中国汉族、布依族和壮族群体中聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1基因多态性

【目的】探讨人类聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)5个外显子核苷酸多态性。【方法】采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和银染技术检测3个民族(汉族、布依族和壮族)634名正常人PARP-1基因多态性。【结果】在3个民族634名正常人血标本的5个外显子扩增产物SSCP电泳条带中,219名汉族人PARP-1基因5个外显子均未检出多态性条带;203名布依族和212名壮族人PARP-1基因的5个外显子扩增产物中分别有2例的外显子20检出1条多态性条带,其余4个外显子扩增产物未见多态性条带。【结论】PARP-1基因第20外显子上可能存在多态性。

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1多态性的检测

目的 检测人类聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 -1(PARP -1) 5个外显子核苷酸多态性。方法 采用聚合酶链式反应 (PCR) -单链构象多态性 (SSCP)和银染技术检测 3个民族 63 4名正常人PARP -1基因多态性。结果 在3个民族 63 4名正常人血标本的 5个外显子扩增产物SSCP电泳条带中 ,2 19名汉族人PARP -1基因 5个外显子均未检出多态性条带 ;2 0 3名布依族和 2 12名壮族人PARP -1基因的 5个外显子扩增产物中分别有 2例的外显子 2 0的SSCP电泳条带检出 1条多态性条带 ,其余 4个外显子扩增产物SSCP电泳未见多态性条带。结论 PARP -1基因第2 0外显子上可能存在多态性。PCR -SSCP银染技术具有简便、高效、快速、重现性好等优点 ,是对大样本进行PARP-1基因突变筛检的一种有效的方法 。

多重PCR-SSCP法检测妇科肿瘤患者hMSH2基因突变

目的 :建立经济快捷地筛查基因突变的技术 ,研究妇科肿瘤患者hMSH2基因突变情况 ,寻找与妇科肿瘤发生相关的分子标记物。方法 :通过PCR优化策略 ,建立多重PCR SSCP法 ;收集 42名妇科肿瘤病人的基础资料及血液标本 ,抽提血液DNA ,用多重PCR法扩增hMSH2基因第六、第七外显子 ,并进行单链构象多态性分析(SSCP)及DNA序列分析。结果 :检测出 2位妇科肿瘤病人在hMSH2基因第七外显子有杂合性突变 ,且为Leu→Phe的错义突变。未发现hMSH2基因第六外显子上存在突变。结论 :多重PCR SSCP是筛查基因突变的一种快速有效的方法 ,hMSH2基因第七外显子上的突变可能是与妇科肿瘤发生相关的一种分子标记物。

hMTH1缺陷细胞株建立及生物学特性研究

目的 建立hMTH1缺陷细胞株 ,观察该缺陷所引起的生物学效应。方法 用hMTH1基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体 (pEGFP C1 T)转染人胚肺成纤维细胞 (HLF) ,半定量RT PCR鉴定其对hMTH1基因mRNA表达的抑制效果。同时观察转染细胞生长形态 ,绘制生长曲线 ,用流式细胞术观察细胞周期 ,软琼脂培养法鉴定恶性程度。结果 pEGFP C1 T载体在转染细胞内可较稳定表达 ,缺陷细胞株hMTH1mRNA表达水平比HLF细胞下降了 47%。hMTH1缺陷细胞生长形态无明显变化 ,细胞倍增时间为 0 89d ,与HLF细胞 0 93d接近 ,细胞周期各时相未受影响 ,软琼脂培养未见细胞集落。结论 hMTH1缺陷细胞株成功建立 ,该缺陷不足以单独引起可观察的生物学效应。

聚合酶链反应-增强化学发光检测结核分枝杆菌

目的 探讨微孔板杂交技术结合增强化学发光 (ECL)检测结核分枝杆菌 (MTB)。方法 同时应用聚合酶链反应 (PCR) ECL、PCR 比色法与PCR电泳检测 6 0例活动性肺结核和 5 4例健康对照痰标本 ,比较结果。结果 PCR ECL、PCR 比色法与PCR电泳总阳性率分别为 76 .7%、6 3.3%、5 0 .0 % ,其中PCR ECL阳性率显著高于PCR电泳 (P <0 .0 5 ) ;对涂片阳性标本 ,阳性率分别为 85 .7%、85 .7%、71.4% ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;对涂片阴性标本 ,阳性率分别为 73.9%、5 6 .5 %、43.5 % ,PCR ECL阳性率高于PCR电泳 (P <0 .0 5 )。另外PCR ECL、PCR 比色法与PCR电泳特异性分别为 92 .6 %、96 .3%、96 .3% ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 PCR ECL灵敏度高 ,能提高临床标本MTB检出率 ,尤其是对涂片阴性痰标本 ,并且该方法操作简单 ,结果客观。

