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应用蛋白质组学方法分析猪晶状体不同区域上皮细胞中蛋白质的表达差异 被引量:3
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作者 罗琳 马璇 +3 位作者 张艳莉 刘炜 黎明涛 吴开力 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期17-21,共5页
应用蛋白质组学方法分析比较猪晶状体中央和周边上皮细胞的蛋白质表达差异。将32个正常猪晶状体前囊膜所附着于的上皮细胞分为中央和周边两部分,经二维凝胶电泳分离和凝胶考马斯亮兰染色,质谱(MALD I-TOF-MS)鉴定差异蛋白质斑点,并对鉴... 应用蛋白质组学方法分析比较猪晶状体中央和周边上皮细胞的蛋白质表达差异。将32个正常猪晶状体前囊膜所附着于的上皮细胞分为中央和周边两部分,经二维凝胶电泳分离和凝胶考马斯亮兰染色,质谱(MALD I-TOF-MS)鉴定差异蛋白质斑点,并对鉴定的蛋白质进行分类。结果显示来自中央与周边区域的猪晶体上皮细胞的蛋白在二维凝胶上分别有801和886个蛋白质斑点,鉴定出差异表达蛋白84个。差异表达的蛋白质在功能上有一定趋向性,主要涉及代谢、细胞骨架、信号转导/细胞周期/转录因子等。 展开更多
关键词 蛋白质组学 二维电泳 质谱 晶状体 上皮细胞
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蛋白质组学检测β-原肌球蛋白在结肠癌组织中的表达 被引量:4
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作者 崔冀 康玉博 +4 位作者 黄帅 马晋平 蔡世荣 刘伟 黄奕华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1509-1512,共4页
目的:通过比较结肠腺癌与正常结肠黏膜的蛋白质组表达差异,寻找与结肠腺癌发生相关的蛋白质,筛选结肠癌诊断的分子标志物。方法:运用蛋白质组学技术,对8例结肠腺癌组织和8例正常结肠黏膜组织进行胶内差异双向电泳(2-D),选择差异表达超过... 目的:通过比较结肠腺癌与正常结肠黏膜的蛋白质组表达差异,寻找与结肠腺癌发生相关的蛋白质,筛选结肠癌诊断的分子标志物。方法:运用蛋白质组学技术,对8例结肠腺癌组织和8例正常结肠黏膜组织进行胶内差异双向电泳(2-D),选择差异表达超过2倍的蛋白质进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物信息学分析,并对结肠癌组织中表达下调的蛋白β-原肌球蛋白(TMβ)进行Western blotting验证。结果:成功建立结肠腺癌和正常结肠黏膜的双向凝胶电泳图谱,结肠腺癌和正常黏膜组织凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3289和3066,其中表达差异超过2倍的斑点共有31个,质谱分析和数据库检索共鉴定出18种蛋白质,包括cytoker-atin8、cytokeratin10、S100A6、TMβ、proteindisulfide isomerase等。从功能分析,这些差异蛋白与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关;TMβ在结肠癌组织中的表达水平Western blotting结果与电泳结果一致。结论:蛋白质组学能有效地分离和鉴定结肠腺癌组织与正常结肠组织间的差异表达蛋白质,结肠癌组织中表达下降的TMβ,可能成为结肠癌诊断的分子标记物。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 蛋白质组 原肌球蛋白
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骨肉瘤组织与良性骨肿瘤的比较蛋白质组学分析 被引量:4
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作者 梁琼 李扬 +4 位作者 王连唐 刘郁林 罗灿桥 梁惠珍 黎明涛 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1089-1093,共5页
