年龄相关的骨髓细胞分化对成骨和破骨影响的实验研究

目的 从骨髓细胞分化角度研究年龄相关的成骨和破骨细胞分化的机理 ,探讨老年性骨质疏松症的发生机理。方法 通过骨髓细胞培养 ,应用组织形态学、流式细胞仪分析和分子生物学技术 ,采用碱性磷酸酶 (AL P)染色和骨钙素检测等手段观察青年大鼠和老年大鼠骨髓细胞分化成成骨和破骨细胞的状况。结果 青年大鼠骨髓基质细胞 (MSCs)形成成骨细胞数比老年大鼠多 (P<0 .0 1 ) ;老年大鼠骨髓细胞形成破骨细胞数比青年大鼠多 (P<0 .0 1 )。结论 大鼠骨髓细胞分化成成骨细胞的能力与年龄呈负相关 ,分化成破骨细胞的能力与年龄呈正相关。

生物信息学方法筛选华支睾吸虫成虫功能基因——钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白

目的本文通过建立华支睾吸虫成虫cDNA文库,筛选其功能基因。方法应用SMART方法构建华支睾吸虫成虫cDNA文库,进行大量EST测序,然后应用生物信息学方法将EST序列与GenBank中登陆的序列进行同源性比对、序列拼接及基因完整性判断;并应用NCBI上的RPSBLAST对所筛选基因的保守域进行搜索比对,利用PredictProtein分析、预测其功能域及二级结构。结果从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选的钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白(CsCBLP)基因,经同源性分析,CsCBLP与褐家鼠钙调神经磷酸酶(CaN)同源性为53%,与尾刺耐格里原虫CaNB同源性为40%,与新小杆线虫属结合蛋白的同源性为51%;保守域的比对及功能域、二级结构的预测显示所筛选的CsCBLP是钙调神经磷酸酶B亚基的的类似物,属于钙结合蛋白家族。结论应用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因。

小鼠骨髓干细胞体外诱导成熟的树突状细胞对T细胞增殖的影响

目的 :研究小鼠骨髓干细胞体外诱导分化的树突状细胞对 T细胞增殖的影响 ,为进一步研究树突状细胞的功能及临床肿瘤的治疗提供有效的实验方法。方法 :应用 IL- 4和 GM- CSF培养小鼠骨髓细胞 5～ 7d,光镜下观察细胞形态学变化 ;培养至第 5～ 6天 ,加入黑色素瘤 (B1 6 )冻融抗原继续培养 1～ 2 d,流式细胞仪检测细胞表面分子 CD83、CD86 ,并与同种异体 T细胞混合培养 72 h,终止培养前 1 6 h加入 3H- Td R(1 8.5 k Bq/孔 ) ,γ-液体闪烁仪测定 cpm值。结果 :用 IL- 4和 GM- CSF培养 3d可见细胞形态发生改变 ,细胞形状不规则 ,培养 5～ 6 d时 ,有刺状突起、拉长 ,为典型树突状细胞形态学特征 ;抗原装载后流式细胞仪检测 CD83、 CD86表达 ,IL - 4 +GM- CSF+TNF-α组 (6 1 .6 8%、 71 .2 5 % )及 IL - 4 +GM- CSF+冻融抗原组 (6 3.1 1 %、 76 .88% )明显高于对照组(2 .4 1 %、 3.88% )及单纯 IL - 4 +GM- CSF培养组 (2 1 .86 %、 2 8.6 9% ) (P<0 .0 0 1 ) ,IL - 4 +GM- CSF+TNF-α组与 IL- 4 +GM- CSF+冻融抗原组比较 ,CD83和 CD86表达差异无显著性 ;液闪仪检测结果显示 ,IL- 4 +GM- CSF+冻融抗原组刺激 T细胞增殖的能力明显强于其他组 ,且差异具有显著性 (P<0 .0 0 1 ,P<0 .0 5 )。结论

应用生物信息学方法筛选华支睾吸虫功能基因-Cdc42样蛋白

目的通过建立华支睾吸虫成虫cDNA文库,筛选其功能基因,以研制华支睾吸虫的药物靶标。方法应用SMART方法构建华支睾吸虫成虫cDNA文库,进行大量EST测序,然后应用生物信息学方法分析EST序列。结果从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出Cdc42样蛋白基因。结论应用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出Cdc42样蛋白基因。

小鼠骨髓来源的树突状细胞体外诱导分化的实验研究

目的 研究小鼠骨髓树突状细胞体外诱导分化、成熟及对T细胞增殖的影响 ,为进一步研究树突状细胞的功能及临床肿瘤治疗的应用提供技术方法。方法 应用IL 4、GM CSF培养小鼠骨髓细胞 5～ 7d ,镜下观察细胞形态学变化 ;培养至第 5～ 6d ,加入黑色素瘤 (B16 )冻融抗原继续培养 1～ 2d ,流式细胞仪检测细胞表面分子CD83、CD86 ,并与同种异体T细胞混合培养 72h ,终止培养前 16h加入 3H TdR(0 .5 μCi 孔 ) ,γ 液体闪烁仪测定cpm值。 结果 IL 4、GM CSF培养 3d可见细胞形态发生改变 ,细胞形状不规则 ,培养 5～ 6d时 ,有刺状突起、拉长 ,为典型树突状细胞形态学特征 ;抗原装载后流式细胞仪检测CD83、CD86表达 ,IL 4 +GM CSF +TNF α组 (6 1.6 8% ,71.2 5 % )及IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组 (6 3.11% ,76 .88% )明显高于对照组 (2 .4 1% ,3.88% )及单纯IL - 4 +GM -CSF培养组 (2 1.86 % ,2 8.6 9% ) (P <0 .0 0 1) ,IL - 4 +GM -CSF +TNF -α组与IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组比较CD83、CD86表达没有显著性差异 ;液闪仪检测结果显示 ,IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组刺激T细胞增殖的能力明显强于其他组 ,且有显著性差异(P <0 .0 0 1,P <0 .0 5 )。