内皮细胞乙酰胆碱靶标不同于M受体的药理学特征

目的 研究内皮细胞乙酰胆碱靶标与M受体药理学特征的差异。方法 采用离体血管环实验方法,观察抗M_3受体的单克隆抗体和M受体激动剂毛果芸香碱对乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张血管作用的影响。结果 毛果芸香碱能够剂量依赖性拮抗乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张作用,其拮抗性质为非竞争性拮抗;抗M_3受体的单克隆抗体不影响乙酰胆碱诱发的内皮依赖性舒张血管作用,但能拮抗乙酰胆碱诱发的离休肠肌收缩作用。结论 内皮细胞乙酰胆碱靶标的药理学特征不同于经典M受体。

《药理学》混合式教学的理论与实践

MargaretDriscoll在2002年提出混合式学习（BlendedLearning）包括4个不同的概念：①结合或混合多种网络化技术（如实时虚拟教室、自定步调学习、协作学习、流式视频、音频和文本）实现教育目标。②结合多种教学方法（如建构主义、行为主义、认知主义），利用或不利用教学技术产生最佳的学习成果。③将任何一种教学技术（如录像带、CDROM、网络化培训、电影）与面对面的课堂教学相结合。④将教学技术与实际工作任务相混合或结合，以使学习和工作协调一致。

《药理学》的教学特色

以学生为中心的导学和督学是本学科的教学理念，并形成了本学科教学的3大特色，概述如下：

CFTR氯通道调控多囊卵巢综合征患者血小板活化及炎症的机制研究

目的:研究CFTR氯通道调控多囊卵巢综合征(PCOS)患者血小板活化及炎症的机制。方法:选取2021年4月至2021年10月在中山大学孙逸仙纪念医院妇科门诊患者,满足PCOS诊断标准及对照组的纳排标准后,利用PCOS患者血样、体外细胞模型、基因干预CFTR等手段,探讨CFTR调控PCOS血小板活化的机制。结果:与月经规律女性相比,PCOS患者的月经周期,血清LH、PRL、T以及0、1、2h胰岛素和血糖均存在明显差异(P<0.001)。PCOS患者血小板中,CFTR蛋白表达水平降低,且PCOS患者的血小板活化指标P-selectin表达显著高于对照组,且与CFTR表达呈负相关;同时CFTR表达与HOMA-IR、睾酮水平呈负相关。PCOS组血小板的胞内氯浓度显著高于对照组(P<0.001),同时SGK1的磷酸化(Ser422)增加。MEG-01细胞中,相较对照组,过表达CFTR后,SGK1的磷酸化及P2Y12表达降低、胞内氯浓度下降(P<0.05)。MEG-01细胞中,相较于对照组,敲低SGK1后,P2Y12表达降低、血小板炎症指标下降(P<0.05)。结论:PCOS患者的血栓发生风险增加,其可能原因是高雄及胰岛素抵抗导致PCOS患者血小板中CFTR蛋白表达下降,从而导致血小板的[Cl-]i升高,SGK1磷酸化水平升高,引起了血小板炎症因子P2Y12的升高,最终导致血小板活化增加,血栓风险增加。

紫草素通过PI3K/Akt通路促进人乳腺癌MCF-7细胞自噬

目的研究紫草素(Shikonin)对人乳腺癌MCF-7细胞自噬的影响及其作用机制。方法 CCK-8法检测紫草素处理人乳腺癌MCF-7细胞24、48 h细胞的存活率,Western blot方法检测紫草素处理24 h和48 h时LC3、p62、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白水平。结果 1μmol.L-1紫草素处理细胞48 h以及2.5、5μmol.L-1紫草素处理MCF-7细胞24 h和48 h时,MCF-7细胞的活力受到明显抑制,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值增加,p62表达减少,总PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt均减少。结论紫草素促进乳腺癌MCF-7细胞自噬,其作用机制可能与PI3K/Akt通路受到抑制有关。

