猕猴自体骨髓干细胞移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的探讨自体骨髓干细胞肝门静脉移植对猕猴急性肝损伤的治疗作用和为人类肝损伤治疗提供依据和方法。方法猕猴10只,随机分为实验组和对照组,每日皮下注射40%CCL40.8ml/kg,连续注射4d,经肝功能生化指标检测及肝穿组织病理学观察确认肝损伤后,分离实验组猴的自体骨髓单个核细胞,按3×108细胞/kg将骨髓细胞植入肝门静脉,植入后60d进行肝功能相关指标检测及组织病理学观察。结果连续注射CCL44d后,血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、球蛋白(GLOB)(P<0.001),而总蛋白(TP)和白蛋白含量无变化(P>0.05),肝组织结构紊乱,大量肝细胞坏死,部分细胞变性,水肿,汇管区及周围有大量炎性细胞浸润。骨髓细胞肝门静脉移植后60d,血清AST、ALT活性和GLOB、BIL含量显著低于对照组(P<0.05),而TP、ALB、LDL含量高于对照组(P<0.05),病理组织学观察结构清楚,而对照组有纤维增生和肝细胞有脂肪变性。结论自体骨髓细胞肝门静脉移植能对猕猴急性肝损伤有明显治疗作用,可改善急性肝损伤猕猴的肝功能及组织结构,提示该方法可能对人类急性肝损伤有一定治疗意义。

猴脑血管缺血模型复制及骨髓间充质干细胞移植治疗

目的建立猕猴局灶性血管缺血性脑损伤模型,评价自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑损伤的疗效及临床治疗可行性。方法用导管介入法从股动脉将栓子输送至大脑中动脉使大脑中动脉分支动脉栓塞,诱发局灶性缺血性脑损伤,经CT扫描确认脑损伤及部位和行为学观察符合脑损伤要求。分离扩增自体骨髓间充质干细胞至第4代,于脑血管栓塞后30d,在CT引导下将4×108细胞/kg骨髓间充质干细胞移植到脑损伤部位,每月1次连续观察脑损伤面积及行为学变化。结果脑血管栓塞前造影明显可见左侧大脑中动脉血管树及其分支分布情况,栓塞后血管造影证实额颞区无血管显示,随后连续CT扫描见额颞叶区明显梗死灶,行为学观察可见血管栓塞对侧前后肢运动功能严重障碍。间充质干细胞移植后3个月可见脑损伤面积明显缩小,脑神经功能明显改善,半年后脑损伤面积进一步缩小,脑神经功能基本恢复正常。结论自体骨髓间充质干细胞移植有助于缺血性脑损伤结构修复和功能恢复。

猴血管缺血性脑损伤模型的建立及评价

目的建立猕猴血管缺血性脑损伤模型,为干细胞移植治疗脑损伤的研究提供实验模型。方法用导管介入法将聚乙稀醇(PVA)栓子输送至大脑中动脉使大脑中动脉分支动脉栓塞,诱发缺血性脑损伤,连续CT扫描观察脑损伤变化和血管栓塞对侧神经功能评定分析缺血性脑损伤后的神经功能变化。结果脑血管栓塞前造影明显可观察到左侧大脑中动脉血管树及其分支分布情况,栓塞后血管造影证实额颞区无血管显示,连续24hCT扫描发现栓塞后6h内可见脑细胞水肿,但无明显可见梗死灶。12h后见额颞叶区梗死灶,24h可见明显梗死灶,1个月后见梗死灶面积减小,此后1年内梗死面积未见明显变化。行为学观察可见血管栓塞对侧前后肢运动功能严重障碍,1个月内神经功能评分为3～4级,3个月后为3级。结论用大脑中动脉介入法注入PVA栓子,成功建立了血管缺血性脑损伤模型。

骨髓造血干细胞与肝再生的相关性研究

感染、中毒等引起的急慢性肝损伤治疗是临床医学领域的世界性难题,干细胞的研究为肝再生提供了全新的思路.肝再生的细胞学机制涉及肝细胞、肝干细胞和骨髓干细胞等. 新近发现骨髓造血干细胞具有向肝细胞转化的潜能,可以在体内外被诱导分化为肝样细胞,移植到肝损伤动物体内可以修复肝组织损伤,这为肝再生研究开辟了新的途径.对骨髓造血干细胞参与肝细胞再生的深入研究,有可能找到肝损伤治疗的有效措施.

人肝癌高增殖率细胞筛选及致瘤特性分析

目的分离培养人肝癌组织中的高增殖率细胞并观察其生物学特性。方法无菌采集人肝细胞癌组织,切成1mm×1mm×1mm组织块并置于裸鼠肾包膜下生长3w;相同方法反复体内传代3次后,将组织块剪碎,胶原酶消化分离为单细胞悬液,接种于培养瓶中,用阿霉素(Adm)5mg/L处理72h获得抗药细胞。通过体外培养和体内生长观察该细胞的生长规律;用免疫细胞化学染色观察其表达C-kit、CD133和甲胎蛋白(AFP)的情况。结果原代肝癌细胞直接分离培养生长较缓慢,经体内传代3次后,分离培养获得生长良好细胞,再经抗肿瘤药物阿霉素共培养后,获得耐Adm细胞。经体内生长特性观察发现,Adm筛选后,相同数量细胞的致瘤生长速度升高。经免疫组化染色分析发现,筛选后的细胞表达C-kit、AFP、CD133。结论通过组织块体内传代、体外抗癌药物筛选,初步获得表达肝干细胞标志性抗原的高致瘤性细胞。

大鼠异位心脏移植模型的术式探讨

目的探讨大鼠异位心脏移植模型的手术操作方法,并对大鼠颈部和腹部异位心脏移植的术式进行了比较。方法施行颈部异位心脏移植60次和腹部异位心脏移植90次,均采用显微外科缝合法进行动静脉吻合。结果颈部和腹部异位心脏移植供心获取时间分别为(10.0±2.2)min和(7.2±0.8)min。受体血管吻合时间分别为(28.2±5.6)min和(20.6±3.8)min。无干预同系移植组中,颈部和腹部异位心脏移植手术成功率分别为83.2%和92.6%,两种术式的手术成功率差异无统计学意义(P>0.05)。结论两种异位心脏移植术式均可作为移植免疫及药物实验研究的可靠动物模型,两种术式分别有其各自的优缺点,术式选择主要根据实验者的设计进行。

大鼠原位肾脏移植模型的显微外科技巧

目的探讨建立稳定、可靠的大鼠原位肾脏移植模型的显微外科手术技巧。方法供体手术经腹主动脉以4℃乳酸钠林格注射液对供肾进行原位灌洗。受体手术采用将供肾的血管与受体的同名的血管作端端吻合的大鼠原位左肾移植。结果共施行大鼠原位肾脏移植手术120例,手术成功率为91.5%;非干预组中,同系移植大鼠1个月存活率为82.9%。结论肾动、静脉和输尿管的重建均采用端端吻合法而无须阻断腹主动脉和下腔静脉,大大减少了对受体循环系统的影响。该模型稳定性强、重复性好,适合于移植免疫的基础研究。