目的:分析骨肉瘤与骨良性肿瘤差异蛋白质质点,寻找影响骨肉瘤恶性生物学行为的分子指标。方法:固相pH梯度双向凝胶电泳分离5例骨肉瘤组织与5例良性骨肿瘤组织总蛋白。Deep purple荧光染色,Im-ageMaster 2DE软件分析,对差异蛋白质点采用... 目的:分析骨肉瘤与骨良性肿瘤差异蛋白质质点,寻找影响骨肉瘤恶性生物学行为的分子指标。方法:固相pH梯度双向凝胶电泳分离5例骨肉瘤组织与5例良性骨肿瘤组织总蛋白。Deep purple荧光染色,Im-ageMaster 2DE软件分析,对差异蛋白质点采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定肽质指纹图谱并查询SWISS-PROT数据库。结果:获得重复性较好的双向电泳荧光染色图谱。图像分析检测骨肉瘤组织平均蛋白点数为1 386±101,良性骨肿瘤组织平均蛋白点数为1 270±202。初步鉴定出22个差异表达蛋白质点,其中15个在骨肉瘤中表达上调,以锌指蛋白133(zinc finger protein 133,Znf133)、laminB和T-复合多肽1(tailless complex poly-peptide 1,TCP-1)上调明显;7个在骨肉瘤中表达下调,其中蛋白激酶C抑制因子-1(protein kinase C inhibitor pro-tein 1,KCIP-1)表达缺失。结论:骨肉瘤组织与良性骨肿瘤的蛋白质表达存在明显差异,其中Znf133、laminB、TCP1、KCIP-1等可能在骨肉瘤的发生发展中发挥重要作用,有可能成为诊断骨肉瘤的分子标记物或治疗靶点。 展开更多
关键词 骨肉瘤 蛋白质组
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克罗恩病患者与健康人血清蛋白质组学比较初步研究 被引量:3
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作者 康亮 黄美近 +4 位作者 杨祖立 王磊 刘炜 黎明涛 汪建平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2433-2438,共6页
目的:应用蛋白质组学方法在患者血清中寻找与克罗恩病相关的蛋白质。方法:采取克罗恩病患者以及正常成人血清蛋白样本各4例,用不同的CyDye荧光染料标记后进行胶内差异双向凝胶电泳(2-D DIGE),并对获得的图谱进行分析及对差异蛋白质进行... 目的:应用蛋白质组学方法在患者血清中寻找与克罗恩病相关的蛋白质。方法:采取克罗恩病患者以及正常成人血清蛋白样本各4例,用不同的CyDye荧光染料标记后进行胶内差异双向凝胶电泳(2-D DIGE),并对获得的图谱进行分析及对差异蛋白质进行基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定和生物学信息分析。结果:通过2-D DIGE分析,发现了克罗恩病患者中存在29个表达异常蛋白质点,质谱分析和数据库检索共鉴定出22种蛋白质,包括SER/THR,CD45,APC等。结论:蛋白质组学能很好显示克罗恩病患者与正常人血清蛋白质表达差异,本研究鉴定的蛋白质可能为研究克罗恩病的生物学行为提供新的分子标记物。 展开更多
关键词 CROHN病 蛋白质组
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应用亲和磷酸蛋白质组学筛选氧化应激重塑型LPS通路的侯选信号分子 被引量:1
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作者 邹志鹏 潘婷 +3 位作者 李煜生 刘炜 朱振宇 姜勇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1189-1194,共6页
目的:研究低剂量LPS刺激的Thp-1细胞在有或无H2O2预处理时磷酸化蛋白组的差异,以初步筛选氧化应激重塑型LPS通路中的新信号分子。方法:使用PMA刺激Thp-1单核细胞36h使之分化成为成熟的巨噬细胞,静息36h后,先以等体积的培养基或100μmol/... 目的:研究低剂量LPS刺激的Thp-1细胞在有或无H2O2预处理时磷酸化蛋白组的差异,以初步筛选氧化应激重塑型LPS通路中的新信号分子。方法:使用PMA刺激Thp-1单核细胞36h使之分化成为成熟的巨噬细胞,静息36h后,先以等体积的培养基或100μmol/L H2O2刺激1h,再以培养基或10μg/L LPS刺激30min。采用PMAC(phosphoprotein metal affinity column)富集各组细胞的磷酸化蛋白质,经超滤除盐后进行二维凝胶电泳,比较LPS组和H2O2+LPS组的磷酸化蛋白图谱的差异,并挑选部分斑点进行质谱鉴定。结果:相对于LPS组(仅用LPS刺激的细胞),在H2O2+LPS组(LPS刺激前经H2O2提前处理的细胞)中,有29个磷酸化蛋白斑点在双向电泳图谱中表现出可重复的差异,其中,17个斑点发生了上调(包括新出现的斑点),12个发生了下调(包括消失的斑点)。我们已经鉴定出其中5个差异蛋白,这些蛋白参与多种多样的细胞过程例如蛋白质降解、信号转导和蛋白质折叠等。其中,在H2O2+LPS组中显著下调的proteasome beta-4亚基与LPS信号传递关系密切。结论:亲和磷酸蛋白组学有效减少了高丰度的结构蛋白的干扰并增加了信号分子检出的可能性。上述5个蛋白尤其是proteasome beta-4亚基可能是氧化应激重塑型LPS通路的重要调节分子。 展开更多
关键词 脂多糖类 电泳 氧化性应激 磷酸化蛋白质组学
