肝移植术后新发恶性肿瘤四例临床分析

目的 探讨肝移植术后新发恶性肿瘤的临床特征、危险因素和防治措施.方法 回顾性分析2003年8月至2008年12月间行肝移植术的726例受者中新发恶性肿瘤的临床资料.结果 在726例肝移植受者中,术后新发恶性肿瘤4例,发生率为0.6%;患者均为男性;新发恶性肿瘤的类型分别为：急性髓性白血病、胃癌、肺癌和未分化肝肉瘤;患者肝移植时年龄为42～57岁,中位年龄52岁,肿瘤确诊时的年龄为45～60岁,中位年龄53岁;从接受肝移植手术至发生肿瘤的时间为6～38个月,中位时间31个月.4例患者均死于肿瘤进展和多器官功能衰竭.肝移植术至死亡时间为12～48个月,中位时间39.5个月;确诊为新发恶性肿瘤至死亡时间为6～10个月,中位时间8.5个月.结论 肝移植术后新发恶性肿瘤国内发病率低于国外;确诊时间较晚是患者死亡的主要原因;重视癌前病变和高危因素,早期诊断,早期治疗是提高疗效的关键.

合并门静脉血栓形成的肝细胞癌肝移植12例分析

目的探讨合并门静脉血栓形成(PVT)的肝细胞癌肝移植手术疗效、手术技巧及围手术期处理。方法回顾性分析中山大学附属第三医院自2003年10月至2005年6月12例合并PVT的肝细胞癌肝移植临床及随访情况。结果术后随访8d至36个月,中位时间19.5个月。术后第12天、第21天、第30天各死亡1例,死于肺部感染、多器官功能衰竭。随访期间死亡1例(术后第15个月死于肝癌复发)。目前存活8例,其中7例已经无瘤生存13、14、24、24、25、28、30个月,1例带瘤存活36个月。12例病人1年累积存活率75.0%。1例病人肝移植术后2个月吻合口局部PVT复发,目前已经存活30个月。结论合并PVT的肝细胞癌肝移植者预后良好,合理的手术技巧和恰当的术后处理可以避免术后PVT复发。

肿瘤干细胞表面标志物CD133在肝细胞肝癌组织中的表达及其与肝移植患者预后的关系

目的探讨肿瘤干细胞表面标志物分化群抗原（CD）133在肝细胞肝癌（肝癌）组织中的表达及其与肝移植患者预后的关系。方法本回顾性研究的109例肝癌组织标本来源于2004年1月至2007年12月在中山大学附属第三医院肝移植中心施行同种异体原位肝移植，组织病理学检查证实为肝癌的手术切除标本，另取41例肝穿刺正常肝组织作为正常对照。收集109例肝癌患者的临床病理学资料，并对其进行术后随访，收集患者存活时间，肿瘤复发、转移及死亡情况的随访资料。所有患者均签署知情同意书，符合医学伦理学规定。应用免疫组织化学方法检测109例肝癌组织和41例正常肝组织中CD133的表达水平，分析CD133阳性表达与患者年龄、性别、甲胎蛋白（AFP）、外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）、肿瘤直径、肿瘤数量、分化程度、血管侵犯等肝癌临床病理学参数的关系。应用Kaplan—Meier法计算患者移植后存活率，应用Log—rank检验比较各参数对存活率的影响。结果全组肝癌患者均接受随访，随访时间6～77个月。随访期间肿瘤复发37例，复发部位分别为肝内24例、肺部6例、腹腔3例、全身多发性转移或骨转移4例。随访期间死亡40例，分别死于肿瘤复发35例、胆道并发症3例、肺部感染和急性粒细胞白血病各1例。肝癌组织中CD133阳性表达44例，阳性率为40．4％，正常肝组织无CD133表达，比较差异有学意义（P〈0．01）。CD133阳性表达与肿瘤直径、肿瘤分化程度有关（均为P〈0．05）。CD133阳性组患者肝移植的1、3、5年存活率明显低于CD133阴性组患者（χ2=8．008，P〈0．05）。结论肝癌组织存在CD133表达，CD133阳性表达的肝癌肝移植患者预后较差。