我院老年患者使用利奈唑胺的不良反应分析

目的:对老年住院患者使用利奈唑胺的安全性进行分析,并探讨其不良反应发生规律。方法:采用回顾性研究方法,选取我院2014年1月-2015年12月使用利奈唑胺注射剂或片剂的老年患者病例,统计并分析不良反应发生情况。结果:共纳入有效病例126例,年龄65~94岁,使用利奈唑胺的平均时间为(9.47±6.31)d(范围1~35 d)。用药后出现不良反应的有45例(35.71%),其中血小板减少39例(30.95%),白细胞减少9例(7.14%),血红蛋白减少7例(5.55%),恶心、呕吐6例(4.76%),转氨酶升高4例(3.17%),腹泻4例(3.17%),乳酸性酸中毒2例(1.59%),皮疹2例(1.59%),药物热1例(0.79%)。重症监护治疗病房(ICU)患者血小板减少症的发生率明显高于非ICU患者,差异有统计学意义(P=0.019);利奈唑胺不同剂型间的发生率比较,差异无统计学意义(P=0.218)。结论:医师和临床药师应该对使用利奈唑胺的老年患者密切监护,警惕不良反应的发生,尤其是ICU患者,其血小板减少发生率较高,且应常规监测血清乳酸水平。

人参皂苷RdC_(12)差向异构体的合成及其对大鼠主动脉环收缩反应的影响

目的 探讨人参皂苷RdC12 手性碳构型改变与其药理活性的关系。方法 制备RdC12 位差向异构体 (12 epi Rd) ;观察比较 12 epi Rd与Rd对苯肾上腺素 (phenyle phrine ,Phe)收缩大鼠离体主动脉环作用的影响。结果 首次成功制备了 12 epi Rd ;Rd(40、80 μmol·L-1)与 12 epi Rd(40、80 μmol·L-1)均可浓度依赖性抑制Phe收缩血管环的最大效应 ,其拮抗指数 pD2 ′分别为 :4 0 8± 0 15和 4 0 7±0 16 ,二者差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 人参皂苷RdC12

中波段紫外线对角质形成细胞凋亡的诱导和钙信号的影响

目的 观察中波段紫外线 (UVB)照射诱导人永生化角质形成细胞 (HaCaT细胞 )的凋亡和对细胞静息Ca2 + 及thapsigargin和adrenaline引起的Ca2 + 运动影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)染色法分析受UVB照射后细胞存活率的变化 ,用流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和Hoechst332 5 8核染色法观察UVB对HaCaT细胞凋亡的影响 ,采用Fura 2 /AM荧光分光光度法测定胞浆游离Ca2 + 浓度的变化。结果 在 1 2 5～ 6 2 5J·m-2 的UVB照射剂量之间和照射后培养时间 2 4h内的条件下 ,UVB照射以剂量和时间依赖的方式抑制细胞的存活率 ;在照射后培养时间 1 8h内以剂量依赖的方式诱导细胞凋亡 ;2 5 0J·m-2 UVB照射后 ,细胞的静息钙迅速下降 ,在照射后第 6h静息钙降至最低 ,且thapsigargin(1 0μmol·L-1 )和adrenaline(1 0 μmol·L-1 )所引起的钙释放及由此产生的钙内流也随照射后培养时间的延长而逐渐减少。结论 UVB照射可诱导HaCaT细胞的凋亡及引起细胞钙稳态的失衡。

磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强的诱导和维持中的作用

实验旨在探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin—dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强(long-term potentiation,LTP)的诱导和维持中的作用。用Western blot技术分别检测LTP形成30 min和3 h脊髓背角(L4-L6)CaMK Ⅱ的含量及其磷酸化水平。同时观察脊髓局部给予CaMK Ⅱ选择性抑制剂KN-93后对脊髓背角LTP和CaMK Ⅱ磷酸化的影响。观察结果如下:(1)诱导LTP后30 min.CaMK Ⅱ的磷酸化水平明显高于对照组,而CaMKⅡ的总量无变化;诱导LTP后3 h CaMK Ⅱ的磷酸化水平进一步升高,而且CaMK Ⅱ的总量也明显增加(n=4);(2)强直刺激前30 min 于脊髓局部给予CaMK Ⅱ的特异性抑制剂KN-93(100μmol/L),可阻断LTP的诱导,同时明显抑制CaMK Ⅱ的磷酸化水平;(3)诱导LTP后30 min给予KN-93,可显著抑制LTP的维持,同时CaMKⅡ的磷酸化水平与未用药组相比也明显降低(n=3);(4)LTP 3 h后给予KN-93,LTP的幅值不受影响,磷酸化的CaMKⅡ的含量与用药前相比也无差别(n=3)。根据上述实验结果可以认为,CaMK Ⅱ的激活参与脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持过程。

ClC-3反义寡核苷酸对ConA诱导的T淋巴细胞增殖的影响

目的 研究ClC 3蛋白在T淋巴细胞增殖过程中的作用。方法 采用脂质体转染技术 ,将寡核苷酸导入细胞 ,免疫印迹 (WesternBlot)方法分析ClC 3蛋白表达 ;[3H] TdR参入法观察ClC 3反义寡核苷酸对细胞增殖的作用。结果 ①ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的ClC 3蛋白的表达 ;②ClC 3反义寡核苷酸浓度依赖性地抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖。结论 ClC

大鼠脑基底动脉平滑肌细胞培养及功能鉴定

目的探讨大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的培养方法,了解生长特性。方法用组织贴块法培养大鼠脑基底动脉平滑肌,用免疫细胞化学法鉴定细胞,用RF-5000荧光分光光度计观察细胞内Ca2+浓度的动态变化来检测其活性。结果培养5d后可见组织块周围有平滑肌细胞长出,2wk后可融合传代,经平滑肌特异性肌动蛋白α-actin鉴定,确定为平滑肌细胞。钙离子通道激动剂可诱导细胞Fura-2荧光比值(F340/F380)上升,细胞活性良好。结论组织贴块法是大鼠脑基底动脉平滑肌细胞培养简单、高效、经济的实验方法,为脑血管疾病发病机制的研究提供了理想的细胞模型。

秦皮乙素对BALB/c裸鼠体内胶质瘤生长的影响

【目的】探讨秦皮乙素(Esc)的体内抗胶质瘤活性,为秦皮乙素进一步研究开发为抗胶质瘤药物提供实验依据。【方法】采用C6细胞前肢腋下皮下注射BALB/c裸鼠种瘤构建荷瘤鼠模型;分为4组:模型组、50 mg/kg秦皮乙素组、100mg/kg秦皮乙素组和阳性对照组;采用瘤体积、相对肿瘤增殖率、瘤质量、肿瘤生长抑制率和体质量5个指标评价秦皮乙素的体内抑瘤效果;采用HE染色鉴定瘤体。【结果】与模型组相比,秦皮乙素可显著抑制雄性荷瘤鼠的瘤体积约10倍,瘤质量约8倍,对其体质量无显著影响,与阳性对照药尼莫司汀(ACNU)相似;对雌性荷瘤鼠瘤体的生长无显著抑制作用。【结论】秦皮乙素在雄性荷瘤鼠体内具有显著抗胶质瘤活性,为秦皮乙素进一步开发为抗胶质瘤药物提供了实验依据。