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应用蛋白质组学的方法筛选胰腺干细胞标记物 被引量:1
6
作者 杨明 王春友 +3 位作者 刘涛 汪洋 刘炜 黎明涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第6期540-547,共8页
探索利用蛋白质组学的方法筛选胰腺干细胞的标记物.通过大鼠胰腺大部分切除(Px)的方法建立胰腺增生模型,采用双向电泳(2DE)分离比较Px术后第3天大鼠增生胰腺组织与假手术(Sx)非增生胰腺组织蛋白质的表达谱差异,用基质辅助激光解吸离子... 探索利用蛋白质组学的方法筛选胰腺干细胞的标记物.通过大鼠胰腺大部分切除(Px)的方法建立胰腺增生模型,采用双向电泳(2DE)分离比较Px术后第3天大鼠增生胰腺组织与假手术(Sx)非增生胰腺组织蛋白质的表达谱差异,用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和肽质量指纹图谱(PMF)的方法对差异蛋白进行鉴定,进一步经生物信息学检索,筛选与胚胎发育和细胞分化相关的蛋白质分子.蛋白质印迹分析蛋白质HSP47、Vimentin在Px大鼠胰腺组织中的表达,以验证2DE的结果.2DE显示Sx和Px大鼠胰腺组织平均蛋白质点数分别为(1369±31)和(1315±28)个,其中共有91个蛋白质点出现1.5倍以上的表达差异.所有差异蛋白质点PMF鉴定出53种蛋白质,其中Vimentin,cytokeratin8(CK8),lymphocytecytosolicprotein1(L-plastin),heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2/B1(hnRNPA2/B1)和L-arginine:glycineamidinotransferase(AGAT)与胚胎发育和细胞分化有关,这些蛋白质可能是胰腺干细胞潜在的候选标记物.总之,蛋白质组学的方法利用其高通量的特点能有效发现潜在的胰腺干细胞生物学标记物. 展开更多
关键词 蛋白质组学 胰腺干细胞 胰腺增生 分子标记物 VIMENTIN
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胎鼠肌组织蛋白质组的双向电泳分析 被引量:1
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作者 周海涛 富伟能 +1 位作者 金春莲 孙开来 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1087-1088,共2页
目的优化胚胎鼠肌组织蛋白质组双向电泳分析方法。方法以固相pH梯度胶条等电聚焦为第1向,以十二烷基磺酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳为第2向,对孕21 d大鼠胚胎胫骨后肌总蛋白进行双向电泳,经银染或考马斯亮蓝染色,并采用ImageMaster 5.0... 目的优化胚胎鼠肌组织蛋白质组双向电泳分析方法。方法以固相pH梯度胶条等电聚焦为第1向,以十二烷基磺酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳为第2向,对孕21 d大鼠胚胎胫骨后肌总蛋白进行双向电泳,经银染或考马斯亮蓝染色,并采用ImageMaster 5.0软件分析处理。在不同的3张胶上选一对应点进行质谱分析和网络数据检索鉴定。结果获得了分辨率及重复性均较好的二维图谱。对应点质谱数一致。结论通过条件优化双向电泳结果能满足胎鼠肌组织蛋白质点分析鉴定需要。 展开更多
关键词 双向电泳 蛋白质组 大鼠胎胚
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脑胶质瘤细胞放射抗拒的比较蛋白质组学研究 被引量:1
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作者 胡震 刘少军 +3 位作者 刘炜 黎明涛 夏云飞 陈忠平 《中国神经肿瘤杂志》 2008年第3期179-183,共5页
背景与目的:脑胶质瘤是神经外科最常见的恶性疾病,放射治疗是重要手段之一,但大部分患者对放疗不敏感或放疗后复发。本文研究人脑胶质瘤细胞株MGR2及其经间歇性大剂量X射线照射而存活的后代细胞MGR2R52在蛋白质组水平的表达差异,旨在探... 背景与目的:脑胶质瘤是神经外科最常见的恶性疾病,放射治疗是重要手段之一,但大部分患者对放疗不敏感或放疗后复发。本文研究人脑胶质瘤细胞株MGR2及其经间歇性大剂量X射线照射而存活的后代细胞MGR2R52在蛋白质组水平的表达差异,旨在探讨胶质瘤放射敏感性以及放射后存活肿瘤细胞的分子机制以提高胶质瘤的治疗效果。