网络型多媒体CAI课件的特性及其在人体寄生虫学中的应用

目的探讨网络型多媒体课件在教学应用中的特性以及《人体寄生虫学》教学网页的制作方法。方法利用Dreamweaver4.0创作开发网页;用AdobePhotoshop6.0对图片进行优化处理;用Fireworks4.0和Flash5.0制作动画。结果制成了讲解《人体寄生虫学》中昆虫蛛形纲各虫种的网络型多媒体CAI课件,同时配有练习题和答疑以帮助学生复习。结论布局合理是网页设计的关键,其次还应注意文字排版、图片的应用和色彩的设计等。

寄生虫乳酸脱氢酶的研究进展

寄生虫的能量主要来源于无氧糖酵解，乳酸脱氢酶（LDH）是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸还原为乳酸及乳酸氧化为丙酮酸的可逆反应。对有关寄生虫LDH分子结构与功能的研究以及虫体药物实验的结果提示，寄生虫LDH是良好的诊断分子及潜在的药物作用靶标，吡喹酮、蒿甲醚等重要的抗寄生虫药物可能作用于该分子。此外，LDH也是研究分子进化较好的模式分子。

ScFv噬菌体抗体库技术研究进展及其在寄生虫学上的应用

随着蛋白组学时代的到来,对目的抗体的需求量的增加,噬菌体抗体库技术获得抗体的优越性得到充分发挥。该文主要介绍噬菌体抗体库技术的重要一种ScFv(单链抗体)噬菌体抗体库技术。从理想ScFv噬菌体抗体库的构建、可溶性表达、液体和固体筛选的优缺点及其在寄生虫学的应用等几个方面对此技术的研究进展作一综述。

寄生虫及其宿主协同进化的研究进展

该文对寄生虫及其宿主协同进化的相关概念、研究模型、研究方法、内在机制以及与免疫的相互关系进行了综述。

杆状病毒表达载体系统的特点及其在寄生虫学上的应用

杆状病毒载体表达系统使用一个或多个启动子 ,将外源目的基因插入到启动子下游 ,获得重组病毒 ,这种重组病毒在昆虫细胞或虫体内复制的同时 ,使外源基因得到表达。随着杆状病毒分子生物学和表达载体研究的不断深入 ,作为真核表达载体 ,该系统区别于其他表达系统的特点更为突出 ,主要表现在目的基因容量、表达效率、目的蛋白活性、可操作性。

Toll样受体与寄生原虫感染

Toll样受体为机体的一种模式识别受体,可识别外来病原体的结构成分以及病原相关的分子模式,提示外来病原体的存在,激发机体的天然免疫系统发挥抗感染作用,并影响机体获得性免疫的发生、发展。在寄生原虫的感染中,Toll样受体同样发挥着重要的作用。对Toll样受体和原虫感染关系的深入研究,将有助于原虫病的检测、预防和治疗。

杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体及其在医学中的应用

杆状病毒载体表达系统已被广泛用于在受纳昆虫细胞中大量表达外源蛋白。近年的研究发现 ,这种表达载体还可用来介导外源基因投送至各种哺乳动物细胞 ,并且通过哺乳动物启动子的驱动使外源蛋白得到高效稳定的表达 ,而其自身基因组并不复制和表达。同时 ,经过适当的修饰或预处理 ,杆状病毒表达载体还可介导外源基因在哺乳动物体内表达。由于这种载体的容量大 ,感染、表达效率高 ,生物安全性好 ,因而在基因治疗、疫苗开发、药物筛选等医学各领域具有广泛的应用前景。

日本血吸虫乳酸脱氢酶(SjLDH)结构与功能的生物信息学分析

目的应用生物信息学分析软件预测日本血吸虫乳酸脱氢酶(SjLDH)氨基酸序列的结构与功能。方法应用NCBI、Expasy等在线生物信息学网站及Vector NTI、PCgene等软件包分析SjLDH与其他物种的同源序列,进行多序列同源比对,分析相同的保守位点及催化活性位点,构建分子进化树;预测二级结构、拓扑结构;同源模建预测三级结构;预测主要抗原表位等。结果SjLDH与其他物种的同源序列含相同的保守位点及催化活性位点,与华支睾吸虫LDH(CsLDH)同源性最高为75%,与阴道毛滴虫LDH(TvLDH)同源性最低为17%,与人LDH(HsLDH-A,-B,-C)的同源性为58%～60%;SjLDH与果蝇(DmLDH)的进化距离较秀丽隐杆线虫(CeLDH)为近,3种人LDH中与HsLDH-B、-C的进化距离较HsLDH-A为近;该蛋白具有3个跨膜区域,3个高亲水性区域,主要的线性表位98aa￣106aa位于膜外,与原虫LDH相同区域差异显著,而与其他LDH有1～3个氨基酸的差异,关键催化位点之一及底物丙酮酸结合区域位于该区域,蛋白质同源模建分析表明该区域位于蛋白表面形成环状结构,3个关键催化位点位于该区域或在其附近。结论生物信息学预测结果提示LDH是研究物种分子进化理想的分子;SjLDH可能是免疫诊断、药物作用及疫苗潜在的靶分子。

