改良PHEMA一体化人工角膜植入碱烧伤兔角膜的实验研究

[目的]评价改良聚羟乙基丙烯酸甲酯(PHEMA)一体化人工角膜对碱烧伤兔角膜的治疗效果。[方法]通过两阶段化学聚合结合车床机械切削合成改良的一体化PHEMA人工角膜。将饱和有1mol/L NaOH滤纸烧伤兔角膜中央,来建立稳定碱烧伤兔眼模型。实验分两部分完成。第一部分:将PHEMA海绵边裙材料植入10只正常兔角膜板层间,术后2周、4周、2个月、3个月、4个月分别行光镜和电镜检测,观察海绵材料中细胞和新生血管的生长情况。第二部分:10只碱烧伤兔眼角膜囊袋内Ⅰ期植入一体化PHEMA人工角膜,术后临床观察材料与组织的愈合情况;术后2-3个月Ⅱ期手术切除中央前板层角膜组织,暴露人工角膜中央镜柱,术后随访3个月,初步观察临床治疗效果。[结果]兔角膜碱烧伤3个月,形成带有新生血管的角膜白斑模型。10只正常兔角膜均接受板层间植入术,随访期间未见任何并发症:光镜下,PHEMA海绵术后2周开始有成纤维细胞长入,术后2～3个月多量细胞长入的同时伴有新生血管生长;电镜下,细胞在海绵材料间隙中生长,细胞生长状态良好,并有部分细胞外基质和胶原的存在。10只碱烧伤兔眼接受人工角膜移植术,其中1眼Ⅰ期术中角膜穿孔而被排除,9眼接受Ⅱ期手术;Ⅱ期术后,3眼2周内人工角膜镜柱偏位,6眼观察期间未见人工角膜脱位;这6眼中,2眼观察期间镜柱透明未见任何并发症,3眼出现不同程度镜柱前表面纤维增生组织遮盖,1眼镜柱中央轻度钙化。[结论] PHEMA人工角膜能够与角膜组织达到良好的生物学愈合;多孔边裙的强度需要进一步加强,以便减少中央镜柱脱出的发生率。

三种仪器测量中央角膜厚度的比较

【目的】探讨光学相干断层扫描仪(OCT)、超声波角膜测厚仪及OrbscanⅡ角膜地形图/角膜测厚系统(OrbscanⅡ系统)测量中央角膜厚度(CCT)的差异及测量的可重复性。【方法】分别用OCT、超声波角膜测厚仪和OrbscanⅡ系统测量近视患者34例(68只眼)的CCT并对测量值进行比较,用相关分析方法分析不同仪器间测量值的相关性;随机选择15例(30只眼)用三种仪器依次重复测量中央角膜厚度3次,采用方差分析方法分析3种仪器重复测量值的方差。【结果】OCT、超声波角膜测厚仪、OrbscanⅡ系统测得的CCT平均值分别为(515±33)"m、(535±35)"m和(534±44)"m,OCT的测量值比超声波角膜测厚仪与OrbscanⅡ的测量值小,差异有统计学意义(P值分别为0.004和0.003),超声波角膜测厚仪与OrbscanⅡ的测量值差异无统计学意义(P=0.900)。OCT测量的CCT值与超声波角膜测厚仪(r=0.980,P<0.001)和OrbscanⅡ系统(r=0.963,P<0.001)测量的CCT值呈正相关。OCT、超声波角膜测厚仪、OrbscanⅡ系统CCT重复测量值的方差分别为(3.75±3.05)、(6.53±3.02)和(5.26±2.98)。OCT的方差与超声波角膜厚度测量仪比较差异有统计学意义(P=0.001),与OrbscanⅡ系统比较差异无统计学意义(P=0.083)。【结论】OCT测量的CCT值最小;OCT与超声波角膜测厚仪和ObscanⅡ系统对CCT测量值的相关性较好;OCT测量CCT的可重复性较好,可以作为中央角膜厚度测量的工具。