方法:提取MGR2和MGR2R52及二者经2Gy照射后继续培养48h细胞的总蛋白,分别进行Cydye染料标记和胶内差异双向电泳(2D-DIGE)分离;经Typhoon 9400型多功能激光扫描仪不同波长的激光扫描后,获取荧光胶内差异表达图谱,继而采用DeCyder软件进行图谱分析;选取2D-DIGE图谱中差异表达≥1.5倍且P值≤0.001的蛋白质斑点,通过全自动斑点处理工作站切点、酶解和点样后,使用基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱仪(MALDI-TOFMS)进行蛋白质的肽指纹图谱(PMF)鉴定。结果:MGR2与MGR2R52之间共有110个蛋白点强度差异≥1.5倍(P<0.001),经MALDI-TOF-MS鉴定发现干扰素诱导的Mx蛋白和人发动蛋白2(片断474-870)在MGR2R52中表达显著增高,分别增加4.66及9.03倍,并且两者同属于发动蛋白家族。结论:发动蛋白家族在放射存活的胶质瘤细胞中表达明显增加,其在胶质瘤细胞放射抗拒机制中的作用可能与促进细胞内吞功能有关,在此基础上进行胶质瘤放疗联合以腺病毒为载体的基因治疗研究,将有可能提高胶质瘤的治疗效果。 展开更多
关键词 胶质瘤 放射治疗 胶内差异双向电泳 基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱 发动蛋白
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灵芝孢子促进大鼠受损伤脊髓运动神经元存活及其轴突再生相关蛋白质组学的初步研究 被引量:15
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作者 张伟 曾园山 +3 位作者 汪洋 刘炜 程进军 陈穗君 《中西医结合学报》 CAS 2006年第3期298-302,共5页
目的:寻找与灵芝孢子促进受损伤脊髓运动神经元存活及其轴突再生相关的蛋白质。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和灵芝孢子治疗组。模型组和灵芝孢子治疗组大鼠行脊神经腹根切断术。灵芝孢子治疗组大鼠胃饲灵芝孢子14 d。取各组... 目的:寻找与灵芝孢子促进受损伤脊髓运动神经元存活及其轴突再生相关的蛋白质。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和灵芝孢子治疗组。模型组和灵芝孢子治疗组大鼠行脊神经腹根切断术。灵芝孢子治疗组大鼠胃饲灵芝孢子14 d。取各组大鼠脊髓灰质组织蛋白质,行双向电泳,采用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱仪鉴定各组之间有明显差异表达的蛋白质。结果:各组之间共有6种蛋白质的表达存在差异,分别是塌陷反应介导蛋白2(collapsin response mediator protein 2,CRMP-2)、纤维型肌动蛋白加帽蛋白β(F-actin capping protein beta subunit,FCP-β)、异柠檬酸脱氢酶β(isocitrate dehydrogenase[NAD]subunit beta,IDH-β)、三磷酸腺苷酶(ATPase)、谷氨酸草酰乙酸氨基转移酶1(glutamate oxaloace-tate transaminase-1,GOT1)和丙酮酸激酶-M2(M2 pyruvate kinase,M2-PK)。灵芝孢子治疗组CRMP-2、IDH-β、ATPase和GOT1的表达高于模型组,而FCP-β和M2-PK的表达则低于模型组。结论:灵芝孢子可能通过上调或下调上述蛋白质的表达,参与促进大鼠受损伤脊髓运动神经元存活及其轴突再生作用。 展开更多
关键词 灵芝孢子 蛋白质组学 腹根切断 神经元存活 轴突再生 大鼠
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颅内动脉瘤患者血清蛋白组变化的研究 被引量:5
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作者 朱永华 刘炜 +5 位作者 石忠松 刘少军 李明昌 黎明涛 潘伟生 黄正松 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期652-656,共5页
【目的】寻找颅内动脉瘤患者血清中表达差异的蛋白。【方法】采集12例血清蛋白样本(颅内动脉瘤患者4例、脑挫裂伤患者4例及正常成人本4例)用不同的CyDye染料交叉标记后依次进行双向胶内差异凝胶电泳(2-DDIGE)、图像分析及基质辅助激光... 【目的】寻找颅内动脉瘤患者血清中表达差异的蛋白。【方法】采集12例血清蛋白样本(颅内动脉瘤患者4例、脑挫裂伤患者4例及正常成人本4例)用不同的CyDye染料交叉标记后依次进行双向胶内差异凝胶电泳(2-DDIGE)、图像分析及基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。【结果】发现胶号为1119的蛋白质点,在颅内动脉瘤患者血清中比正常成人组表达升高1.82倍(P<0.05),而在脑挫裂伤患者血清中与正常成人的表达差异没有统计学意义(P>0.05)。该蛋白点经质谱鉴定为结合珠蛋白。【结论】结合珠蛋白在颅内动脉瘤患者血清中表达升高,可能参与了颅内动脉瘤的形成及扩张。 展开更多