DSB修复基因hKu70反义RNA真核表达载体构建

目的 构建人DNA双链断裂 (DSB)修复基因hKu70反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为以后的hKu70基因功能和毒理学研究提供实验材料。方法 提取人胚肺成纤维细胞 (HLF)总RNA ,逆转录酶 多聚酶链式反应 (RT PCR)扩增hKu70基因cDNA保守序列 ,经与pGEM T载体连接、筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后 ,将纯化的hKu70基因cDNA保守序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP C1中 ,筛选、克隆、抽提质粒 ,从而构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K。结果 经RT PCR获得 467bp含限制性内切酶位点的DNA片段 ,T载体克隆后经双酶切、测序 ,确定该片段为hKu70基因cDNA ,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,并双酶切 ,测序确证。结论 成功构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为建立该基因低表达细胞株。

hPARP-1基因cDNA翻译起始区域的T载体克隆

目的 克隆及构建含限制性内切酶位点BamHⅠ、SacⅠ的人聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 1(hPARP 1)基因cDNA翻译起始区域的pGEM T S载体 ,为以后的亚克隆和毒理学研究提供实验材料。方法 采用RT PCR方法 ,用正常人胚肺成纤维细胞 (HLF)抽提的总RNA逆转录成cDNA ,再以cDNA为模板 ,扩增hPARP 1基因片段 ,并直接与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5α ,用蓝 (白 )斑试验筛选出阳性克隆 ,抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定 ,再行序列分析。结果 经RT PCR获得 5 0 7bp含限制性内切酶位点的阳性产物 ,T载体克隆、PCR及酶切鉴定和序列分析后证实 ,克隆片段与Genbank中该基因的序列同源性为 99 9%。结论 该实验成功地构建了含hPARP 1基因cDNA翻译起始区域的T载体克隆 。

高浓度锌对雄性大鼠生殖系统的影响

目的:探讨高浓度锌对雄性大鼠生殖系统的影响.方法:分别以12、120、240mg/kg三个剂量的硫酸锌,给大鼠灌胃染毒60天,观察大鼠生殖系统的变化.结果:各剂量组锌对雄性大鼠的生殖系统产生不同程度的影响,低、中、高各剂量组大鼠精子数目和活动度分别为(93.35±23.62)×109/L、(61.92±10.01)%;(75.20±20.26)×109/L、(56.62±11.46)%和(46.45±18.84)×109/L、(42.85±10.49)%,与阴性对照组(72.60±22.72)×109/L、(58.85±8.85)%比较,低剂量组精子活动数目和活动度显著提高,高剂量组显著降低,且有统计学意义(P＜0.05).高剂量组大鼠睾丸有较明显的病理学损伤.结论:高浓度锌对雄性大鼠生殖有损伤作用.

精安胶囊对大鼠精子质量的影响

目的 :探讨精安胶囊对大鼠精子质量的影响 ,为临床安全使用提供依据。 方法 :80只SD雄性大鼠 ,随机分为低剂量组 ( 5 5 7 1mg/kg) ,中剂量组 ( 5 5 71mg/kg) ,高剂量组 ( 114 2 0mg/kg)和阴性对照组 ( 2 0g/L淀粉 )共 4组 ,每组 2 0只 ,连续给药 6 0d后处死 ,取一侧附睾分析精子计数、活率和形态 ,实验数据运用方差、χ2 检验、Kruskal Wal lis检验进行统计学分析。 结果 :各剂量组精安胶囊对大鼠的精子密度、活率和形态有不同程度的影响。低剂量组精子密度显著增加 (P <0 .0 1) ,高剂量组精子密度和活率降低 ,且与阴性对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。低剂量组精子形态异常率降低 ,中、高剂量组升高 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 )。 结论 :低剂量精安胶囊可改善精子质量 。

