抗氧化剂TA9901抑制加速老化鼠脑淀粉样颗粒的沉积

目的 观察抗氧化剂TA990 1对加速老化鼠P 8(SAM P 8)脑中淀粉样颗粒 (MSG)沉积的影响 ,为临床治疗阿尔采默病 (AD)提供科学依据。 方法 2 5月龄雄性SAM P 8小鼠随机分为对照组、TA1组、TA2组和VE组 ,分别给予正常饮食、0 0 5 %TA990 1、0 5 %TA990 1和特制VitaminE(VE)饲料 (5 0 0mgVE kg)喂养 3 5个月。用Go mori六胺银法显示淀粉样颗粒 ,对海马CA1区的银染颗粒 (MSG)的体视学参数和分布进行图像分析。 结果 MSG为圆形和卵圆形 ,主要分布于海马、皮质深层和小脑 ;海马内MSG主要成群分布于各层。各组海马CA1区MSG颗粒数比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ,但TA1组、TA2组和VE组的MSG颗粒直径和面积均较对照组明显减小 (P <0 0 5 ) ,以TA2和VE组更为显著 (P <0 0 1) ;各实验组MSG的平均灰度均较对照组降低 (P <0 0 1) ;对照、TA1、TA2和VE组的低密度颗粒区分别占 12 0 5 %、36 5 2 %、4 7 91%和 4 4 6 5 % ,实验组在低密度区的颗粒数明显增多。 结论 TA990 1减少了SAM P 8脑中淀粉样颗粒的大小和密度 ,显示TA990

TA9902对加速老化小鼠(SAM-P/8)脑Aβ样颗粒沉积的影响

【目的】观察抗氧化剂TA9901配伍EGb761(简称TA9902)对加速老化鼠P/8(SAM-P/8)脑中Aβ样颗粒沉积的影响,为其临床治疗阿尔采默病(AD)提供科学依据。【方法】选用3月龄雄性SAM-P/8小鼠83只,采用随机数表将其分为TA9001组(15只)、TA9902低剂量组(TA9902-L组,15只)、TA9902高剂量组(TA9902-H组,15只)、EGb761组(10只)、HAT组(Hup-A,10只)和老年组(18只);3月龄雄性SAM-P/8 小鼠15只,作为年轻组。TA9901组和EGb761组饮水中分别加入体积分数5g/L TA9901和0.8g/L EGb761,TA9902-L和TA9902-H组分别加入6g/L和10g/L的TA9002。HAT组石杉碱甲片用量为每只每日0.0125mg。动物喂养期为6.0～6.5个月。用Gomori六胺银法显示海马淀粉样颗粒,并对CA1区的银染颗粒(MSSGs)进行图像分析。【结果】SAM-P/8小鼠脑内MSSG常成群分布(颗粒群长径约40～250μm),以海马的CA3区和齿状回多见。TA9901、EGb761和TA9902能显著减少MSSG平均截面直径、截面面积、平均灰度和MSSG簇数(P<0.05或P<0.01)。高剂量TA9902的作用要强于TA9901、EGb761和低剂量TA9902组(P<0.05)。而且TA9901和EGb761 MSSG的V_V显著减小,TA9901还能减小MSSG的N_V(P<0.05),但对δ无明显影响(P>0.05)。而TA9902-L和TA9902-H均可使MSSG的V_V、N_V有意义地减小,而增加δ?

TA9902对SAM-P/8小鼠脑胆碱乙酰转移酶神经元的影响

目的 探讨抗氧化剂TA990 2 (TA990 1配伍EGb76 1)对加速老化鼠P/ 8(SAM P/ 8)脑胆碱乙酰转移酶 (ChAT)神经元的影响 ,为治疗阿尔采默病 (AD)提供理论依据。方法 选用 3月龄雄性SAM P/ 8小鼠 83只 ,随机分为TA90 0 1组、TA990 2低剂量组、TA990 2高剂量组、EGb76 1组、HAT组和老年组 ;另选 3月龄 15只为年轻组。对隔区切片用胆碱乙酰转移酶 (ChAT)免疫组化染色 ,并对ChAT阳性神经元进行计数和图像分析。结果 老年SAM P/ 8小鼠内侧隔核 斜角带 (MS DB)区ChAT神经元明显受损。TA990 2对MS DB区ChAT受损害神经元有显著改善作用 ,主要表现在ChAT神经元数量的增加和平均灰度值的下降 ,尤以高剂量组明显 ,这种改善作用虽有优于对照药HAT的趋势 ,但与HAT无显著性差异。相关分析结果表明ChAT阳性神经元数量与小鼠避暗试验测得的STL和STS分别呈显著正相关和负相关 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 TA990 2有促进SAM P/ 8鼠脑受损胆碱能系统恢复的作用 ,这可能是其改善SAM P/

