HIF-1α基因沉默对大鼠肝癌CBRH-7919细胞p27和Ki67表达的影响

目的:探讨沉默缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)基因对大鼠肝癌CBRH-7919细胞在缺氧状态下p27和Ki67表达的影响。方法:选用大鼠肝癌细胞株CBRH-7919作为研究对象,利用氯化钻(CoCl2)模拟缺氧状态。构建HIF-1αsiRNA特异性载体,利用小分子RNA干扰技术沉默肝癌细胞HIF-1α基因。应用real-time RT-PCR和Western blotting方法分别检测肝癌细胞HIF-1αmRNA和蛋白的表达变化,用Western blotting方法检测肝癌细胞p27和Ki67蛋白的表达变化。应用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果:在缺氧条件下,肝癌细胞HIF-1αmRNA及蛋白表达显著增多(P<0.05)。HIF-1α基因被沉默后,HIF-1αmR-NA和蛋白表达以及Ki67蛋白表达量明显减少(P<0.05),p27蛋白表达量显著增多(P<0.05)。转染组G0/G1期的肝癌细胞数量明显多于对照组,S期细胞显著减少(P<0.05)。结论:缺氧可以诱导肝癌细胞HIF-1α的表达;特异性siRNA沉默HIF-1α,可能通过促进p27的表达和抑制Ki67的表达,在一定程度上抑制了肝癌细胞的增殖。

沉默HIF-1α基因表达对大鼠肝癌细胞增殖的影响

目的:探讨沉默缺氧诱导因子1α(HIF-1α)基因表达对缺氧状态下肝癌细胞增殖的影响。方法:选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钴(CoCl2)建立缺氧模型。制备3组特异性较强的HIF-1αsiRNA-脂质体复合物,转染于肝癌细胞。利用real-time RT-PCR、Western blotting等方法分别检测肝癌细胞HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、p21和cyclin D1在mRNA和(或)蛋白水平的表达。MTT及BrdU掺入实验检测细胞增殖的变化。结果:缺氧条件下,肝癌细胞的HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达显著增多(P<0.05)。HIF-1α基因表达沉默后,HIF-1α、VEGF及cyclin D1 mRNA和(或)蛋白表达明显减少(P<0.05),p21蛋白表达明显增加(P<0.05)。HIF-1αsiRNA转染组的BrdU阳性细胞比例明显少于对照组(P<0.05)。结论:沉默HIF-1α基因表达对缺氧状态下肝癌细胞的增殖有显著抑制作用。

人骨髓间充质干细胞对放射损伤小鼠造血恢复的影响

本研究旨在探讨人骨髓间充质干细胞(hBMMSC)对受γ射线照射小鼠造血恢复的影响。亚致死剂量(6Gy)60Co-γ射线全身照射雌性BALb/c小鼠,静脉输注不同剂量(1×105,1×106和5×106)的hBMMSC,观察注射后小鼠血常规指标、骨髓造血祖细胞集落量以及血清人TPO,SCF和G-CSF水平等动态变化。结果表明:hBMMSC输注对亚致死量照射小鼠早期死亡率无影响;与对照组比较,接受细胞治疗小鼠早期血象水平无显著增高,但在第28天外周血白细胞、红细胞、血小板计数和血红蛋白水平高于对照组,尤以大剂量组明显(P值均小于0.05);在中剂量和大剂量hBMMSC组小鼠骨髓中,单个核细胞集落形成单位总数和粒单系集落形成单位数均高于对照组(P<0.05);hBMMSC输注后第2天,ELISA法检测可在细胞治疗组小鼠血清中检测到人G-CSF和SCF,以hBMMSC高剂量组G-CSF含量为最高(P<0.01)。所有各组未检测到人TPO,治疗后第9和16天所有各组血清中均未检测到人G-CSF和SCF。结论:hBMMSC输注可加速放射损伤小鼠造血功能的恢复,其机制可能与细胞短暂分泌相关造血细胞调控因子有关。