DNA错配修复酶hMSH2缺陷细胞株生物学特性

目的 通过对hMSH2酶缺陷的基因工程细胞的生物学特性研究 ,探讨错配修复酶hMSH2缺陷与肿瘤易感性的关系。方法 分别用普通光镜法、电镜法、细胞计数法、流式细胞术观察hMSH2酶缺陷细胞生长形态、超微结构、生长曲线及细胞周期 ,并通过软琼脂培养法鉴定hMSH2酶缺陷细胞恶性程度。结果 hMSH2酶缺陷细胞体积增大 ,有异型性改变 ;细胞表面突起增多 ,核浆比例增大 ;细胞生长速度加快 ;细胞内DNA含量增加 ,出现G1期阻滞 ;不能在软琼脂中生长。结论 hMSH2酶缺陷细胞恶性程度增加 ,肿瘤易感性增高 ,但不属于恶性细胞 。

利用Tox21通路数据库评估石家庄市大气细颗粒物中多环芳烃激活毒性通路的风险

目的:采用Tox21毒性检测数据库中通路数据对2017年石家庄市供暖期大气细颗粒物(PM2.5)中多环芳烃(PAHs)的检测数据进行分析计算,评估PM2.5引起毒性通路激活的风险。方法:在石家庄市河北医科大学远离工业污染源设置1个采样点收集大气PM2.5,通过气相色谱-串联质谱法(GC-MS)检测美国环境保护署优先控制的16种PAHs的浓度。利用MPPD软件计算各PAHs单体在成人肺泡中的沉积量;检索Tox21毒性检测数据库中芳烃受体(Ah R)、核因子E2相关因子(Nrf2)、p53和核因子κB(NF-κB)各通路的剂量反应关系数据,计算各PAHs单体激活各通路的单位强度;结合PAHs在肺泡的沉积量和PAHs激活通路的强度,评估PM2.5激活各个通路的风险。结果:石家庄市供暖期PM2.5中PAHs检测结果显示,苯并[a]芘的日均浓度为9.13 ng/m3,日均浓度排名前3的苯并[b]荧蒽、荧蒽和芘的浓度分别为22.88、17.86及14.31 ng/m3。这16种PAHs以苯并[a]芘为参照的毒性当量浓度为17.74ng/m3。毒性通路激活风险预测结果提示激活强度最大的是NF-κB通路,其次是Ah R、Nrf2,p53被激活的可能性最弱,其中相对应的活性暴露比(AER)值分别为1.97、1.71、0.58和0.28。结论:石家庄市大气细颗粒物中PAHs的暴露,可能通过激活NF-κB和AhR信号通路增加致癌风险。

癌症高发区环境水样有机提取物诱导L-02细胞转化及其表观遗传学机制

目的:检测华中某癌症高发地区环境水样有机提取物诱导人肝细胞系L-02细胞转化的能力,并初步探讨其诱导细胞转化的表观遗传学机制。方法:分别采集研究地区河水、离河较近(约1 km)及离河较远(约20 km)的浅井水(约10 m),用固相萃取方法提取其中的有机物。用台盼蓝染色计数法和单细胞凝胶电泳试验检测受试物的细胞毒性和致DNA损伤效应,以受试物对L-02细胞进行长期染毒并利用软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验检测受试物诱导L-02细胞转化的能力。采用甲基化特异性PCR(methyrlation specific PCR,MSP)技术检测转化细胞中O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O^6-methylguanine-DNA methyhransferase,MGMT)基因启动子区甲基化状况,并分别用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测转化细胞MGMT mRNA和蛋白的表达水平。结果:河水、离河较近的井水、离河较远的井水的有机提取物处理L-02细胞24 h后,细胞存活率达70%的处理浓度分别为每毫升培养基30、150、200ml原水,且均含有致DNA损伤的物质。以此作为最高剂量对细胞进行长期染毒,12周以后各处理组细胞软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验均显示转化特性。MSP结果显示转化细胞中MGMT基因启动子区发生高甲基化,与DMSO溶剂对照组比较,转化细胞中MGMT mRNA和蛋白表达水平均下调(P<0.05)。结论:研究地区环境水样有机提取物具有诱导L-02细胞转化的能力,MGMT基因启动子区的高甲基化可能参与有机物诱导的细胞转化过程。