雄激素替代对去睾丸大鼠基底前脑NOS及Nestin阳性神经元的影响

目的 观察雄激素替代对去睾丸大鼠基底前脑一氧化氮合酶 (NOS)及巢蛋白 (Nestin)阳性神经元的影响。方法 将 2 8只健康成年雄性SD大鼠随机分为 4组 :去势 2 4h雄激素替代组、去势 2w雄激素替代组、去势 2 4h芝麻油替代组及假手术组。用组织化学及免疫组织化学染色方法观察基底前脑NOS和Nestin阳性神经元变化。结果 去势芝麻油替代组内侧隔核 (MS)、斜角带垂直支 (vDB)NOS阳性神经元数明显多于假手术组 (P <0 .0 5 ) ;去势 2 4h或 2w行雄激素替代MS和vDBNOS阳性神经元数少于假手术组水平 (P <0 .0 5、P <0 .0 1) ,但去势芝麻油替代或雄激素替代对斜角带水平支 (hDB)的NOS阳性神经元数影响不大 (P >0 .0 5 )。去势芝麻油替代或雄激素替代 ,Nestin阳性神经数的变化趋势与NOS阳性神经元的相似。结论 去睾丸行雄激素替代 ,可选择性地使基底前脑的NOS、Nestin阳性神经元数明显下降 ,但与替代的时程关系不大 ,提示雄激素可能通过其受体下调NOS和Nestin的表达。

胆固醇代谢与阿尔茨海默病关系的研究进展

在阿尔茨海默病(AD)发病机制中,占主导地位是Aβ瀑流学说:由于淀粉样前体蛋白的代谢紊乱,产生了过量的Aβ42,后者迅速聚集形成寡聚物,启动了Aβ瀑流效应,造成了Aβ的沉积,形成老年斑。越来越多的实验表明,胆固醇在Aβ的产生和异常沉积过程具有重要调节作用,同时Aβ对胆固醇调节也有反馈作用,探讨两者的相互作用和影响有助于AD发病机制的阐明。而与胆固醇代谢密切相关的因素,如载脂蛋白E、调节胆固醇代谢的药物等也成为研究的热点。

人端粒酶反转录酶基因转染人胚胎大脑皮质神经元的凋亡

背景:人端粒酶反转录酶重组腺病毒转染原代培养的人胚胎大脑皮质神经元,可以促进细胞生存,抑制凋亡。目的:观察人端粒酶反转录酶对β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)诱导人胚胎大脑皮质神经元凋亡的影响。方法:人胚胎大脑皮质神经元原代培养后,分为3组:对照组、Aβ25-35组和人端粒酶反转录酶组。Aβ25-35组和人端粒酶反转录酶组细胞在培养144 h后,用Aβ25-35 5μmol/L干预24 h。人端粒酶反转录酶组在Aβ25-35 5μmol/L干预72 h进行人端粒酶反转录酶基因转染。结果与结论:原代培养的人胚胎大脑皮质神经元培养7 d后,出现凋亡细胞,而Aβ25-35干预后使凋亡细胞数量增加,而人端粒酶反转录酶可防止Aβ25-35诱导的人胚胎大脑皮质神经元的凋亡。

雌激素对去卵巢大鼠基底前脑NOS及Nestin阳性神经元的影响

目的 观察雌激素替代对去卵巢大鼠基底前脑一氧化氮合酶(NOS)及巢蛋白(Nestin)阳性神经元的影响。方法 将28只健康成年雄性SD大鼠随机分为4个处理组:去势24 h雌激素替代组、去势2周雌激素替代组、去势植物油替代组及假手术组。用组织化学及免疫组织化学染色方法观察基底前脑的内侧隔核(MS)、斜角带垂直支(vDB)及水平支(hDB)的NOS和Nestin阳性神经元数的变化。结果 去势行植物油替代可使MS、vDB的NOS阳性神经元数明显下降(P<0.01);去势24 h或2周行雌激素替代均可使以上亚区的NOS阳性神经元数明显升高至正常水平(P<0.01)。去势行植物油替代或雌激素替代对hDB的:Nestin阳性神经元数的影响趋势与NOS阳性神经元的相似(P<0.01),但对MS及vDB的Nestin阳性神经元数影响不大(P>0.05)。结论 去卵巢行雌激素替代可选择性地使基底前脑不同亚区NOS、Nestin阳性神经元数升高,这可能与雌激素高调了NOS和Nestin的表达有关。