关键词 双向胶内差异凝胶电泳 图像分析 血清蛋白 颅内动脉瘤 基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱 结合珠蛋白
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Mini Zoom IPG Runner系统双向电泳分析血浆蛋白实验条件优化
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作者 周海涛 朱红 +4 位作者 龚英浩 胡金森 高宙 贾少微 黎明涛 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2006年第5期404-406,共3页
背景与目的优化MiniZoomIPGRunner系统双向电泳条件。材料与方法使用Invitrogen公司与MiniZoomIPGRunner系统配套的商品化预制胶(一向和二向)和溶液体系对血浆蛋白进行双向电泳,采用不同的聚焦条件和样品预处理,观察其对实验结果的影响... 背景与目的优化MiniZoomIPGRunner系统双向电泳条件。材料与方法使用Invitrogen公司与MiniZoomIPGRunner系统配套的商品化预制胶(一向和二向)和溶液体系对血浆蛋白进行双向电泳,采用不同的聚焦条件和样品预处理,观察其对实验结果的影响。结果提高聚焦电压增强聚焦及脱盐处理可获得比推荐条件更好的双向电泳图谱。结论提高聚焦电压增强聚焦及脱盐处理可改善MiniZoomIPGRunner系统分析血浆样品的双向电泳结果。 展开更多
关键词 血浆蛋白质组 MINI ZOOM IPG Runner系统 双向电泳
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克罗恩病患者的血清蛋白质组学研究 被引量:3
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作者 康亮 杨祖立 +5 位作者 刘炜 张泷娟 刘少军 黄美近 黎明涛 汪建平 《中华胃肠外科杂志》 CAS 2008年第3期266-269,共4页
目的寻找克罗恩病患者血清中的差异表达蛋白。方法采取克罗恩病患者以及正常成人血清蛋白样本各4例,用不同的CyDye染料交叉标记后依次进行双向胶内差异凝胶电泳(2-D DIGE)、图像分析及基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-... 目的寻找克罗恩病患者血清中的差异表达蛋白。方法采取克罗恩病患者以及正常成人血清蛋白样本各4例,用不同的CyDye染料交叉标记后依次进行双向胶内差异凝胶电泳(2-D DIGE)、图像分析及基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果通过比较二者双向电泳图,发现了克罗恩病患者中存在多个表达异常蛋白质点.其中胶号为1058的蛋白质点,在克罗恩病患者血清中比正常成人组表达升高1.68倍(P〈0.05),该蛋白点经质谱鉴定为结合珠蛋白。结论结合珠蛋白在克罗恩病血清的高表达提示在克罗恩病的病程中免疫系统失衡可能起着一定作用。 展开更多
关键词 克罗恩病 双向胶内差异凝胶电泳 结合珠蛋白
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蛋白质组学技术筛选破裂颅内动脉瘤的血清标志物 被引量:3
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作者 石忠松 朱永华 +7 位作者 刘炜 孙毅明 汪洋 龙健婷 戴华浩 黎明涛 潘伟生 黄正松 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2007年第11期850-853,共4页
目的探讨用双向凝胶电泳结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析技术从血清中筛选颅内动脉瘤标志蛋白的可行性。方法分别采集6例破裂颅内动脉瘤患者和健康成人的血清,进行双向凝胶电泳分离血清总蛋白,考马斯亮蓝染色... 目的探讨用双向凝胶电泳结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析技术从血清中筛选颅内动脉瘤标志蛋白的可行性。方法分别采集6例破裂颅内动脉瘤患者和健康成人的血清,进行双向凝胶电泳分离血清总蛋白,考马斯亮蓝染色,全自动斑点处理工作站处理差异蛋白质斑点,MALDI-TOF MS分析获取肽质量指纹图谱,对鉴定的差异蛋白质进行分析。结果两组表达差异2倍以上的蛋白质斑点有81个,质谱鉴定出5个差异蛋白质,在颅内动脉瘤血清中均呈上调表达,即α2-巨球蛋白前体、补体3前体、玻璃黏连蛋白前体、缓激肽和载脂蛋白E3。结论蛋白质组学技术平台为大规模水平筛选破裂颅内动脉瘤血清标志物提供了新方法。 展开更多
