雄激素受体三螺旋形成寡核苷酸抗前列腺癌细胞增殖的研究

目的 探讨反基因策略对雄激素受体(AR)表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法 针对AR基因2 4 4 7～2 4 6 1核苷酸序列设计并合成三螺旋形成寡核苷酸(TFO) ,经脂质体介导转染LN CaP前列腺癌细胞株,于转染后2 4、4 8、72h分别采用3H 胸腺嘧啶核苷(TdR)参入实验测定癌细胞增殖活性,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测ARmRNA表达,用放射配基结合分析法(RBA)单点法检测AR蛋白质表达,并与反义寡核苷酸(ASON)相比较。结果 2 4、4 8、72hTFO组LNCaP细胞的AR表达水平明显低于ASON组(P <0 0 5 ) ,TFO对LNCaP细胞增殖的抑制率显著高于ASON(P <0 0 5 )。结论 该TFO能有效抑制AR表达和前列腺癌细胞增殖。

^3H-TdR标记人骨髓间充质干细胞移植治疗mdx鼠的实验研究

目的探讨人骨髓间充质干细胞移植mdx鼠能否修复骨骼肌肌膜病变及干细胞在其体内的分布特点.方法用氚-脱氧胸腺嘧啶(3H-TdR)标记人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs),以每只鼠干细胞1×107/0.3 ml经尾静脉注入18只免疫抑制的mdx鼠(8～10周龄).于移植后24 h、48 h、2周、1月、2月、4月处死鼠,分别测定各组织器官的放射活性;用免疫荧光法检测骨骼肌肌膜营养障碍基因(dystrophin,Dys)表达情况.结果移植后1月,多数组织、器官放射活性显著高于对照组,其中以骨髓、肝、脾放射活性增高更为明显.大多数组织器官放射活性随时间推移逐渐下降,而骨骼肌放射活性的从2周时开始逐渐升高,于1月时达到高峰(27.65±3.53 Bq/mg湿重).1月之后,骨髓、骨骼肌放射活性仍保持较高水平.免疫荧光显示移植后24 h、48 h、2周骨骼肌Dys免疫荧光呈阴性,1月后呈阳性,1月、2月、4月阳性率分别为:6.6%、8.4%、8.9%.结论 hBM-MSCs能植入mdx鼠体内,并融合、分化为骨骼肌,部分修复骨骼肌肌膜病变;hBM-MSCs移植入mdx鼠后早期主要分布在骨髓、肝、脾,后期主要分布在骨髓、骨骼肌.

BAC_5-scFv的表达、复性及活性检测

目的探讨以包涵体形式表达的抗鼻咽癌单克隆抗体(mAb)BAC5的单链抗体(BAC5-scFv)的纯化、复性方法,并对其活性进行检测。方法扩增pET-22b-scFv质粒转化的大肠杆菌BL21(DE3)菌株,培养、破菌后,分离和变性包涵体,用Ni-NTA His Bind层析柱纯化变性的scFv。经稀释、透析及尿素梯度凝胶层析柱3种方法进行复性。用细胞免疫组化染色和蛋白印迹法(Western blot),鉴定复性后的BAC5-scFv的免疫活性。结果Ni-NTA His Bind亲和层析柱能有效纯化变性的scFv。以尿素梯度凝胶层析柱复性的蛋白回收率最高。免疫细胞化学染色法检测及Western blot分析证实,复性后的BAC5-scFv可与CNE2细胞上的抗原特异性结合。结论以包涵体形式表达的BAC5-scFv经变性、纯化及复性后,获得良好的免疫活性,为大量制备具有活性的BAC5-scFv,并用于鼻咽癌的放射免疫显像和治疗研究奠定了基础。

^(188)Re标记抗人前列腺癌单克隆抗体及其在荷瘤裸鼠体内的放射性分布

为探讨188Re标记抗前列腺癌单克隆抗体7E11C5.3的方法及其生物学分布,采用2-巯基乙醇直接还原法制备188Re-7E11C5.3标记物,常规测定标记率和免疫活性,在荷瘤裸鼠体内检测标记物的生物学分布。结果显示,188Re-7E11C5.3的标记率为(93.16±2.18)%,免疫活性分数为(74.86±1.86)%;经尾静脉注入裸鼠体内后,肿瘤组织摄取率在24h达高峰,非肿瘤组织在4h摄取率较高,以后均随时间延长逐步降低;血液放射性清除迅速;24h时T/NT值达最大,至72h仍可保持在较高水平。结果表明,188Re-7E11C5.3在裸鼠体内对前列腺癌移植瘤有良好的靶向定位作用,可用于前列腺癌放射免疫显像和治疗研究。

