛湿通络法治疗酒精性脂肪肝疗效观察

目的:探讨清热祛湿通络法治疗酒精性脂肪肝的疗效及机理。方法:53例酒精性脂肪肝随机分为两组,治疗组30例采用清热祛湿通络法治疗,对照组23例采用消炎利胆片治疗,观察临床疗效与IL-8、SOD、MDA及血脂水平变化的关系。结果:经治疗后,治疗组患者外周血IL-8、MDA、TG、CHOL水平均明显下降(P<0.05,P<0.01,P<0.05,P<0.05),SOD活性明显上升(P<0.05),对照组患者外周血IL-8、MDA、TG、CHOL水平均明显下降(P<0.05,P<0.01,P<0.05,P<0.05),两组患者肝功能不同程度得到恢复,两组总有效率相比较有显著性差异(P<0.05)。结论:提示清热祛湿通络法是治疗酒精性脂肪肝的有效方法,其机理可能与下调炎症细胞因子IL-8水平、减轻肝脏脂质过氧化反应、改善微循环等有关。

Cyclins/CDKs及其抑制剂的抗瘤作用

本文简要介绍了细胞周期蛋白 (Cyclins)、周期蛋白依赖性激酶 (Cyclin DependentKinases,CDKs)以及周期蛋白依赖性激酶抑制因子 (Cyclin DependentKinasesInhibitors ,CKIs)的研究最新进展以及周期调控中关键蛋白及相关抑制因子之间的相互关系 ,并着重介绍了内、外源抑制剂对细胞周期的调节作用及它们的抗瘤作用。

和解汤对慢性乙型肝炎TCRVβ_7基因表达的影响

目的:探讨和解汤对慢乙肝临床疗效与TCRVβ_7基因表达特征的相关性。方法:将慢乙肝患者45例随机分为两组,治疗组(30例)采用和解汤治疗,对照组(15例)采用常规西药治疗,观察治疗后TCRVβ_7基因表达变化。结果:经过6个月治疗,两组ALT水平均显著下降(P<O.01),治疗组5例测出TCRVβ_7基因表达,并均出现HBV-DNA、HBeAg阴转;对照组无一例测出TCRVβ_7基因表达,无一例出现HBV-DNA、HBeAg阴转。HBV-DNA、HBeAg未阴转的患者,虽肝功能恢复正常,无一例测出TCRVβ_7基因表达。两组总有效率相比较无显著性差异(P>0.05),但两组显效率相比较有显著性差异(P<0.01)。结论:和解汤对TCRVβ_7基因表达有调节作用,可能是抑制病毒复制、清除病毒的重要途径。

海绵Sigmadocia sp.中的新神经酰胺的结构确定

从南海海绵Sigmadociasp.中分离得到两个新的神经酰胺 ,通过IR ,1DNMR ,2DNMR ,FABMS等波谱和化学方法 ,确定了它们的结构分别为N_(正_二十二碳酰基 )_2_氨基_正_二十烷_1,3,4,5_四羟醇(1)和N_(2′_羟基_正_二十二碳酰基 )_2_氨基_正_十八烷_1,3,4_三羟醇(2)。

重组人内皮抑素真核表达载体pCD-sEndo的构建和表达

目的:构建表达人内皮抑素的重组真核表达载体,并将其转染人肝癌SMMC-7721细胞,观察其体外抑制血管生成的活性. 方法:将含有IL-2分泌肽的人endostatin全长cDNA插入真核表达载体pcDNA3.0产生重组质粒pCD—sEndo,利用阳离子脂质体介导将其体外转染人肝癌细胞SMMC- 7721细胞.G418筛选后得到阳性克隆,并被命名为SMMC/sEndo,采用Western—blot检测转染细胞上清中endostatin蛋白的表达,鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成实验检测转染细胞上清中内皮抑素蛋白的生物活性. 结果:成功构建endostatin基因的真核表达质粒pCD—sEndo并经酶切和序列测定证实,通过阳离子脂质体转染SMMC-7721细胞,Western-blot显示转染细胞上清有人endostatin蛋白的表达,Mr 20 000,而转然空质粒对照组未检测到目的蛋白.CAM实验显示在给予内皮抑素蛋白的鸡胚绒毛膜血管稀疏,血管密度明显减少,并且随着蛋白量的增加,血管减少程度加强. 结论:重组endostatin真核表达质粒构建正确,转染SMMC-7721细胞后可有效表达具有生物学活性的人endostatin蛋白并能分泌到细胞外.

