中国人黏多糖贮积症ⅣA型家系GALNS基因新突变的鉴定

目的研究黏多糖贮积症ⅣA型（mucopolysaccharidosis type ⅣA，MPSⅣA）患者发病的分子遗传学机制，揭示其基因型与表现型的相互关系，为产前基因诊断等创造必要的前提条件。方法采用尿糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAGs）定性检测法对疑似MPSIVA型的先证者进行初诊，然后采用PCR及扩增产物直接测序法对先证者及其家庭成员进行突变检测。在检出GALNS基因c．1567T〉G新突变后，先后建立XspI酶切鉴定法和扩增阻碍突变系统（amplification refractory mutation system，ARMS）快速特异鉴定法，对随机采集的110名正常对照与先证者及其家庭成员的GALNS基因第14外显子进行序列分析，同时采用生物信息学方法对蛋白质二级、三级结构进行预测，以及直接测定患儿GALNS酶活性的方法，对该新突变进行致病性鉴定。结果先证者尿检呈弱阳性GAGs（±），其GALNS基因第14外显子内存在杂合的c．1567T〉G终止密码突变，第4外显子存在杂合的c．374C〉T错义突变，为两种突变的复合杂合子。其妹突变类型与先证者完全相同，其母仅在第14外显子存在杂合的终止密码突变，为该病的携带者，其父仅在第4外显子存在杂合的错义突变，也为杂合子；第14外显子的PCR产物经XspI酶切后，正常对照组切出28bp、120bp、399bp3条带，而患者和携带者的母亲均切出28bp、120bp、148bp和399bp4条带；用ARMS特异引物扩增后，正常对照组均扩增阴性，而患者及携带者均扩增阳性；蛋白质二级、三级结构预测结果显示：c ．1567T〉G变异导致终止密码（TAG）突变为谷氨酸（GAG），使多肽链延长了92个氨基酸残基，导致蛋白质二、三级结构发生明显改变，而正常对照无此变化。酶活性测定的结果显示：患者的GALNS酶活性仅为8．3nmol／17h／mgpr，明显低于正常值（正常参考值为41．9～92．1nmol／17h，／mgpr）。结论c．1567T〉G变异是一种新的致病性突变，是引起该家系患儿发病的根本原因。

一例Morquio A综合征高危胎儿的快速产前基因诊断

目的快速、准确地对MorquioA综合征[又称黏多糖贮积症ⅣA型（mucopolysaccharidosis type ⅣA，MPSⅣA）]高危胎儿做出产前基因诊断，从而及时而高效地防止患儿的出生，以最大程度减少流产对母体的伤害。同时，为今后的植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis，PGD）创造必要的前提条件。方法在明确先证者病因及其父母基因型的基础上，应用已建立的突变特异性扩增系统（amplification refractor ymutation system，ARMS）直接鉴定法、变性高效液相色谱（denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC）快速筛检法，结合DNA序列分析法，对1例已孕10周的MPSIVA高危胎儿的GALNS基因相应突变位点进行快速检测和鉴定。结果胎儿的DHPLC筛检结果显示第1外显子和第10外显子的PCR产物都有异常双峰，而相应正常对照均只有正常单峰；用GALNS基因ARMS特异引物扩增的结果显示：胎儿有相应的特异扩增产物，而正常对照无；普通引物扩增产物的测序结果显示：胎儿GALNS基因的第1外显子和第10外显子分别获得了父源性的c．106—111del（p．L36-L37del）杂合缺失突变和母源性的c．1097T〉C（P．L366P）杂合错义突变，为两种突变的复合杂合子。结论该高危胎儿是一带有与先证者完全相同基因型的MorquioA综合征病胎，应尽早终止妊娠；ARMS法、DHPLC法结合DNA序列分析法是快速、准确产前基因诊断MPSⅣA高危胎儿的有效方法，特别适用于已明确病因的高危胎儿的早期诊断；其中，ARMS法和DHPLC法还特别适用于大批量正常对照组的快速鉴别，对于新突变的致病性鉴定起着重要的作用。