再次肝移植术后早期与死亡率相关的危险因素分析

目的探讨再次肝移植术后早期与死亡率相关的独立危险因素。方法回顾性分析2004年1月至2007年12月间的36例再次肝移植的资料。根据再次肝移植术后早期（术后3个月内）的转归，将患者分为死亡组和存活组。收集两组患者术前及术中常用的15项临床或实验室指标作为可能影响死亡率的危险因素进行单因素分析，将有统计学意义的危险因素再进行Logistic回归分析，筛选出与术后早期死亡率相关的独立危险因素。结果再次肝移植术后早期死亡率为25％（9／36），死亡原因为：严重感染5例（55．6％），急性肾功能衰竭2例（22．2％），心肌梗死和脑出血各1例（各11．1％）。经单因素分析显示，死亡组和存活组间术前肌酐水平、终末期肝病模型评分、感染、重症监护室（ICU）监护时间、机械通气时间以及再次肝移植的手术时间和术中出血量的差异有统计学意义（P〈0．05），Logistic多元回归分析显示，术前ICU监护时间和术中出血量是术后早期与死亡率相关的独立危险因素。结论再次肝移植术前ICU监护时间和术中出血量与术后早期死亡率密切相关。

肝癌白细胞抗原-G的表达及其在肝癌肝移植预后中的价值

目的探讨人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)在肝细胞肝癌组织中的表达及其在肝癌肝移植患者预后中的价值。方法回顾性分析2004年1月至2008年5月期间中山大学附属第三医院肝移植中心收治的83例肝癌肝移植患者的临床资料。应用免疫组化方法检测肝细胞肝癌组织及其癌旁组织中HLA-G的表达情况,应用Kaplan-Meier法计算累积生存率和无瘤生存率,采用log-rank检验和Cox回归模型分别进行无瘤生存率单因素和多因素分析。结果 83例肝癌肝移植患者中,35例(42.2%)肿瘤复发。全部病例1、3和5年累积生存率分别为97.2%、89.8%和43.1%,1、3和5年无瘤生存率分别为93.6%、68.9%和38.7%。肝癌组织中HLA-G表达阳性率(68.7%)明显高于癌旁组织(15.7%,P<0.01)。HLA-G的表达与肿瘤直径、病理分级和血管侵犯有关(P<0.05)。单因素分析显示,影响肝癌肝移植术后无瘤生存率的危险因素有HLA-G表达(P<0.01)、肿瘤直径(P<0.05)、肿瘤侵犯血管(P<0.01)及病理分化程度(P<0.01)。HLA-G表达阳性组移植后的无瘤生存率低于HLA-G表达阴性组(P<0.01)。Cox风险回归模型结果表明,HLA-G表达(P<0.05)、肿瘤侵犯血管(P<0.01)及病理分化程度(P<0.05)是影响肝癌肝移植患者术后无瘤生存率的独立危险因素。结论肝癌组织存在HLA-G表达。HLA-G表达、肿瘤侵犯血管及病理分化程度是影响肝癌肝移植患者术后无瘤生存率的独立危险因素。对HLA-G表达阳性患者采取干预治疗及严格筛选肝癌肝移植的适应证可有效降低术后肿瘤的复发率。

应用终末期肝病模型对慢性重型肝炎患者的预后评估

目的 探讨终末期肝病模型（MELD）在慢性重型肝炎患者的预后评估与治疗策略中的意义。方法 回顾性分析135例慢性重型肝炎患者的临床资料,计算患者入院时的MELD分值和接受治疗2周后的MELD分值与入院时MELD分值的差值（△MELD分值）,分析MELD分值和△MELD分值与患者3个月病死率的关系。结果 入院时MELD分值死亡组患者为37．00±6．50,存活组为25．80±5．20,死亡组患者入院时的MELD分值远高于存活组,两组间差异有统计学意义（x^2=72.00,P〈0．01）,接受治疗2周后△MELD分值死亡组患者为1．57±0．89,存活组为-0．99±0．73,两组间差异有统计学意义（x^2=56．35,P〈0．01）。患者入院时MELD分值和接受治疗2周后△MELD分值预测慢性重型肝炎患者3个月内病死率的c-统计值分别为0．90和0．76。MELD分值〈25组,患者3个月后病死率为2％,25≤MELD分值≤30组病死率为7％,300组和≤0组的病死率分别为51％和13％,两组间病死率差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 MELD分值和△MELD分值越高,慢性重型肝炎患者的病死率越高,MELD能较准确地预测慢性重型肝炎患者的预后,可以结合患者入院时的MELD分值和接受治疗后的△MELD分值来决定慢性重型肝炎患者的治疗方案。