关键词 颅内动脉瘤 蛋白质组 双向凝胶电泳 质谱
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骨肉瘤患者和健康人血清的差异蛋白质组学研究 被引量:2
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作者 靳松 沈靖南 +7 位作者 王晋 黄纲 尹军强 李浩淼 徐宏光 刘炜 刘少军 黎明涛 《中华骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期764-768,共5页
目的比较骨肉瘤患者和健康人血清蛋白质组学的差异,为筛选骨肉瘤血清分子标志物提供依据。方法采集8例血清蛋白样本(骨肉瘤患者4例及正常人性别、年龄匹配的志愿者4名),用不同的CyDye染料交叉标记后,依次进行双向胶内差异凝胶电泳... 目的比较骨肉瘤患者和健康人血清蛋白质组学的差异,为筛选骨肉瘤血清分子标志物提供依据。方法采集8例血清蛋白样本(骨肉瘤患者4例及正常人性别、年龄匹配的志愿者4名),用不同的CyDye染料交叉标记后,依次进行双向胶内差异凝胶电泳(two dimensional—difference in gel electrophoresis,2-D DIGE)、图像分析及基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF—MS)鉴定。对差异非常明显的血清淀粉蛋白(SAA)用Western印迹和ELISA方法进一步验证。结果建立了健康人和骨肉瘤患者血清样品的2-D DIGE图谱,质谱成功鉴定并检索Swiss—Prot等数据库证实43个差异蛋白,其中上调18个蛋白质点,下调25个蛋白质点。Western印迹和ELISA证实SAA在骨肉瘤患者和健康人血清中的差异表达。SAA在骨肉瘤患者不同治疗阶段的血清含量有变化(初诊未经任何治疗时(331.9±39.6)ng/ml,新辅助化疗后手术前(201.3±20.99)ng/ml,术后(55.6±7.33)ng/ml,复发患者(355.7±18.11)ng/ml。结论43种血清差异蛋白质为筛选骨肉瘤的血清分子标志物提供了实验基础。初次发现SAA和骨肉瘤的相关性,并可能成为骨肉瘤的一个新的血清学诊断标志物。 展开更多
关键词 骨肉瘤 蛋白质组学 血清 生物学标记
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兔眼组织的二维凝胶电泳分析 被引量:2
15
作者 马璇 刘炜 +3 位作者 彭蔚 张艳莉 黎明涛 吴开力 《眼科新进展》 CAS 2004年第5期337-340,共4页
目的 应用二维凝胶电泳对不同兔眼组织的蛋白进行初步分析 ,探索开展眼蛋白质组学的方法。方法 分离正常兔眼的不同组织 ,经样本初处理后 ,进行二维凝胶电泳和凝胶银染色 ,然后分析电泳图谱 ,比较各组织蛋白的分离效果。结果 成功建... 目的 应用二维凝胶电泳对不同兔眼组织的蛋白进行初步分析 ,探索开展眼蛋白质组学的方法。方法 分离正常兔眼的不同组织 ,经样本初处理后 ,进行二维凝胶电泳和凝胶银染色 ,然后分析电泳图谱 ,比较各组织蛋白的分离效果。结果 成功建立对各眼组织进行样本处理、二维凝胶电泳的基本方法和条件。得到兔结膜、角膜内皮、虹膜、晶状体前囊膜、视网膜的二维凝胶电泳图谱 ,各组织蛋白在小胶上均能显示 4 0 0个以上的斑点。晶状体中央和周边上皮细胞的凝胶图谱呈现出数十个斑点的差异。结论 二维凝胶电泳是分析眼部组织蛋白质的一种好方法 ,不同眼部组织的蛋白在组成、含量、分布等方面的差异可通过二维凝胶电泳图谱清晰显示出来。 展开更多
关键词 二维凝胶电泳 眼组织
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ATM失活诱导GADD45α依赖的小脑颗粒神经元凋亡
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作者 吴森斌 伍健伟 +5 位作者 马莹 赵凡一 曹东芳 梁建峰 胡坤华 袁忠民 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期758-767,共10页
