海马神经元α7型烟碱样乙酰胆碱受体的失敏特征

目的研究大鼠海马神经元α7型烟碱样乙酰胆碱受体(α7-nAChR)的失敏特征。方法在培养大鼠海马神经元上,以胆碱作为工具药,采用膜片钳全细胞记录方式研究胆碱诱发α7型烟碱样乙酰胆碱受体失敏的电生理学特征。结果在培养大鼠海马神经元上,喷射胆碱可诱发出一内向电流,能被α7-nAChR选择性拮抗剂methyllycaconitine(10 nmol.L-1)和α-bungarotoxin(100 nmol.L-1)明显阻断;延长高浓度胆碱(10 mmol.L-1)的给药时间不影响α7-nAChR的失敏和失敏态的恢复,但可以延长其处于完全失敏态的时间;灌流低浓度胆碱(50、100μmol.L-1)可以使α7-nAChR缓慢失敏,失敏程度与胆碱浓度有关。结论高浓度胆碱诱发α7-nAChR的快速失敏及恢复与给药时间无关,低浓度胆碱诱发受体的缓慢失敏及恢复与浓度有关。

眼镜蛇镇痛素najanalgesin对大鼠神经病理性疼痛脊髓GLT-1的影响

目的： 观察眼镜蛇镇痛素najanalgesin对L5脊神经结扎并剪断（spinal nerve ligation and transection, SNL）大鼠脊髓胶质细胞谷氨酸转运体亚型1（GLT-1）表达的影响,探讨najanalgesin脊髓镇痛机制。 方法： 100只雄性SD大鼠,随机分为假手术组（A）、SNL模型组（B）、SNL＋najanalgesin 组（C）、SNL＋生理盐水对照组（D）、SNL＋najanalgesin＋脂质体组（E）、SNL＋najanalgesin＋脂质体＋GLT-1反义寡核苷酸（As-ODNs,F）6组。鞘内分别注射10 μL生理盐水（A,D）、40 ng·kg-1najanalgesin（C,E,F）,每日1次,在注射najanalgesin的同时于第3天一次性注射脂质体＋GLT-1As-ODNs 10 μL（F）以及脂质体10 μL（E）,术后1,4,7 d（A,B,C,D）及第7天（E,F）取各组大鼠L4~L6脊髓节段,检测各组GLT-1 mRNA和蛋白表达改变。 结果： 采用SNL成功建立了神经病理性疼痛模型。与假手术组相比,B,D组大鼠GLT-1 mRNA和蛋白表达先增加再降低, C组大鼠GLT-1 mRNA和蛋白表达明显增加, 但不随时间变化。与D组相比,C组大鼠第7天GLT-1 mRNA和蛋白表达明显增高。与椎管内注射najanalgesin组相比,椎管内注射GLT-1As-ODNs后,F组GLT-1表达明显下降,而脂质体对照组GLT-1的表达基本不变。 结论： najanalgesin可以增加脊髓GLT-1 mRNA和蛋白表达,是其脊髓镇痛机制之一。

生育酚结合蛋白基因重组腺相关病毒的制备及抗癌作用

目的制备生育酚结合蛋白（TAP）重组腺相关病毒，并探讨其对前列腺癌生长的作用。方法构建重组腺相关病毒质粒pSNAV-TAP-EGFP，酶切、聚合酶链反应（PCR）、测序。225cm2细胞培养瓶中，接种293T细胞，以重组质粒转染。扩增、纯化病毒，并转染DU-145细胞，噻唑蓝（MTT）比色法观察第2、4、6天的细胞增殖。结果成功构建pSNAV—TAP—EGFP质粒，并制备滴度6．4×10^11vg／ml、纯度95％的rAAV2-TAP。该病毒转染DU-145细胞后TAP表达量明显上升。转染后第4天，TAP转染组的细胞吸光度（A值）0．546±0．072，对照组以及空载体转染组的A值分别为0．673±0．015、0．638±0．051，生长明显受到抑制（P〈0．05）。至第6天各组细胞生长差异更显著。结论成功制备高滴度的rAAV—TAP—EGFP病毒，并可抑制前列腺癌细胞的生长。