^(188)Re-7E11C5.3抑制前列腺癌细胞增殖

目的:探讨铼-188(188Re)标记前列腺特异膜抗原单克隆抗体7E11C5.3(188Re-7E11C5.3)对前列腺癌细胞系LNCaP的体外抑制作用。方法:采用2-巯基乙醇直接还原法制备188Re-7E11C5.3标记物,纸层析法测定标记率和放化纯度,直线回归外推法测定免疫活性分数。四唑盐(MTT)法测定其体外细胞毒作用。结果:188Re-7E11C5.3的标记率为(93.16±2.18)%,放化纯度为(95.62±0.48)%,免疫活性分数为(74.86±1.86)%。188Re-7E11C5.3对LNCaP细胞的生长抑制作用明显强于188Re标记的正常鼠IgG(mIgG)和游离188ReO4-,其半数有效抑制浓度(IC50)分别为(23.38±3.73)×107Bq/L,(59.21±8.02)×107Bq/L和(68.89±10.91)×107Bq/L。结论:188Re-7E11C5.3能有效抑制体外培养LNCaP细胞的增殖,可用于前列腺癌的放射免疫治疗。

^(188)Re-7E11C5.3在前列腺癌裸鼠模型中的放射免疫治疗研究

为探讨188Re标记前列腺特异膜抗原单克隆抗体7E11C5.3放射免疫治疗前列腺癌裸鼠移植瘤的效果,将32只荷LNCaP移植瘤裸鼠随机分成4组:188Re-7E11C5.3组、188Re-mIgG组、188ReO4-组和对照组,采用5.55MBq单剂量尾静脉注射给药,连续4周观察裸鼠体重和肿瘤体积变化。实验结束后,检测裸鼠血清PSA水平,测定移植瘤重量,计算抑瘤率。结果显示,188Re-7E11C5.3组的瘤体重量和动物血清PSA水平均小于对照组(P<0.01),抑瘤率为60.7%。188Re-mIgG组和188ReO4-组的瘤体重量和裸鼠血清PSA水平与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结果表明,188Re-7E11C5.3能有效抑制前列腺癌裸鼠移植瘤的生长,具有较好的抗前列腺癌应用前景。

单链抗体及其融合蛋白在肿瘤诊治中的应用

单链抗体由于分子量小,免疫原性低,组织穿透力强,特异性好等优点,与单克隆抗体相比,在肿瘤的诊断和治疗方面展示了更好的应用前景。全文对近年来单链抗体及其融合蛋白在肿瘤导向诊断和治疗,肿瘤基因治疗和肿瘤疫苗方面应用研究进展做一综述。

^(125)I标记雄激素受体TFO抗前列腺癌细胞增殖的研究

目的探讨反基因放射治疗对雄激素受体(AR)表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法用 Iodogen 法对 AR 三螺旋形成寡核苷酸(TFO)进行直接^(125)I标记,经脂质体介导转染 LNCaP 前列腺癌细胞株,于转染后24和48 h 分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定癌细胞增殖活性,RT-PCR 方法检测 AR mRNA 表达,免疫组织化学方法检测 AR 蛋白表达。结果 ^(125)I-TFO 的标记率为63.7%,放化纯为95.6%,比活度为80.1 kBq/μg。相同 TFO 浓度下,^(125)I-TFO 组 LNCaP 细胞的 AR表达水平显著低于 TFO 组(P<0.01),^(125)I-TFO 对 LNCaP 细胞增殖的抑制率显著高于 TFO(P<0.01)。结论反基因放射治疗对 AR 表达和前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显强于单纯的反基因治疗。

反基因及反义寡核苷酸对人前列腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的探讨三螺旋形成寡核苷酸（TFO）和反义寡核苷酸（ASO）对人前列腺癌裸鼠移植瘤雄激素受体（AR）表达和肿瘤细胞生长的抑制作用。方法32只荷LNCaP-C4-2前列腺癌移植瘤裸鼠随机分成4组：TFO治疗组、ASO治疗组、序列对照寡核苷酸（SCO）非特异性对照组和阴性对照组。采用瘤内注射给药，寡核苷酸用量25mg／kg，隔天给药1次，共14次。观察裸鼠体重和肿瘤体积变化。测量移植瘤重量计算抑瘤率，放射免疫分析法检测裸鼠血清前列腺特异抗原（PSA）水平，RT-PCR方法检测肿瘤组织AR mRNA表达，免疫组化和放射配基结合分析方法检测AR蛋白表达。结果TFO和ASO均能有效抑制移植瘤生长，抑瘤率分别为67．55％和41.06％，与对照组相比差异有统计学意义（均P〈0．01）。TFO组的瘤重和肿瘤组织AR表达水平显著低于ASO组（均P〈0．05），TFO组动物血清PSA水平[（6．6±1．0）ng／ml]也显著低于ASO组[（19．8±3．7）ng／ml，P〈0．05]。结论TFO对前列腺癌裸鼠移植瘤AR表达和肿瘤生长的抑制作用强于ASO，具有较好的抗前列腺癌应用前景。