【目的】探究共济失调毛细血管扩张突变(ATM)激酶失活诱导神经元凋亡的具体分子机制。【方法】体外成熟7 d的小脑颗粒神经元(CGNs)分别用含25 mmol/L KCl(25 K)培养基、5 mmol/L KCl(5 K)培养基和含ATM特异性抑制剂(Ku55933,10μmol/L;K... 【目的】探究共济失调毛细血管扩张突变(ATM)激酶失活诱导神经元凋亡的具体分子机制。【方法】体外成熟7 d的小脑颗粒神经元(CGNs)分别用含25 mmol/L KCl(25 K)培养基、5 mmol/L KCl(5 K)培养基和含ATM特异性抑制剂(Ku55933,10μmol/L;Ku60019,15μmol/L)的25 K培养基后进行免疫印迹检测ATM、Caspase3、Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平或培养8 h后进行Hoechst染色分析。在C6细胞和CGNs中转染ATM和GADD45α特异性siRNA,q-PCR和免疫印迹验证其干扰效率。体外成熟5 d的CGNs通过磷酸钙转染ATM特异性siRNA和pCMV-EGFP 48 h后进行Hoechst染色和凋亡分析。体外成熟7 d的CGNs用含ATM特异性抑制剂的25 K培养基培养8 h后进行全转录组测序、差异表达基因鉴定和通路富集分析。体外成熟5 d的CGNs通过磷酸钙转染GADD45α特异性siRNA和pCMV-EGFP 48 h,用含15μmol/L Ku6的25 K培养基处理8 h或5 K培养基处理8 h后进行Hoechst染色和凋亡分析。【结果】与25 K组相比,5 K处理组和ATM特异性抑制剂处理组的CGNs ATM蛋白表达降低、Cleaved Caspase-3蛋白表达增加、细胞核固缩率增加。C6细胞和CGNs中转染ATM和GADD45α特异性siRNA后有效降低ATM和GADD45α的mRNA和蛋白的表达。与对照相比,CGNs转染ATM特异性siRNA后,细胞核固缩率升高。在Ku55933处理组中鉴定出835个基因表达上调,848个基因表达下调;在Ku60019处理组中鉴定出454个基因表达上调,314个基因表达下调;274个基因在Ku5处理组和Ku6处理组中共同上调,179个基因在Ku5处理组和Ku6处理组中共同下调,其中ATM下游靶标GADD45α表达上调;通路富集结果显示TNF信号通路、NF-κB信号通路和凋亡信号通路等被显著富集。与对照相比,抑制剂处理组和5K组GADD45α的mRNA和蛋白表达均升高。与对照相比,转染GADD45α特异性siRNA后用含15μmol/L Ku60019的25 K培养基处理8 h或5 K培养基处理后的CGNs细胞核固缩率降低。【结论】ATM活性降低诱导GADD45α依赖的神经元凋亡。 展开更多
关键词 神经元凋亡 共济失调毛细血管扩张突发 生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45α 转录组测序
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CD45在克罗恩病患者血清中的表达 被引量:3
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作者 康亮 杨祖立 +4 位作者 王磊 黄美近 刘炜 黎明涛 汪建平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期259-263,共5页
目的应用蛋白质组学方法在患者血清中寻找与克罗恩病相关的蛋白质。方法采取克罗恩病患者以及正常成人血清蛋白样本各4例,用不同的CyDye荧光染料标记后进行胶内差异双向凝胶电泳(2-DDIGE),并对获得的图谱进行分析及对差异蛋白质进行基... 目的应用蛋白质组学方法在患者血清中寻找与克罗恩病相关的蛋白质。方法采取克罗恩病患者以及正常成人血清蛋白样本各4例,用不同的CyDye荧光染料标记后进行胶内差异双向凝胶电泳(2-DDIGE),并对获得的图谱进行分析及对差异蛋白质进行基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱鉴定。结果通过2-DDIGE分析,发现克罗恩病患者中存在29个表达异常蛋白质点,其中胶号为973的蛋白质点,在克罗恩病患者患者血清中比正常成人组表达升高2.55倍(P<0.05),该蛋白点经质谱鉴定为CD45。结论CD45在克罗恩病患者血清的高表达提示在克罗恩病的病程中免疫系统失衡可能起着一定作用。 展开更多
关键词 克罗恩病 双向胶内差异凝胶电泳 基质辅助激光解吸离子 质谱 CD45
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色霉素对多巴胺能神经元的保护作用 被引量:1
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作者 王文雅 黎明涛 +1 位作者 饶进军 朱小南 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期522-526,共5页
目的研究色霉素对MPP+诱导凋亡的多巴胺能神经元的保护作用。方法体外培养的胎鼠腹侧中脑神经元,以MPP+引起多巴胺能神经元凋亡作为帕金森病的细胞模型,Hoechst 33258荧光核染色法检测神经元的凋亡情况,免疫细胞化学方法检测多巴胺能神... 目的研究色霉素对MPP+诱导凋亡的多巴胺能神经元的保护作用。方法体外培养的胎鼠腹侧中脑神经元,以MPP+引起多巴胺能神经元凋亡作为帕金森病的细胞模型,Hoechst 33258荧光核染色法检测神经元的凋亡情况,免疫细胞化学方法检测多巴胺能神经元内磷酸化Tau水平。结果10μmol·L-1 MPP+可以升高Tau磷酸化水平,诱导神经元发生典型的凋亡。而色霉素通过抑制Tau磷酸化,减少神经元凋亡,使TH-阳性细胞数目增加。结论色霉素可以通过抑制Tau磷酸化而对MPP+诱导凋亡的多巴胺能神经元发挥保护作用,色霉素可能用于临床防治帕金森病等神经退行性疾病。 展开更多
