多色荧光原位杂交检测苯系物接触工人精子1,18号染色体畸变率

为研究苯系物暴露对工人精子染色体的损伤 ,用 4条DNA探针与间期精子核染色体进行多色荧光原位杂交 ,同时检测精子 1号、18号染色体数目畸变和 1号染色体结构畸变 (末端缺失与重复 )。作业车间空气中苯的时间加权浓度 (TWA)为 4 2 2 9mg m3,高于国家卫生标准 (6mg m3)。暴露组工人尿粘糠酸 (ttMA)高于对照组。共计数15例暴露组工人 14 4 2 82条精子 ,14例对照组工人 135 937条精子 ,杂交效率为 99 85 %。非整倍体测定结果 :暴露组精子 1号、18号染色体双体率 (分别为 0 0 88%± 0 0 4 1% ,0 0 87%± 0 0 4 9% )显著高于对照组 1号、18号双体率(0 0 4 5 %± 0 0 2 4 % ,0 0 5 3%± 0 0 2 8% ) ;暴露组 1号、18号染色体缺体率分别为 (0 11%± 0 0 5 9% ,0 0 75 %±0 0 35 % )显著高于对照组相应数值 (0 0 4 8%± 0 0 18% ,0 0 4 5 %± 0 0 2 4 % ) ;而二倍体精子率 ,两组差别无显著性。结构畸变测定结果 :暴露组 1号染色体的末端重复率、末端缺失率 (分别为 0 16 %± 0 0 37% ,0 14 %± 0 0 5 3% )显著高于对照组数值 (分别为 0 0 82 %± 0 0 2 3% ,0 0 6 9%± 0 0 2 8% ) ;暴露组 1号染色体着丝粒重复率及着丝粒缺失率(0 10 %± 0 0 35 % ,0 10 %± 0 0 4 1% )

多色荧光原位杂交方法同时检测人精子染色体数目畸变和结构畸变

背景与目的:建立可以同时检测人精子染色体数目畸变和结构畸变的多色荧光原位杂交技术。材料与方法:使用2条1号染色体探针(着丝粒和末端探针),2条18号染色体着丝粒探针,分别用地高辛或生物素标记,与人精子核DNA进行荧光原位杂交,用CY3-链亲和素检测生物素探针杂交信号;用与FITC结合的抗地高辛抗体检测地高辛信号,结果:在Nikon荧光显微镜下,可以清楚看到精子头部呈现兰色的荧光信号背景下,有红色荧光点信号(1号染色体着丝粒),绿色荧光信号(1号染色体末端),和黄色荧光信号(18号染色体着丝粒部位红、绿两种荧光信号的混合色)。本方法能够同时检测到精子1号,18号染色体非整倍体率(双体率,缺体率),1号染色体短臂和着丝粒结构畸变(重复率,缺失率),以及二倍体精子率3种染色体异常。用建立的方法检测14名正常人135 937条精子,测得1号染色体双体率、缺体率分别为O.045％和0.048％;18号染色双体率、缺体率分别为0.053％和O.045％:二倍体精子率为0.061％;1号染色体末端重复率、缺失率分别为0.082％、0.069％,1号着丝粒重复率、缺失率分别为O.075％,O.060％;均在文献报道范围内。结论:本研究建立的多色FISH可用于测定正常人和环境化学物接触人群精子染色体数目畸变和结构畸变。

双色荧光原位杂交检测苯系物接触者精子7、8号染色体数目畸变

目的 检测苯系物接触者精子 7、8号染色体数目畸变率。方法 用生物素标记 7号染色体探针 (D7Z1)和地高辛标记 8号染色体探针 (D8Z1)与精子核进行双色荧光原位杂交 ,测定精子染色体畸变率。结果 车间空气中苯的时间加权浓度为 42 .2 9mg/m3 ,高于国家卫生标准 ( 6mg/m3 )。苯系物接触者尿粘康酸浓度 ( 0 .861mg/g肌酐 ) ,高于对照组 ( 0 .44 4mg/g肌酐 )。杂交效率 99.77%～ 99.97% ,共计数15例苯系物接触者 15 5 72 1条精子核和 12名对照组者 12 3 771条精子核型。接触组二倍体精子率 ,平均7、8号染色体双体精子率 (分别为 0 .12 9%、0 .170 %和 0 .0 78% )均高于对照组 (分别为 0 .0 5 5 %、0 .0 5 3 %、0 0 3 3 % )。接触组 7号、8号染色体缺体精子率 (分别为 0 .165 %和 0 .0 88% ) ,也分别高于对照组 ( 0 .0 5 6%、0 0 2 9% )。总数目畸变精子率接触组为 0 .745 % ,高于对照组的 0 .2 89%。结论 较高浓度的苯系物暴露可引起接触者精子 7、8号染色体非整倍体率和二倍体精子率增高。