棉子酚、吡喹酮、蒿甲醚对重组日本血吸虫乳酸脱氢酶的作用

目的检测棉子酚、吡喹酮、蒿甲醚对重组日本血吸虫乳酸脱氢酶(rSjLDH)活性的影响。方法在已建立的rSjLDH标准酶活性测定体系中分别加入不同浓度的棉子酚(0～0.10mmol/L)、吡喹酮(0～0.20mmol/L)及蒿甲醚(0～0.10mmol/L),以相应药物溶剂作对照,分光光度法测定药物对rSjLDH活性的影响。用SPSS13.0软件统计结果,计算药物对酶活性的相对抑制率。结果与对照组比较,0.04mmol/L棉子酚对rSjLDH催化丙酮酸还原为乳酸及乳酸氧化为丙酮酸的相对抑制率分别为59.1%和34.4%(P<0.01),0.10mmol/L棉子酚分别为91.3%和89.1%(P<0.01);0.06mmol/L吡喹酮分别为5.77%和41.4%(P<0.05),0.20mmol/L吡喹酮分别为83.8%和72.2%(P<0.01)。0.10mmol/L蒿甲醚对rSjLDH则无抑制作用(P>0.05)。结论棉子酚及吡喹酮对rSjLDH活性均有显著的抑制作用,SjLDH可能是吡喹酮的分子靶标之一。

广州市褐云玛瑙螺感染广州管圆线虫的调查分析

目的对广州市褐云玛瑙螺(Achatina fulica)感染广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)第Ⅲ期幼虫的情况进行调查和比较,填补广州市广州管圆线虫病的流行病学资料。方法分别于2000年7月和2004年7月对广州市天河区、海珠区和越秀区褐云玛瑙螺进行采样收集,消化法分离第Ⅲ期幼虫,计算感染率和感染度并与过去及国内其它地区进行比较,用灌胃法构建大鼠和小鼠动物模型,检测脑部和心肺晚期虫体。结果广州市褐云玛瑙螺广州管圆线虫感染率,2000年为44.2%(57/129),感染度401条/螺,而2004年为27.3%(33/121),感染度为72条/螺,2次感染率差异有显著性(χ2=7.5,P<0.01),各区褐云玛瑙螺的感染率差异较大,最高达65.9%。褐云玛瑙螺的感染率与其螺重呈正比。用分离的第Ⅲ期幼虫构建了小鼠和大鼠动物模型,分别从脑部和心肺检出较晚期虫体。结论广州市褐云玛瑙螺的广州管圆线虫感染率和感染度2004年较2000年有明显下降,2004年感染率低于曾发生过广州管圆线虫病暴发流行的地区;小鼠适于构建广州管圆线虫第Ⅳ、Ⅴ期模型,大鼠适于构建第Ⅴ期和成虫模型。

白蚊伊蚊经卵传递登革2型病毒的实验研究

目的证明白蚊伊蚊亲代能够经卵传递登革2型病毒给子代,并且在传递过程中病毒毒力呈逐渐增强趋势。方法采用套式PCR分批检测感染雌蚊的子一代至子四代卵内登革病毒结合C6/36细胞培养分离病毒及TCID50法滴定病毒滴度。结果白蚊伊蚊能经卵传递DEN-2,至少可传四代以上;且在传代中病毒毒力有增强的趋势。结论实验证明白蚊伊蚊对登革2型病毒有较大的媒介效能,且在维持登革病毒的自然循环中起重要作用。

华支睾吸虫成虫全长基因表达文库的构建和基因表达谱的建立

目的 获得尽可能多的华支睾吸虫UNIGENE及全长基因 ,建立成虫基因表达谱 ,为华支睾吸虫发育过程中基因表达的规律和功能基因组学研究奠定基础。方法 构建 pBluescriptⅡSK全长cDNA质粒文库 ,先对 5’端进行随机EST大量测序 ,生物信息分析后归并UNIGENE ,并对归并的结果进行了 3’端的序列测定 ,根据 3’端测序结果 ,再次进行UNI GENE归并 ,对能够拼接上的克隆进行了序列拼接。对预测为完整基因且未测通的序列 ,进行了引物设计 ,walking反应测序 ,将得到的UNIGENE用点样法制备基因芯片。结果 获得 5’端有效EST序列 4 0 6 6个 ,测序结果UNIGENE分析 ,归并获得1775个UNIGENE ,5’端预测的全长基因为 377个。共获得测通的cDNA序列 2 77个 ,其中全长基因 198个。目前制备的华支睾成虫基因表达谱芯片含有 1775个基因。结论 所构建的华支睾吸虫成虫全长cDNA文库质量较好 ,采用的技术路线获取全长基因建立基因表达谱的效率较高。