系统性红斑狼疮患者286例凝血功能的改变及相关因素分析

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者凝血功能的改变及其相关因素分析。方法:回顾性分析286例SLE患者的临床资料及实验室检查指标。结果:286例SLE患者中血小板正常患者占75.5%(215/286),减少患者占14.0%(40/286);239例患者检测了aCL(IgG、IgM、IgA一型或两型阳性),aCL阳性占25.1%(60/239),aCL阳性组的血小板计数、APTT、FIB、PT、TT、3P试验、FDP、D-D与aCL阴性组比较差异无统计学意义(P>0.05);SLE伴高LDL-C组血小板计数、APTT、PT、TT与LDL-C正常组比较差异有统计学意义(P<0.05),FIB、3P试验、FDP、D-D与LDL-C正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:aCL阳性对SLE患者的凝血功能和纤溶指标无明显影响;SLE伴发LDL-C增高的患者血小板计数较高、APTT、PT时间缩短,但纤溶指标无明显改变。

杀菌通透性增加蛋白体外抑制革兰阴性细菌脂多糖激活血小板的作用

本研究旨在探索杀菌通透性增加蛋白(bactericidal permeability-increasing protein,BPI)能否抑制G-细菌脂多糖(LPS)激活血小板的作用。取10例健康体检者全血制备富含血小板血浆(PRP,1×108/ml)。实验分为4组:正常血小板组:不作任何处理;LPS组:LPS(10μg/ml)刺激6 h;BPI组:BPI(100μg/ml)处理1 h;BPI+LPS组:BPI(100μg/ml)预孵育1 h后,再接受LPS(10μg/ml)刺激6 h。应用流式细胞术(FCM)检测各组血小板膜Toll样受体-4(TLR-4)的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定PRP上清中细胞因子释放水平,包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)。结果表明,与正常血小板组相比,LPS刺激血小板后血小板膜TLR-4表达及上清中TNF-α和IL-6浓度均明显增高(P<0.001)。在接受BPI预处理后,LPS刺激血小板表达TLR-4及TNF-α和IL-6的作用明显下降,但仍高于正常血小板组。BPI单独刺激血小板不引起血小板TLR-4表达增高及细胞因子水平改变。结论:BPI能够抑制LPS诱导的血小板活化。

NK细胞对骨髓瘤RPMI 8226细胞的体外杀伤活性

目的:探讨NK细胞对骨髓瘤RPMI 8226细胞的体外杀伤活性。方法:分离纯化NK细胞,LDH法检测不同效靶比时NK细胞对RPMI8226细胞的杀伤活性,并以K562细胞为对照。同时用甲基纤维素克隆形成试验观察效靶比为20:1时细胞克隆形成率。结果:NK细胞对K562、RPMI 8226细胞的杀伤活性随着效靶比升高而增强,在同一效靶比,NK细胞对K562、RPMI8226细胞的杀伤活性组间比较差异均有统计学意义。NK细胞对K562细胞克隆形成抑制率为(63.48±6.78)%,对RPMI 8226细胞克隆形成抑制率为(23.71±2.39)%,差异有显著统计学意义。结论:NK细胞可杀伤骨髓瘤RPMI 8226细胞,但为低度敏感。

血小板与细菌感染

血小板除了维持止血功能外，还保留了原始炎症细胞的一些特性，它不但能够借助其表面多种受体对病原体进行识别，还能通过血小板一细菌、血小板一粒细胞及血小板一内皮细胞间的相互作用，直接或间接地参与炎症反应。

纤维连接蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及其与预后的关系

近年来，纤维连接蛋白（fibronectin，FN）在淋巴瘤组织中的表达及其与预后的相关性逐渐引起国外学者的关注．但国内相关研究较少。本研究旨在探讨FN的表达与弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）短期复发的相关性，以期为临床个体化治疗提供指导，现报道如下。

