FQ_2在日本血吸虫DNA疫苗诱导免疫机制的研究

目的探讨佐剂FQ_2与日本血吸虫DNA26Kda疫苗共同作用下小鼠的免疫状态。方法选取4～6周龄BALB／C小鼠52只,分成生理盐水组、FQ2组(A)、Sj26GST组(B)和FQ_2+SJ26GST组(C)等4组,于第0、2、6周各免疫1次,接种后4周以日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后6W剖杀小鼠,分析脾脏T淋巴细胞CD4^+和CD8^+细胞率,测定血清中特异性IgG水平。结果 B组和C组均可诱导CD8^+淋巴细胞的增殖,C组升高更为显著,CD4^+／CD8^+比率倒置,也均可于4周后诱导小鼠产生高滴度的IgG抗体,二组间差异无显著(P>0．05)。结论 PQ_2对Sj26GST DNA疫苗有明显的增效作用,推测增效作用主要由细胞免疫所介导。

人类GAD_(67)基因扩增及pEGFP-C2-GAD_(67)真核表达载体的构建

目的扩增人类谷氨酸脱羧酶(GAD)67基因,并构建pEGFP-C2-GAD67真核表达载体。方法应用基因重组技术,采用反转录PCR方法对来自人类脑组织cDNA中编码GAD67的基因片段进行扩增,插入PUC57克隆载体,经XhoⅠ和BamHⅠ双酶切出GAD67基因片段,再克隆入真核表达载体pEGFP-C2后构建pEGFP-C2-GAD67重组载体,经PCR扩增、酶切后测序鉴定。结果人类GAD67基因扩增产物大小为1785bp,编码594个氨基酸残基。重组真核表达载体经酶切鉴定表明为正确重组子,PCR正确扩增出目的条带。与GenBank中人类GAD67基因序列比较,核苷酸和氨基酸水平的同源性分别达99.78%和99.66%。结论人类GAD67基因克隆后,可成功构建真核表达载体pEGFP-C2-GAD67,为进一步该基因转染神经干细胞移植治疗癫痫提供了实验基础。