关键词 色霉素 MPP+ 多巴胺能神经元 细胞培养 帕金森病 TAU
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分泌型磷脂酶A_2非酶活性依赖的神经元保护作用
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作者 黎明涛 马驰 +11 位作者 谢元斌 叶彦颖 朱小南 闫霞 施乐瑜 袁衡新 陈汝筑 李文明 皮荣标 韩怡凡 Igor Krizaj 黄守坚 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期523-527,共5页
【目的】鉴定中华眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒中的神经保护因子,研究其抗神经元凋亡作用机制。【方法】连续柱层析法分离、纯化蛇毒神经保护因子。用EdmanN-末端测序法取得蛋白质一级序列,BLAST软件进行蛋白质鉴定。使用低钾诱导体外培养... 【目的】鉴定中华眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒中的神经保护因子,研究其抗神经元凋亡作用机制。【方法】连续柱层析法分离、纯化蛇毒神经保护因子。用EdmanN-末端测序法取得蛋白质一级序列,BLAST软件进行蛋白质鉴定。使用低钾诱导体外培养小脑颗粒神经元凋亡模型,研究其神经元保护作用。【结果】从中华眼镜蛇蛇毒中分离出一种,可浓度依赖性地抑制低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡。神经保护因子(Cobravenomneu-ronalprotectivefactor,CVNPF)此神经保护因子N-末端20个氨基酸序列为NLYQFKNMIQCTVPSRSWWD-,BLAST序列同源比对确定该保护因子为中华眼镜蛇分泌型磷脂酶A2(secretedphospholipaseA2,sPLA2)。进一步发现来源于蜂毒、莫桑比克眼镜蛇(Njajanajamossambica)蛇毒、西部菱斑响尾蛇(Crotalusatroxalso)蛇毒的sPLA2也对小脑颗粒神经元具有保护作用;其作用不为磷脂酶A2酶活性抑制剂7,7-Dimethyleicosadienoicacid(DEDA)和Manoalide阻断。【结论】CVNPF属于sPLA2。多种sPLA2可以抗神经元凋亡,其保护机制与磷脂酶A2的酶活性无关。 展开更多
关键词 分泌型磷脂酶A2 非酶活性依赖 神经元 保护作用 蛇毒 神经保护因子
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Clinprot技术筛选帕金森病血清标志物的研究
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作者 郑明慧 李竞 +3 位作者 鲍蕴文 潘昆贻 朱树华 胡坤华 《新医学》 2017年第12期888-894,共7页
目的利用液体蛋白芯片-飞行时间质谱技术(CLINPROTTMMALDI-TOF/TOF MS,Clinprot技术)寻找帕金森病敏感的血清分子标志物。方法对51例帕金森病患者的血清和51例性别、年龄相匹配的正常对照者血清进行Clinprot技术分析,选择P≤0.05和表达... 目的利用液体蛋白芯片-飞行时间质谱技术(CLINPROTTMMALDI-TOF/TOF MS,Clinprot技术)寻找帕金森病敏感的血清分子标志物。方法对51例帕金森病患者的血清和51例性别、年龄相匹配的正常对照者血清进行Clinprot技术分析,选择P≤0.05和表达差异大于2倍的蛋白峰进行质谱分析。采用遗传算法建立疾病诊断模型,验证模型敏感度和特异度。结果成功建立了帕金森病和正常血清的疾病诊断模型,模型特异度为98.45%,敏感度为91.83%。采用Clinprot技术同时找到5个感兴趣的蛋白差异峰,相对分子量分别为1 946、2 211、2 368、4 055和4 212,通过二级质谱检索Mascot数据库获得匹配蛋白,分别为核苷二磷酸激酶6、睾丸表达序列13B蛋白、核糖核酸酶7、THAP结构域蛋白3、氨转运蛋白Rh型C蛋白。结论 Clinprot技术能够客观显示出帕金森病患者与正常对照者血清差异蛋白,该研究鉴定出的5种蛋白有望成为帕金森病诊断的新分子标志物。 展开更多
关键词 帕金森病 液体蛋白芯片-飞行时间质谱技术 蛋白质组学
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