血管内皮生长因子在索拉非尼治疗原发性和转移性肝癌的表达及意义

目的观察比较索拉非尼对原发性和转移性肝癌的临床治疗效果。方法 90例经过诊断的肝癌患者,将其分为原发性肝癌治疗组,转移性肝癌治疗组。其中原发性肝癌治疗组患者35例,转移性肝癌治疗组患者55例,两组患者均给予索拉非尼400 mg/次,bid,连续服用2个疗程。比较两组患者血清中平均血管内皮生长因子、血小板衍生因子的含量和不良反应发生率。结果经过2个疗程的索拉非尼治疗后,原发性肝癌治疗组患者血管内皮生长因子、血小板衍生因子含量较治疗前比较明显降低,与治疗前比差异有统计学意义(P<0.05),两组间比较差异没有统计学意义(P>0.05)。原发性肝癌治疗组患者不良反应发生率17.1%;转移性肝癌治疗组患者不良反应发生率18.9%,两组患者给予索拉非尼临床治疗后不良反应发生率比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。结论索拉非尼在治疗原发性肝癌和转移性肝癌的过程中,可以减少血清内血管内皮生长因子、血小板衍生因子,药物不良反应发生率没有显著性差异,可以实现相同的治疗效果,达到缓解病情,抑制肿瘤生长的目的 。

人骨髓间充质干细胞输注对辐射损伤小鼠造血器官的保护作用

本研究探讨人骨髓间充质干细胞(MSC)对辐射损伤小鼠造血器官的保护作用。培养人骨髓MSC,并进行细胞学鉴定。BALB/c雌性小鼠经6 Gy60Coγ射线照射后,分别通过尾静脉注射不同剂量的人MSC、MSC裂解物或等体积生理盐水。每天记录小鼠存活情况,并于处理后的第9天和16天取小鼠股骨和脾脏进行病理学分析,观察造血组织容量,并进行细胞增生程度评分。结果表明,与对照组比较,MSC及细胞裂解物处理组小鼠生存期无明显延长,但第9天高剂量(5×106)MSC及裂解物组小鼠骨髓造血即部分恢复,造血组织容量显著改善,(43.50±12.08)%和(42.80±13.11)%vs(24.33±9.50)%(P<0.05),增生程度积分明显增高(P<0.05),脾脏出现增生结节。第16天高剂量MSC和裂解物处理组小鼠骨髓和脾脏细胞明显活跃,脾脏和骨髓结构接近正常小鼠。此外,两个时间点MSC与细胞裂解物处理组小鼠骨髓增生积分无明显差异。结论:骨髓MSC可促进辐射损伤小鼠的造血功能恢复,这种作用可能与细胞内固有的活性物质有关。

系统性红斑狼疮并血栓病28例临床分析

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)血栓形成的危险因素。方法:回顾性分析SLE并血栓病28例的临床资料。结果:28例中男6例,女22例,男女之比为1:3.7;平均年龄(42.7±13.5)岁;平均病程(7.5±8.6)年;单因素分析显示:SLE-DAI、aCL、LDL-C、年龄、病程、男性、吸烟为血栓病的危险因素(P<0.05);多因素分析显示:病程、aCL、SLE-DAI是血栓病独立的危险因素(P<0.05)。结论:SLE患者的病程长、aCL阳性、SLE-DAI≥10分是合并血栓性疾病的独立危险因素。

丙戊酸对HL-60/HT细胞耐药性的影响

目的探讨丙戊酸(VPA)对耐三尖杉酯碱的HL-60细胞(HL-60/HT)耐药性的影响。方法选择递增压力培养法建立HL-60/HT细胞株。分为三组,Ara-C组、VPA组、VPA+Ara-C组,采用MTT法测定使用各组药物后敏感细胞、耐药细胞增殖情况的变化,同时测定丙戊酸对HL-60/HT细胞耐药性的改变,用流式细胞仪检测敏感的HL-60细胞及HL-60/HT细胞的细胞周期。结果丙戊酸与Ara-C合用可明显抑制HL-60、HL-60/HT细胞生长,抑制率高于丙戊酸或Ara-C单独的作用(q=1.37、1.51)。结论丙戊酸能够抑制HL-60、HL-60/HT细胞生长,可与Ara-C发挥协同作用,降低白血病细胞的耐药性。