大鼠松果体衰老的形态学研究

目的 探讨松果体形态结构的衰老性变化,为进一步研究松果体与衰老的关系提供形态学基础。方法 随机选取3月龄和34月龄SD大鼠10只分别作为青年组和老年组,用光镜和电镜结合形态计量学分法分析松果体细胞和神经胶质细胞密度及其指数;松果体细胞线粒体的Vv、Sv、Nv,高尔基器的Vv、Sv、粗面内质网的Sv、溶酶体的Vv;松果体神经终末的Vv及其线粒体的Vv、Sv、Nv、小颗粒囊泡的NA。结果 与青年组相比,老年组松果体细胞核形状不规则,核膜皱褶增多和加深。细胞浆内粗面内质网减少,排列紊乱,分散,脱颗粒明显;线粒体结构不清、肿胀、嵴断裂、消失、空泡化等。老年组松果体细胞密度比青年组减少,而神经胶质细胞密度增加,差异有高度显著性(P<0.01)。老年组神经胶质细胞指数比青年组高(P<0.01)。老年线粒体Vv与青年组无差别,但老年组线粒体Sv、Nv均比青年组减少(P<0.01)。老年组高尔基器的Vv、Sv均比青年组减少(P<0.01);老年组粗面内质网Sv比青年组减少,而老年组溶酶体Vv比青年组增加(P<0.01);老年组神经终末Vv比青年组减少(P<0.01);老年组神经终末中小颗粒囊泡NA比青年组减少(P<0.01);老年组线粒体Sv、Nv比青年组减少(P<0.05),两组神经终末中线粒体Vv无差别(P>0.05)。结论 老年大鼠松果体已发生衰老性变化,这可能与机?

靶肌肉注射碱性成纤维细胞生长因子对坐骨神经损伤再生及功能恢复的影响

【目的】探讨靶肌肉注射碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠坐骨神经损伤后再生及功能恢复的影响。【方法】60只 SD 大鼠按随机数表分为正常组20只和模型组(用硅胶管桥接坐骨神经6mm 缺损)40只,后者又随机分为 bFGF 组和对照组,分别于左胫前肌及腓肠肌各注射0.1ml 的100 U bFGF 和等量生理盐水,每日1次,连续30d。术后10周,进行足迹分析、电生理、霍乱毒素-辣根过氧化物酶逆行神经标记(CB-HRP)和存活前角神经元计数、肌肉和神经组织学检查及图像分析等。【结果】bFGF 组的坐骨神经功能指数恢复率,复合肌肉动作电位的潜伏期、波幅和神经传导速度,再生神经干中的有髓神经纤维密度、髓鞘厚度、轴突直径及许旺细胞数。被 CB-HRP 标记和存活的脊髓前角运动神经元数明显优于对照组,差异均有显著性(P<0.05或0.01)。【结论】靶肌肉注射 bFGF 能明显促进损伤后坐骨神经结构的再生、成熟,提高神经功能恢复,是临床应用 bFGF 的另一给药途径。

hTERT基因转染对人神经元活力的影响

目的:观察人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)对Aβ诱导的人胚胎大脑皮质神经元细胞活力的影响。方法:人胚胎大脑皮质神经元原代培养后,以hTERT重组腺病毒转染神经元,用Aβ25-35诱导神经元的凋亡,72 h后用MTT检测各组细胞数量和活力,并计算其保护率。结果:hTERT重组腺病毒转染后72 h进行Aβ干预,此时hTERT对神经元的保护力为29.8%,活细胞的数量及细胞活力(0.310±0.033)明显高于非转染组(0.237±0.081),P=0.002,差异有统计学意义。结论:Aβ干预后的神经元,其活力明显下降,而hTERT重组腺病毒转染可以促进神经元存活,对Aβ干预的人胚胎大脑皮质神经元具有保护作用。

