基于人和小鼠细胞共培养体系研究隧道纳米管

隧道纳米管(tunneling nanotubes, TNT)是一种新型的细胞间通讯连接方式。越来越多的证据显示,TNT参与小分子、病原体和部分细胞器等的细胞间传递,在细胞生理病理过程中发挥重要作用。本文将人和小鼠细胞共培养,利用激光显微成像技术对细胞间TNT的产生过程以及特征进行观察和分析。结果显示,在人和小鼠乳腺肿瘤细胞共培养体系中,同类细胞间可以形成TNT通讯结构,但是在人和小鼠细胞之间却没有。另外,在时间序列拍摄过程中发现,细胞间TNT倾向于细胞间指向性接触后形成,同时在人和小鼠活细胞共培养体系中会出现同类型细胞“汇聚”现象。因此细胞间TNT的形成可能是基于特异胞间信号诱导接触,并且只能在特定细胞间建立TNT通道连接。

基于激光共聚焦显微镜研究细胞核标识技术

本文利用激光扫描共聚焦显微镜研究实验室常用细胞核标记方法,对细胞成像相关实验技术进行进一步优化。首先用DNA荧光标记法、组蛋白荧光标记法以及微分干涉术(DIC)分别对贴壁培养的细胞进行成像;然后结合核仁蛋白标记和核内非编码RNA杂交标记对细胞核结构进行解析,进一步挖掘常规核染色标记所能带来的深度信息;最后针对实验平台日常细胞影像实验需求进行研究,对几类常用核标识技术的优势与不足进行讨论。基于影像实验数据,可以发现染色质相关荧光标记不仅仅可用于细胞核标识,其展示的核内染色质密度分布同时暗含了细胞核的亚结构信息,我们在此予以初步实验论述。另外,利用共聚焦DIC成像同样能清晰识别细胞核及其内部核仁结构,因而DIC在一定程度上与染色质荧光标记成像是等效的。总之,本文对常用几种细胞核标识技术进行了全面介绍,有望为细胞成像相关实验的研究与分析提供新的思路。

乳腺癌细胞休眠期至分裂间期染色质行为动力学特征分析

目的细胞周期失调会导致基因组不稳定、引起细胞恶性转化和癌变。本研究通过分析乳腺癌细胞休眠期(G0期)至分裂间期细胞染色质动态行为特征,为进一步研究癌细胞周期调控提供一定的实验参考。方法以小鼠乳腺癌4T1细胞为研究对象,利用DNA标记物和组蛋白相关荧光标记观察细胞染色质形态及其在细胞周期中的动态变化特征,通过激光共聚焦显微镜进行记录和分析。结果实验证实DAPI信号和GFP-H2B信号有比较好的共定位,两者均可以有效标记染色质。在细胞由G0期至分裂间期过程中,起始时可以观察到有大体积荧光标记斑块,在其中有多个着丝粒卫星DNA原位杂交斑点,而在1 h时荧光斑块逐步解离为小颗粒斑块甚至消失,到1 h 40 min时荧光标记斑块会再次出现,其体积显著小于观察起始,并规律性排布于核仁外周和核膜内侧。结论G0期乳腺癌细胞中染色质间存在聚集现象,这种聚集可能与着丝粒卫星DNA的作用相关。细胞在增值信号刺激下进入细胞周期时,染色质聚集体会逐步解聚并消失,在染色质完成复制并高度压缩形成染色体后,进一步分裂到两个子细胞。