KN-93抑制脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持

[目的]探讨钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强(LTP)的诱导和维持中的作用。[方法]用钨丝微电极在脊髓腰膨大部背角浅层神经元细胞外记录C-纤维诱发电位,强直刺激坐骨神经诱导背角C-纤维诱发电位的LTP。在LTP诱导前后,在暴露的脊髓表面局部给予CaMKⅡ的选择性抑制剂KN-93,观察C-纤维诱发电位的变化。[结果]50μmol/L的KN-93不影响脊髓背角C-纤维诱发电位的幅度,但可完全阻断脊髓背角LTP的诱导(n=6)。KN-93呈时间依赖性翻转脊髓背角LTP。在LTP诱导后30min,50μmol/L的KN-93对LTP的早期表达无影响(n=4),而100μmol/L的KN-93在用药后,LTP逐渐降低,于3h降至对照水平(n=6);在LTP诱导后1h脊髓局部给予100μmol/L的KN-93,7例动物中有5例LTP被抑制;但同样浓度的KN-93,在LTP诱导后3h,不能翻转业已建立的LTP(n=5),且增加KN-93的浓度至200μmol/L也不能抑制脊髓背角LTP。[结论]CaMKⅡ参与脊髓背角C纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持,但KN-93对晚期LTP无抑制作用。

米诺环素抑制MPP^+诱导的PC12细胞凋亡和线粒体功能损伤

目的:探讨米诺环素(minocycline)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞凋亡和线粒体功能损伤的保护作用。方法:将MPP+加入体外培养的的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元凋亡模型,实验过程中用minocycline进行预处理,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞存活率,Hoechst染色检测细胞凋亡,DCFH-DA检测ROS聚集,JC-1检测细胞线粒体膜电位变化。结果:0.5 mmol/L MPP+处理PC12细胞24 h,能明显抑制细胞生长(抑制率80.8%),诱导细胞发生凋亡(凋亡率5.22%),同时ROS浓度提高230.0%,线粒体膜去极化(绿/红荧光强度比为11.95)。而加入10μmol/L minocycline预处理30 min可明显升高MPP+处理的PC12细胞活性,细胞凋亡率明显降低(P<0.01),ROS浓度明显下降,绿/红荧光强度比也明显降低(P<0.01)。结论:Minocycline抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡部分通过对抗其线粒体功能而发挥作用。

甘遂和贯众不同提取液对蚊幼虫的杀伤作用

目的 了解甘遂 (EuphorbiakansuiLiouMass)和贯众 (Dryopteriscrossirhizomz)不同提取液对蚊幼虫杀伤的作用。方法 分别采用乙醚、乙醇、丙酮、水提取两种草药干样品植物成分。用 2 %的浓度 (2g生药 / 10 0ml溶液含 )浸渍法处理致倦库蚊、白纹伊蚊敏感株Ⅲ龄末～Ⅳ龄初幼虫。结果 2 %甘遂和贯众草药的乙醚、乙醇提取液对致倦库蚊幼虫的杀伤分别高达 95 0 %± 4 4 % ,90 0 %± 3 5 % ,83 0 %± 0 6 %与 75 0 %± 2 0 %。贯众对白纹伊蚊幼虫的杀伤力强度明显优于甘遂 ,乙醚、乙醇提取液分别为 6 1 6 %± 0 6 %与 2 3 2 %±及 6 6 6 %± 1.0与30 0 %± 1 0 %。贯众丙酮的粗提物的杀伤力较差 ,均低于 10 % ,水提液对致倦库蚊、白纹伊蚊幼虫无杀伤作用。结论 甘遂和贯众的提取液对致倦库蚊有显著的杀伤作用。贯众乙醚、乙醇提取液对白纹伊蚊幼虫的杀伤作用较甘遂草药提取液的杀伤作用强。两种草药对蚊虫的毒力主要成分溶于醚及醇。

