原位转染组织因子途径抑制物2基因抑制兔角膜新生血管形成(英文)

背景：有研究表明，基质金属蛋白酶所参与的细胞外基质降解在角膜新生血管形成过程中起关键作用，组织因子途径抑制物2是新近发现的一种新型的丝氨酸蛋白酶抑制物，能有效抑制基质金属蛋白酶的活性。选用组织通道途径抑制物组织因子途径抑制物2作为治疗基因，是否能对角膜新生血管形成产生影响？目的观察局部转染组织因子途径抑制物2基因对实验兔角膜新生血管形成的影响。设计：随机对照观察。单位：武汉协和医院外科实验室和中山大学附属第三医院中心实验室。材料：本实验于2004—06／2006—03在武汉协和医院外科实验室及中山大学附属第三医院中心实验室完成。选用健康纯种成年新西兰大白兔60只，体质量2、5～3．0kg，雌雄不限。术前经裂隙灯检查均无明显眼前段病变。pBos-Cite-neo，组织因子途径抑制物2质粒（由协和医院血液科仲任博士惠赠），过氧化物酶阻断剂、非免疫性羊血清、鼠抗人MMP-1，2，3单克隆抗体、生物素标记的羊抗鼠IgG二抗（Santacruz公司）。方法：实验干预：硝酸银烧灼法建立各组实验兔兔角膜新生血管模型，随机摸球法将模型兔分为Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ组，每组20只，分别结膜下注射生理盐水、空白质粒和真核表达质粒pBos-Cite-neo／组织因子途径抑制物2。实验评估：采用裂隙灯显微镜下观察角膜新生血管生长情况；采用RT-PCR方法检测造模2周后各组实验兔角膜组织组织因子途径抑制物2的表达；采用免疫组织化学测定造模后3，5，7，9，14d角膜组织基质金属蛋白酶蛋白的表达。主要观察指标：①各组实验兔角膜新生血管生长情况。②实验兔角膜组织组织因子途径抑制物2及基质金属蛋白酶的表达情况。结果：纳入实验兔60只均进入结果分析。①角膜新生血管生长情况：Ⅲ组原位转染组织因子途径抑制物2后兔角膜新生血管形成及生长明显受抑制。②角膜组织因子途径抑制物2及基质金属蛋白酶表达：Ⅲ组实验兔角膜组织组织因子途径抑制物2基因表达高于Ⅰ，Ⅱ组（P＜0．01）；Ⅲ组角膜组织MMP-1，2，3表达较Ⅰ，Ⅱ组降低，以MMP-1，3下降显著。结论：质粒pBos-Cite-neo／组织因子途径抑制物2含有组织因子途径抑制物2基因，局部转染后角膜组织表达组织因子途径抑制物2升高，通过抑制基质金属蛋白酶的活性而抑制角膜新生血管生长。