丙戊酸对HL-60/HT细胞P27^(Kip1)、P170表达水平的影响

目的了解丙戊酸对HL-60/HT细胞P27^(Kip1)的影响。方法建立白血病耐药细胞株HL-60/HT,MTT法检查丙戊酸作用前后细胞增殖情况及对Ara-c耐药性的改变,流式细胞仪检测HL-60、HL-60/HT细胞P27^(Kip1)、P170的表达。结果 VPA能增加HL-60、HL-60/HT细胞P27^(Kip1)的表达水平(P<0.05),而不影响P170的表达(P>0.05);Ara-c不能影响HL-60、HL-60/HT细胞的P27^(Kip1)、P170的表达(P>0.05);VPA与Ara-C联用能增加HL-60、HL-60/HT细胞P27^(Kip1)的表达水平(P<0.05),不影响P170的表达(P>0.05)。结论 HL-60/HT细胞P27^(Kip1)低于HL-60,丙戊酸能增加HL-60/HT细胞P27^(Kip1)的表达。

选择性bcl-2抑制剂——维奈托克在血液肿瘤中的应用

抵抗细胞凋亡是许多血液肿瘤的关键致癌机制。bcl-2是内源性细胞凋亡通路的重要抗凋亡蛋白,因此靶向抑制bcl-2成为目前抗血液肿瘤的研究热点之一。维奈托克(venetoclax)是一种选择性bcl-2抑制剂,现已被用于治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性髓系白血病(AML)和套细胞淋巴瘤(MCL)。文章综述了bcl-2家族在调节细胞凋亡中的作用,以及维奈托克在相关血液肿瘤中的应用进展。

HIF-1α基因干扰对大鼠CBRH-7919肝癌细胞HIF-1α与VEGF表达影响的研究

目的:探讨沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对肝癌细胞在缺氧状态下表达HIF-1α及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钴(CoCl2)模拟缺氧状态,构建3组特异性较强的HIF-1αsiRNA表达载体,采用小分子RNA干扰技术沉默细胞HIF-1α的基因表达,分别利用real timeRT-PCR和蛋白质印迹法检测肝癌细胞HIF-1α和VEGF在mRNA及蛋白水平的表达变化。结果:在不同浓度CoCl2模拟缺氧条件下,随着CoCl2浓度的增高及时间的推移,肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达(mRNA及蛋白水平)较常氧对照组(0μmol/L CoCl2)显著增多,差异均有统计学意义,P<0.05。应用3组不同HIF-1α和siRNA表达载体转染缺氧条件下的肝癌细胞后,细胞的HIF-1α和VEGF的基因(mRNA)表达量与未转染HIF-1αsiRNA表达载体对照组相比较明显减少,同步检测两者的蛋白表达亦明显减少,与对照组差异均有统计学意义,P<0.05。结论:缺氧可以诱导肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达,siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下诱导的VEGF表达。

HIF-1α基因表达沉默对肝癌细胞PI3K/AKT信号转导通路影响的研究

目的:探讨沉默缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因表达对肝癌细胞PI3K/AKT信号转导通路的影响。方法:选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钻(CoCl2)建立厌氧模型。构建HIF-1α小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性载体复合物,小分子RNA干扰技术沉默肝癌细胞HIF-1α的基因表达,分别利用RT-PCR和免疫印迹法检测肝癌细胞HIF-1α、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、磷酸化AKT(p-AKT)、AKT和PI3K在mRNA和(或)蛋白水平的表达变化。结果:肝癌细胞在缺氧条件下表达HIF-1α较常氧对照组显著增多,差异具有统计学意义,PmRNA=0.002,P蛋白=0.003。特异性HIF-1αsiRNA表达载体转染肝癌细胞后,肝癌细胞HIF-1α(PmRNA和P蛋白均<0.001)、VEGF(PmRNA=0.001,P蛋白<0.001)和p-AKT(P蛋白<0.001)的表达明显减少;AKT和PI3K的表达显著增多,与对照组的差异均具有统计学意义,P蛋白值分别为0.032和0.020。结论:特异性siRNA干扰沉默HIF-1α基因表达可抑制肝癌细胞PI3K/AKT信号转导通路的激活。