尼古丁对6-羟多巴胺诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用

目的 探讨尼古丁对 6 羟多巴胺 (6 OHDA)诱导PC1 2细胞凋亡的拮抗作用及其与烟碱受体的关系。方法 用 6 OHDA诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC1 2细胞凋亡的细胞模型 ;用MTT、二乙酸荧光素活细胞染色、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳等方法检测PC1 2细胞的凋亡 ;用尼古丁及N型和M型受体拮抗剂预处理 ,观察尼古丁的拮抗作用及其与受体的关系。结果 尼古丁可明显拮抗 6 OHDA(50 μmol·L-1 )诱导PC1 2细胞凋亡 ,呈钟型浓度效应关系 ,1 0 μmol·L-1 尼古丁的拮抗作用最强。用 1 0 μmol·L-1 尼古丁预处理PC1 2细胞 2h可明显降低 6 OHDA诱导的细胞凋亡。用 1 0 μmol·L-1 六甲溴胺阻断烟碱受体 ,可取消尼古丁对 6 OHDA诱导细胞凋亡的拮抗作用 ;但用阿托品阻断M型胆碱受体 ,对尼古丁的拮抗作用则无明显影响。结论 尼古丁对 6 OHDA诱导的PC1 2细胞凋亡有明显的拮抗作用 ,这种作用由烟碱受体所介导。

刀豆蛋白A促进T淋巴细胞增殖与ClC-3蛋白的关系

目的 研究刀豆蛋白A(ConA)促进T淋巴细胞增殖与内源性ClC 3蛋白的关系。方法 免疫印迹 (Westernblot)法检测ClC 3蛋白表达 ;[3 H] TdR参入法观察ConA对细胞增殖的影响。结果 ①T淋巴细胞上有内源性ClC 3蛋白表达 ,分子量约为 80ku ;②ConA可浓度依赖性地促进T淋巴细胞增殖 ;③ConA刺激T淋巴细胞 2 4、4 8、72h后 ,ClC 3蛋白表达均增加 ;刺激 4 8h后ClC 3蛋白表达增加最多。④ConA可浓度依赖性地增加ClC 3蛋白表达。结论 T淋巴细胞上存在内源性ClC 3蛋白表达 ;ClC

缝隙连接蛋白43组成的缝隙连接对依托泊苷抗肿瘤作用的影响

背景与目的:缝隙连接能够增强化疗药物的细胞毒性,但缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)组成的缝隙连接对依托泊苷抗肿瘤作用的影响尚不清楚。因此,本研究拟观察睾丸癌细胞中Cx43对依托泊苷抗肿瘤作用的影响。方法:采用细胞接种荧光示踪实验检测睾丸癌细胞由Cx43形成的缝隙连接通讯功能,同时检测不同的药物(18-α-甘草次酸及维甲酸)和Cx43干扰RNA对缝隙连接功能的影响;采用标准细胞集落形成分析法检测睾丸癌细胞中由Cx43形成的缝隙连接通讯功能改变后,对依托泊苷抑制肿瘤细胞生长作用的影响。结果:荧光示踪实验显示18-α-甘草次酸可显著降低缝隙连接通讯功能,而维甲酸则可增强缝隙连接功能;Cx43干扰RNA能够显著抑制缝隙连接功能。标准细胞集落形成实验结果表明,在缝隙连接形成的睾丸癌细胞中,18-α-甘草次酸显著降低依托泊苷对睾丸癌细胞生长的抑制作用,而维甲酸则增强依托泊苷对睾丸癌细胞生长的抑制作用;应用Cx43干扰RNA能够显著降低依托泊苷对睾丸癌细胞生长的抑制作用。结论:睾丸癌细胞中Cx43形成的缝隙连接通讯功能降低能够减弱依托泊苷的抗肿瘤作用;而缝隙连接通讯功能增强能够增强其抗肿瘤作用。

顺铂注射液细菌内毒素的动态浊度法定量研究

目的 考察顺铂注射液进行细菌内毒素检查的可行性。方法 采用凝胶法和动态浊度法鲎试验。结果 6批顺铂注射液稀释至 0 1 4 g·L- 1 时对细菌内毒素检查没有干扰作用 ,而稀释至 0 2 8g·L- 1 时 3批样品有明显的干扰作用 ;所有检测样品的细菌内毒素含量均小于 1 8ZU·g- 1 。结论 动态浊度法鲎试验提供了一个测定顺铂注射液细菌内毒素含量的新方法 ,日常细菌内毒素检查时可将样品稀释至 0 1 4 g·L- 1