半胱氨酸蛋白酶3、bax和bcl-xl在N-甲基-N亚硝酸脲诱导的大鼠视网膜损伤后的表达

目的观察N-甲基-N亚硝酸脲（MNu）诱导的大鼠视网膜损伤过程中凋亡相关分子半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、bcl-2相关X蛋白（bax）和B细胞淋巴瘤／白血病-xl（bcl-x1）在视网膜中的时空表达，探讨其在MNU诱导的视网膜损伤中的作用。方法将鼠龄50d的30只SPF级雌性SD大鼠随机分为MNU模型组（24只大鼠）和正常对照组（6只大鼠）。模型组按40mg／kg的剂量腹腔注射MNU建立MNU模型；正常对照组大鼠腹腔注射生理盐水5ml／kg。模型组大鼠根据MNU注射后不同处死时间再分为1、3、7、10d组，每小组各6只大鼠。正常对照组大鼠注射后3d处死。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组视网膜中caspase-3、bax和bcl-xl的基因表达情况；免疫荧光技术检测其在视网膜中的表达以及分布的变化，并用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导dUTP缺口末段标记（TUNEL）法检测视网膜细胞凋亡的变化。结果经病理学检测确定造模成功。RT-PCR检测结果表明，[与正常对照组相比（caspase-3和bax的相对吸光度（RA）值为62．45±7．65、46．53±4．41]，MNU模型1d组caspase-3（83．23±8．11，P=0．009）和bax（72．73±9．46，P=0．004）的表达均增强，3d组二者表达水平均最高（caspase-3RA=140．48±18．40，P=0．000；bax RA=102．36±13．97，P=0．001），10d组caspase-3的表达水平（RA=47．32±5．37，P=0．027）低于对照组，而10dbax的表达（RA=48．27±4．40，P=0．997）基本恢复至对照组水平；bcl-xl在4个造模组中的表达水平（1dRA=63．29±4．29，P=0．000；3dRA=79．83±5．58，P=0．000；7dRA=70．19±4．42，P=0．000；10dRA=66．05±4．97，P=0．000）均高于正常对照组（RA=45．98±3．06），3d组的表达水平最高。MNu诱导后1、3、7d组的bax／bcl-xl比值（1d为1．15±0．14，P=0．143；3d为1．28±0．16，P=0．001；7d为1．17±0．08，P=0．079）大于对照组（1．01±0．09），其中3d组的比值最大，但10d组bax／bel-xl比值（0.73±0．07，P=0．001）小于对照组。免疫荧光检测结果显示，caspase-3、bax和bcl-xl的表达变化分别与其RT-PCR检测结果一致；正常对照组在视网膜各层均未发现凋亡细胞，MNu1d组的外核层可检测到大量凋亡细胞核[凋亡率（AI）为34．96±3．44，P=0．000]，3d组的外核层检测的凋亡细胞最多（AI=76．97±5．83，P=0．000），10d组未检测到凋亡细胞。结论MNU诱导的视网膜光感受器细胞凋亡可能是通过上调easpase-3及引起bax／bcl-xl表达失衡并明显倾向促进细胞凋亡造成的。