白塞病患者骨髓穿刺术后并发髂部皮肤溃疡的护理

总结2例白塞病患者骨髓穿刺术后并发髂部大面积皮肤溃疡创面的护理。针对皮肤溃疡发生的原因,根据湿性愈合理论,运用现代敷料,如银离子敷料、水凝胶敷料、亲水性纤维敷料、水胶体敷料等,联合简易密闭式负压吸引对创面进行处理,同时积极进行病因治疗,有效控制感染及清除坏死组织,减轻患者的疼痛,促进创面愈合。

骨髓瘤RPMI 8226细胞体外逃逸NK细胞免疫杀伤机制的初步研究

目的:探讨骨髓瘤细胞RPMI 8266逃逸NK细胞免疫杀伤的机制。方法:流式细胞仪检测K562和8266细胞表面MICA/B、ULBP1～3和HLA-Ⅰ类分子的表达。4hLDH释放法测定效靶比20∶1时阻断前后NK细胞对2种细胞杀伤活性变化。观察效靶比20∶1时NK细胞对药物处理后RPMI 8226细胞杀伤活性变化、RPMI 8226细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子的表达及NK细胞对RPMI 8266细胞的克隆形成率的影响。结果:K562细胞高表达MICA/B和ULBP 1～3分子;RPMI 8266细胞表达HLA-Ⅰ类分子,2株细胞NKG2D配体表达差异有统计学意义,P<0.001。单抗分别阻断MICA/B、ULBP 1～3分子后,效靶比为20∶1时NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,P值均<0.05;对RPMI 8266细胞的杀伤活性基本无变化,P值均>0.05。抗W6/32单抗封闭8266细胞表面HLA-Ⅰ类分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性无上升(P=0.721),而对RPMI 8266细胞的杀伤活性上升,P=0.000。1/2IC50的三氧化二砷处理后RPMI8226细胞ULBP2、3配体升高(P=0.000),NK细胞对8266细胞的杀伤活性与对照组相比差异有统计学意义,P=0.001;1/2IC50硼替佐米处理后RPMI 8226细胞表面各NKG2D配体无变化,P>0.05。NK细胞对K562细胞克隆形成抑制率为(63.48±6.78)%,对RPMI 8226细胞为(23.71±2.39)%,P=0.000。结论:RPMI8266细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制可能与该细胞高表达HLA-Ⅰ类分子,低表达NKG2D的配体MICA/B和ULBP1～3分子有关。

地中海贫血的诊断

地中海贫血（珠蛋白生成障碍性贫血）是因早年发现的病例多属地中海沿岸民族故而命名,该病患者由于遗传的珠蛋白基因缺陷,致使血红蛋白中一种或多种珠蛋白链合成不足或缺如,导致无效红细胞生成、溶血,该病理状态又称＂珠蛋白生成障碍性贫血＂。由于基因缺陷的复杂多样（异质性）,导致缺乏的珠蛋白链的类型和数量不同,因此患者的临床表现也不尽相同,轻者可能终生无症状,重者胎儿期就可死于宫内。

系统性红斑狼疮致凝血因子Ⅺ活性减低一例

患者女，34岁。因反复皮下淤斑、面部红斑5年，淤斑加重1周于2010年7月14日入我院风湿科。患者5年前无明显诱因出现面部红斑、皮下淤斑（以四肢皮肤为多）、光过敏、脱发及双膝关节疼痛，