瞳孔大小对光学相干断层扫描仪测量视网膜神经纤维层厚度的影响

【目的】探讨瞳孔状态对光学相干断层扫描仪(OCT3)测量视网膜神经纤维层(RNFL)厚度值的影响及其诊断青光眼的准确性。【方法】正常人38例72眼,原发性开角型青光眼患者19例34眼,分别在自然瞳孔(2.5￣3mm)和药物散瞳下(6￣8mm)用OCT3成组扫描程序(RNFLThickness3.4)进行检查。对散瞳前后各象限RNFL厚度及全周平均值进行对比,分别计算散瞳前后RNFL厚度测量值的ROC曲线下面积。【结果】正常人散瞳前颞侧、上方、鼻侧、下方、平均的RNFL厚度(!m)分别为77±12、122±16、68±13、125±16、98±9,散瞳后相应的RNFL厚度分别是75±13、122±17、71±13、125±14、98±10,散瞳前后比较,除鼻侧外(P为0.039),其余象限及全周RNFL厚度差异无显著性(P为0.478～0.870)。原发性开角型青光眼患者散瞳前颞侧、上方、鼻侧、下方、平均的RNFL厚度(!m)分别为63±13、90±20、58±15、72±22、71±9,散瞳后相应的RNFL厚度分别是65±13、93±22、60±12、74±22、73±10,散瞳前后颞侧和全周RNFL厚度平均值差异有显著性(P分别为0.011、0.008),其余各方位差异无显著性(P为0.109～0.172)。散瞳前后平均及下方视网膜神经纤维层厚度测量值的ROC曲线下面积最大,为0.971～0.983。【结论】应用OCT3测量RNFL厚度,瞳孔大小对测量值影响不大,但瞳孔不能小于2.5mm,屈光间质混浊时应散瞳检查。自然瞳孔及散瞳下运用OCT3测量RNFL厚度诊断青光眼的准确性高,结果可靠。

绿色荧光蛋白标记的CY15瘤细胞眼前房移植瘤早期转移的观察

【目的】观察绿色荧光蛋白(GFP)标记的恶性组织细胞增生症CY15细胞在Balb/c鼠眼前房生长及全身转移的规律,探讨GFP作为活细胞标记追踪肿瘤细胞生长、转移的优势并初步探讨肿瘤转移的机制。【方法】将携带绿色荧光蛋白的逆转录病毒MP71-GFP-PRE转入CY15细胞,G418筛选阳性克隆。20只Balb/c小鼠(20只右眼),手术显微镜下每只小鼠眼前房接种2μL细胞密度为2.0×106个/mL的CY15GFP细胞悬液。术后15d、20d和30d分别处死5只小鼠在荧光显微镜下观察全身转移情况。采用流式细胞仪分析术后30d处死的另外4只小鼠和4只对照小鼠外周血单个核细胞中瘤细胞的比率。【结果】稳定表达绿色荧光蛋白的CY15GFP细胞基本保持了亲代细胞的特征,在前房的成瘤率为100%。术后15d处死小鼠在荧光显微镜下观察可见肝、肺、胃肠壁等多个脏器中有散在的单个荧光点分布,为转移的单个肿瘤细胞,这些荧光点在肝脏中分布的数量最多。术后20d、30d分别处死5只小鼠,发现随着时间的推移这些微小转移灶逐渐增大。流式细胞仪分析术后30d处死的小鼠外周血单个核细胞中瘤细胞的平均比率为0.048%±0.021%。【结论】绿色荧光蛋白标记瘤细胞后,利用荧光显微镜能有效地观察到肿瘤发生远距离转移在继发脏器中分布的单个瘤细胞和普通显微镜下无法分辨的微小转移灶,这些微小转移灶逐渐增大,为肿瘤转移的克隆起源学说提供了有力的证据。流式细胞仪能准确定量瘤细胞在外周血中的分布情况。

不同区域晶状体上皮细胞基因表达差异分析

【目的】比较不同区域猪晶状体上皮细胞的基因表达在转录组水平上的差异。【方法】解剖显微镜下分离晶状体前囊膜,将附着于其上的上皮细胞分为中央(直径为10.56mm)和周边两部分。分别提取两个样本的总RNAs并经PCR扩增,以Cy3和Cy5分别标记扩增的中央与周边部分的cDNA,与含7548个基因的表达谱芯片杂交,经图像分析,生物信息学处理获得基因表达在转录水平差异的相关信息。【结果】中央与周边区域的猪晶状体上皮细胞在转录组水平共鉴定出952个有效表达的基因点,其中差异表达基因261个,以中央区域为参照,周边上皮细胞mRNA上调137个,下调124个。差异表达基因主要涉及的功能有:细胞周期与凋亡、细胞骨架蛋白及细胞外基质、转录、细胞信号分子等。【结论】中央与周边区域猪晶状体上皮细胞基因表达在转录组水平上差异明显。这类差异呈明显的功能聚类。