NK4基因在人胰腺癌细胞中的表达及其对血管内皮生长的影响

目的 :构建NK4基因真核表达载体并进行转染研究。方法 :对重组质粒pcDNA3/hNK4进行酶切 ,将目的基因NK4克隆到较强的真核表达载体pRC/CMV2中 ,应用脂质体将NK4基因转染到胰腺癌细胞株SW1990中 ,G4 18筛选获得稳定表达克隆 ,采用RT -PCR及Westernblot鉴定及筛选出高转录和高表达的细胞克隆。以MTT法检测转染重组质粒pRC/CMV2 -hNK4的细胞克隆表达产物对血管内皮细胞生长的影响。结果 :在转染NK4基因的SW1990细胞克隆中 ,RT -PCR能扩增出NK4mRNA预期的 4 5 3bp片段 ,但强弱不同 ,Westernblot显示均有约 5 0kD的NK4蛋白的表达。其上清可显著抑制血管内皮细胞的生长。结论 :重组质粒pRC/CMV2 -hNK4是一种高效真核表达载体 ,并且能够在SW1990细胞中高表达 ;NK4能够抑制血管内皮细胞的生长 ,提示其在肿瘤基因治疗中可能具有重要意义。

河豚肝脏提取物多肽A的抗瘤活性实验

目的 :了解河豚肝脏提取物多肽A、B、C的抗瘤活性。方法 :体外细胞毒试验是用噻唑蓝 (MTT)法。体内抗瘤试验是用小鼠肿瘤模型S 180肉瘤。结果 :多肽A在 12 5～ 10 0 0mg·L-1浓度下 ,对人鼻咽癌细胞 (CNE2 )、人肝癌细胞 (Bel 74 0 2 )、人肺腺癌细胞 (GLC 82 )和人白血病细胞 (K 5 6 2 )的半数抑制浓度分别为 341.5 5、6 0 7.96、5 2 0 .82mg·L-1和 833.13mg·L-1;而对人胚肾上皮细胞 (HK 2 93)、人脐血管内皮细胞 (EVC 4 0 3)和人体肝细胞 (ChangLiver)的IC50 分别为 6 2 6 .2 2、5 74 13、4 93.4mg·L-1。而多肽B、C对上述细胞的生长均无作用。体内抗瘤试验表明 ,多肽A用 6 0～ 180mg·(kg·d) -1,ipqd× 10d ,对小鼠肿瘤S 180肉瘤的抑制率为 4 2 .0 %～ 4 5 .2 % ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :河豚肝脏提取物多肽A在体内、体外试验有一定的抗瘤活性 ,但其抗瘤作用与剂量无相关性 。

广东英德苦丁茶成品和水提物中微量元素和黄酮含量分析

用原子吸收分光光度计对广东英德苦丁茶成品和水提物中微量元素、黄酮及其溶出率进行了测定 ,结果表明广东英德苦丁茶含有多种微量元素 ,黄酮含量较高 ,微量元素和黄酮的水提取物溶出率也较高 ,达到4 0 %～ 6 0 % ,这种苦丁茶固有的物质含量是构成其饮用和药用价值的物质基础 。

经尿道钬激光同期治疗良性前列腺增生合并膀胱结石的临床分析

目的探讨经尿道钬激光同期治疗良性前列腺增生合并膀胱结石的可行性及安全性。方法2004年3月～2006年2月对良性前列腺增生合并膀胱结石的43例患者行经尿道钬激光前列腺剜除术(holmiumlaser enucleation of the prostate,HoLEP)及钬激光碎石术(holmium laser cystolithotripsy,HLC),分析术前及术后临床资料。结果膀胱结石平均大小约(16.7±7.8)mm;术前前列腺大小约(47.9±23.9)g;所有病人均顺利完成钬激光前列腺剜除术及钬激光碎石术,术后无结石残留;平均手术时间约(78.6±45.6)min;切除的前列腺组织约(34.7±20.3)g;保留导尿时间及住院时间分别为(2±0.6)d,(5±1.9)d;术中出血少,术后无血凝块残留,无病人需要输血,未发生前列腺电切综合征(transurethral resection syndrome,TURS)。术后随访6个月,患者排尿症状明显改善。结论本术式对于良性前列腺增生至膀胱出口梗阻合并膀胱结石的患者是安全高效的,不论结石大小及成分,增生前列腺大小均可采用此术式。