华支睾吸虫Rho GTPase样基因的识别、克隆表达与免疫鉴定

目的对新发现的华支睾吸虫(Clonorchissinensis)的RhoGTPase样基因进行克隆、表达和免疫学鉴定。方法将用生物信息学方法识别的华支睾吸虫cDNA质粒文库中的RhoGTPase样基因的完整编码序列(CDS)克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL21中用IPTG诱导表达。表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和蛋白印迹(Westernblotting)进行分析,并用镍离子金属螯合亲和层析柱进行纯化。结果华支睾吸虫的Rho GTPase样基因的完整阅读框含576个碱基,编码192个氨基酸,理论分子量为21.7kDa。PCR、双酶切及DNA测序的结果均表明重组质粒pET-30a(+)-RhoGTPase构建成功。SDS PAGE结果表明RhoGTPase基因在大肠埃希菌BL21中获得了高效表达,重组蛋白可被感染华支睾吸虫的猫血清识别,表明其具有免疫反应性。亲和层析获得了高纯度的蛋白。结论华支睾吸虫的RhoGTPase样基因可在原核系统中获得有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

血清白细胞介素-13、17与气道高反应性的关系

目的研究白细胞介素(IL)-13、IL-17与气道高反应性(AHR)的关系。方法对20例非急性发作期和缓解期哮喘患者、14例稳定期COPD患者、21例非急性发作期慢性支气管炎(CB)患者和10例正常参照者行气道激发试验。采用ELISA法测定四组受试者的血清IL-13和IL-17。结果伴有AHR的哮喘患者血清IL-13水平(53.62±8.85)pg/ml和COPD、CB患者血清IL-13水平(48.15±6.02)pg/ml均较正常人(39.99±5.95)pg/ml明显升高(P<0.05)。Spearman相关分析表明,IL-13与哮喘患者PC20FEV1呈负相关(r=-0.602,P<0.01),与COPD、CB患者PC20FEV1也呈负相关(r=-0.632,P<0.05)。哮喘患者血清IL-17水平(18.10±3.90)pg/ml较正常人(14.40±4.05)pg/ml显著升高(P<0.05);Spearman相关分析表明,IL-17与COPD、CB和哮喘患者PC20FEV1无显著相关性(P>0.05)。结论血清IL-13与哮喘、COPD、CB患者AHR的发生相关;而血清IL-17与AHR无明显相关性。

应用EST和电子克隆策略研究血吸虫表达基因谱

目的开展血吸虫表达基因谱的研究,寻找新的疫苗候选分子和药物靶标。方法应用表达序列标签(EST)和电子克隆策略。结果获得了552个EST序列和487个电子延伸序列,其中104个EST序列在延伸前未表现同源性,而延伸后表现出有意义的同源性;获得了日本血吸虫基因表达谱的信息以及发现了有潜在药物和疫苗价值的新基因序列。结论本研究为日本血吸虫基因表达谱的研究提供更有效的研究思路。

华支睾吸虫的一个μ型GST基因的表达、纯化与免疫反应性鉴定

【目的】扩增华支睾吸虫一个μ型谷胱甘肽移酶(mu-classglutathionetransferaseofClonorchissinen-sis,CsGSTM)基因,明确是否存在内含子,进行原核表达,纯化其表达产物,鉴定免疫反应性。【方法】用PCR方法从成虫cDNA文库和基因组中扩增出目的基因,测序,定向克隆到原核表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21/DE3表达,按照Ni-NTAagarose说明书纯化重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdode-cylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)、薄层色谱(thin-layerchromatography,TLC)和免疫印迹(Westernblotting)分析。【结果】CsGSTM基因全长657bp,没有内含子,构建的原核表达质粒pET-30a(+)-CsGSTM在大肠杆菌中得到了有效表达,Mr,pET-30a(+)-CsGSTM=31×103。重组蛋白达总蛋白的39%,纯化后的重组蛋白纯度为98%,重组蛋白在纯化前后均有免疫反应性。【结论】CsGSTM基因没有内含子,在大肠杆菌中能有效表达,纯化前后的重组蛋白都具有免疫反应性。

家蝇拟除虫菊酯抗药性的分子生物学监测

目的 建立一种可以早期检测昆虫拟除虫菊酯抗药性的方法 ,以利于抗药性的控制。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)方法 ,用自行设计的特异引物 ,对昆虫的钠离子通道基因进行扩增。结果 共检测敏感家蝇和溴氰菊酯抗性家蝇各 2 0只 ,在所有抗性家蝇的钠离子通道基因中均扩增出特定大小基因片段 ( 183bp) ,表明基因发生了抗性突变。而在所有敏感家蝇的钠通道基因中均未扩增出该基因片段 ,表明未发生基因突变。结论 PCR能够在短时间内完成对昆虫拟除虫菊酯抗性的检测 ,为早期监测昆虫对拟除虫菊酯的抗药性提供了快速可行的方法。