β-淀粉样蛋白对神经元膜流动性的影响

目的 :研究Aβ对神经元膜流动性的影响 ,探索Aβ的神经毒性机制。 方法 :制备急性分离的新生SD大鼠海马和皮层神经元细胞悬液 ,采用显微准弹性激光散射技术和荧光偏振技术。结果 :采用显微准弹性激光散射技术发现Aβ2 5～ 3 5作用 5min和 35min后均降低海马和皮层神经元ACF的衰减速率及频移线宽Γ ,而采用荧光偏振技术发现Aβ2 5～ 3 5作用 5min和 35min后虽然有升高海马和皮层神经元荧光各向异性的趋势 ,但无统计学意义。结论 :提示Aβ可降低神经元膜流动性 ,显微准弹性激光散射技术比荧光偏振技术更敏感。

天然抗氧化剂TA9901对Aβ_(1～40)肽自由基形成的抑制作用

老年性痴呆脑中β 淀粉样蛋白 (Aβ)聚集和毒性作用与自由基的产生关系密切 ,TA990 1具有极强的抗氧化和清除自由基的作用。本研究重点探讨TA990 1对在Aβ聚集过程中肽自由基形成的影响。用 0 1%Aβ1～ 40 单独或分别与相同百分浓度的TA990 1、维生素E(VE)乳化液和TA990 1加VE在 37℃恒温箱中共同孵育 ,在孵育液中加入 5 0mM的自由基捕捉剂本叔丁基氮酮 (PBN) ,分别在孵育后的第 1d、2d、3d、6d利用BrukerRCS10 6电子顺磁共振仪 (EPR)检测 ,分析自由基的性质和药物对自由基的清除率。结果证实 ,在不同条件下 ,Aβ在老化过程中产生曲线强度和分裂不同的EPR曲线 ;以第 3dEPR谱第二峰的线宽代表各组自由基的强度 ,计算TA990 1、VE和TA990 1加VE对自由基的清除率分别为5 0 4 6 %、31 2 8%和 36 77%。上述结果提示 ,TA990 1抑制Aβ的毒性作用和纤维形成与其强烈的清除自由基的作用有关。

成年大鼠眼睫状体缘色素上皮组织的神经前体细胞的培养和鉴定

目的 探讨成年大鼠眼睫状体缘色素上皮产生神经前体细胞的潜力及其生物学特征。方法 取成年SD大鼠睫状体缘处的色素上皮组织块 ,置于含bFGF和B2 7的DMEM/F12 无血清培养液中进行神经前体细胞培养 ,免疫组化反应染色鉴定细胞的表型。结果 培养 5～ 8d ,组织块长出由众多无色素和色素细胞构成的细胞集落 ,集落的大多数细胞处于增殖状态(BrdU反应阳性 ) ,并表达神经前体细胞的标志物 (nestin)。撤掉bFGF和B2 7,加入胎牛血清培养 3～ 5d ,集落的细胞发生分化 ,分别表达神经元和星形胶质细胞的标志物 (NSE、GFAP) ,但不表达少突胶质细胞的标志物 (O4 )。结论 由成年大鼠睫状体缘色素上皮长出的细胞集落不仅含有增殖能力和多分化潜能的神经前体细胞 ,而且尚含有色素细胞 。

hTERT对干预后人胚胎神经元cdk5 P-CREB表达影响的初步观察

目的对干预后人胚胎神经元周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,cdk5)、cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,P-CREB)表达影响。方法人胚胎大脑皮质神经元原代培养后,用hTERT重组腺病毒转染神经元,用Aβ25-35干预转染后神经元。实验分为转染组和非转染组。Western-blot检测cdk5、p-CREB的变化。结果 Aβ25-35干预后,神经元内cdk5表达量明显增加,而hTERT基因转染组cdk5增加的低于非转染组。干预后神经元内p-CREB表达量明显降低,而hTERT基因转染组,p-CREB表达量高于非转染组。结论 Aβ25-35干预人胚胎大脑皮质神经元,可以导致cdk5的异常活化,p-CREB的降低;hTERT基因转染可有效抑制cdk5的异常激活,防止p-CREB的降低。

胆固醇在阿尔茨海默病病理机制中的作用

阿尔茨海默病(AD)是现代老年人常见的疾病,其发病机制尚不清楚。但是载脂蛋白E(apoE)是现阶段已知的迟发性AD最确定的危险因素,而且大量的实验研究表明胆固醇和AD之间存在着重要的联系。本文重点论述胆固醇以及与胆固醇代谢相关的物质和AD之间的关系。