腺病毒介导自杀基因对消化系统肿瘤的杀伤作用

目的观察腺病毒介导的自杀基因对消化系肿瘤的杀伤作用。方法腺病毒介导的自杀基因HSV-TK分别转染结肠癌LOVO细胞、胃癌MGL-803细胞和肝癌BEL-7402细胞,比较腺病毒载体对不同肿瘤细胞的转染效率。加入前药丙氧鸟苷(GCV),通过MTT法检测细胞存活率,观察单纯疱疹病毒1型胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)系统对不同肿瘤细胞的杀伤作用和旁观者效应。结果在GCV浓度100mg/L以上时,3种转基因肿瘤细胞均可被HSV-TK/GCV系统完全杀伤;旁观者效应以MGL-803细胞最为明显,与LOVO细胞和BEL-7402细胞相比,差异有显著性意义(P<0.05);腺病毒对肿瘤细胞的转染效率强弱依次为BEL-7402细胞、MGL-803细胞和LOVO细胞。结论重组腺病毒可以作为消化系肿瘤基因治疗的高效载体。HSV-TK/GCV系统对胃癌MGL-803细胞的作用最佳。

严重急性呼吸道综合征冠状病毒Spike蛋白抗原特异性的临床应用研究

目的探讨严重急性呼吸道综合征(SARS)患者的SARS冠状病毒(SARSCoV)抗体产生情况以及SARSCoVSpike蛋白抗原的特异性。方法运用酶联免疫法(ELISA)和蛋白质印迹法(WesternBlotting)检测95例SARS患者体内抗体的产生情况和验证病毒Spike蛋白抗原的特异性。结果95例SARS患者血清抗体结果中,大部分患者出现抗体阳性,抗SARSCoVIgM总阳性率为91.6%(87/95),抗SARSCoVIgG总阳性率为97.9%(93/95);高暴露人群组和正常对照组的抗SARSCoVIgM和抗SARSCoVIgG阳性率为0%。经过携带Spikeprotein基因的重组病毒AdSn感染COS1细胞后表达的S蛋白抗原,使用SARS患者抗血清能够检测出特异性蛋白条带;重组病毒感染CNE2细胞后,表达的S蛋白抗原,能够通过不同患者抗血清同时检测到相应的特异性抗原蛋白。结论SARS患者感染SARSCoV后,体内可产生相应抗体;利用SARS患者所产生特异性抗血清,可以检测出克隆SARSCoV的Spike基因所表达的Spike蛋白。

肝细胞癌中p53基因的缺失与HER-2基因的扩增及其意义

目的 检测原发性肝细胞癌中 17号染色体上p5 3基因的缺失与HER 2基因的扩增并探讨其临床意义。方法 分别以不同颜色荧光标记的p5 3基因、HER 2基因和 17号染色体着丝粒为双色探针组 ,应用间期双色荧光原位杂交 (FISH)技术检测 42例肝细胞癌间期细胞核中p5 3基因、HER 2基因和 17号染色体的拷贝数及其相对比例 ,以确定其缺失或扩增 ,结合临床分期、血清甲胎蛋白 (AFP)、肿瘤大小等资料进行统计分析其临床意义。结果 42例肝细胞癌中p5 3基因缺失 2 7例( 64 3 % ) ;HER 2基因扩增 9例 ( 2 1 4% ) ,其中高拷贝扩增 (HC) 4例 ( 9 5 % ) ,低拷贝扩增 (LC) 5例( 11 9% ) ,同时具有缺失与扩增的 6例 ( 14 3 % ) ;另外 ,17号染色体多倍体有 2 6例 ( 61 9% )。p5 3基因缺失与 17号染色体多倍性呈正相关 ( χ2 =12 2 86,P <0 0 0 1) ,但与HER 2基因的扩增无关 ( χ2 =0 0 0 ,P =1 0 0 )。p5 3基因缺失与肝细胞癌患者AFP水平、肿瘤大小有关 (P <0 0 5 ) ;术后 2年存活率p5 3基因缺失患者 ( 18 5 % )显著低于无缺失患者 ( 60 0 % ,χ2 =7 467,P =0 0 0 6)。结论 原发性肝细胞癌的17号染色体上存在p5 3基因高频缺失和HER 2基因的扩增 。