RNA干扰白细胞抗原-G增强自然杀伤细胞对肝癌的免疫监视

目的构建表达人类白细胞抗原-G（HLA—G）基凶shRNA载体，探讨其对自然杀伤细胞（NK）细胞杀伤效应的影响。方法构建4个HLA—G—shRNA真核表达质粒，转染至Huh7细胞。检测HLA—GmRNA及蛋白质水平的表达。将NK-92MI细胞与靶细胞共同培养，以LDH释放法观察不同效靶比时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果经酶切及测序鉴定证实，插入序列与设计的序列相符。RealTime—PCR和Western-blot结果均表明重组载体抑制了Huh7细胞HLA-G基因的表达。NK-92MI细胞对转染HLA—G的shRNA的Huh7细胞杀伤作用明显升高（P〈0．01）。封闭NK-92MI细胞ILT2受体后，杀伤作用降低（P〈0．01）。结论HLA—GshRNA可以增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应。

HLA-E基因慢病毒载体构建及其在肝癌HepG2细胞中的表达

目的构建表达人类白细胞抗原-E(HLA-E)基因慢病毒载体,探讨慢病毒介导HLA-E基因在肿瘤免疫中的意义。方法2006年10月至2007年11月在中山大学附属第三医院肝移植中心应用pGC-E1-GFP-HLA-E慢病毒载体转导肝癌HepG2细胞,检测慢病毒载体的转导效率、细胞内HLA-E信使核糖核酸(mRNA)及蛋白质水平的表达。结果pGC-E1-GFP-HLA-E慢病毒载体转导肝癌HepG2细胞72h的转导效率为(95.0±1.3)%;通过RT-PCR检测24h后细胞内HLA-E mRNA水平是肝癌HepG2细胞的(8.73±1.05)倍,72h后为(293.48±42.01)倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。细胞免疫组化显示转导HLA-E后细胞内的蛋白水平明显增强。结论慢病毒载体系统能够使转导的基因在靶细胞中得到稳定表达,是基因治疗中的理想载体。

改良终末期肝脏疾病模型对慢性乙型重型肝炎预后的评估

目的探讨改良终末期肝脏疾病模型（MELD—Na）在慢性乙型重型肝炎患者的预后评估与治疗策略的制定中的意义。方法回顾性分析2007年1月至12月单一中心426例慢性乙型重型肝炎患者的临床资料，分析患者入院时的血清Na＋浓度、MELD值、MELD-Na值和接受治疗2周后的MELD—Na值与入院时MELD—Na值的差值（AMELD-Na分值）与患者3个月病死率的关系，以c-statistic评价各模型的预测准确性。结果患者人院时的血清Na＋浓度、MELD值和MELD—Na值预测慢性乙型重型肝炎患者3个月病死率的c-statistic分别为0．718、0．875和0．922。MELD-Na≥40组、35〈MELD—Na〈40组、30〈MELD．Na≤35组、25≤MELD-Na≤30组和MELD—Na〈25组的3个月病死率分别为86．9％、53．8％、35．4％、5．4％和2．0％，各组间病死率差异有统计学意义（P〈0．05）；AMELD．Na〉0组和≤0组的病死率分别为65．9％和15．8％，两组间病死率差异有统计学意义（P〈0．05）。结论MELD—Na能准确预测慢性乙型重型肝炎患者的预后，AMELD-Na值是临床工作中预测慢性乙型重型肝炎患者治疗效果的一个良好参数。

人类白细胞抗原-GRNA干扰载体的构建及效应检测

目的构建表达人类白细胞抗原-G(HLA-G)基因shRNA载体,探讨其对NK细胞杀伤效应的影响。方法构建4个HLA-G-shRNA真核表达质粒,瞬时转染至人肝癌Bel-7402细胞,检测HLA-G mRNA和蛋白水平的表达。将NK-92MI细胞(效应细胞)与转染后的Bel-7402细胞(靶细胞)共同培养,以LDH释放法观察不同效靶比时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果经酶切及测序鉴定证实,插入序列与设计的序列相符。RT-PCR和Western blot结果均表明重组载体抑制了Bel-7402细胞HLA-G基因的表达。NK-92MI细胞对转染HLA-GshRNA的Bel-7402细胞杀伤作用明显增强(P<0.01)。封闭NK-92MI细胞KIR2DL4受体后,杀伤作用减弱(P<0.01)。结论成功构建了HLA-G shRNA载体,下调HLA-G可以增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应,HLA-G与NK细胞表面KIR2DL4受体结合后,向NK细胞传递抑制效应。