体外药敏实验指导下的乳腺癌术后辅助化疗

【目的】观察乳腺癌组织对常用的化疗药物的敏感程度,乳腺癌患者的临床及病理情况与肿瘤组织的体外药物敏感性是否相关,并根据药敏结果,制订出术后化疗方案,并与经验化疗方案作随机对照,观察能否提高生存率。【方法】1996年3月至2001年9月在中山大学肿瘤医院胸外科治疗的108例乳腺癌患者被随机分为体外药敏实验组52例和经验对照组56例。实验组病人的术后肿瘤标本行四唑蓝快速比色(MTT)法体外药敏实验,并在术后根据结果选择敏感药物组成方案进行化疗,对照组病人不行体外药敏实验,按经验选择化疗方案。体外药敏实验采用滤纸支持组织块培养、MTT 染色图像分析作终点测定的方法,测定选择阿霉素(ADM),5-氟尿嘧啶(5-FU),长春新碱(VCR),丝裂霉素 C(MMC),长春碱酰胺(VDS),顺铂(DDP),鬼臼乙叉甙(VP-16),博莱霉素(BLM),噻替派(TSPA),甲氨喋呤(MTX)10种化疗药物对乳腺癌组织的抑制率,并对两组的患者进行生存分析。【结果】在 MTT 体外药敏实验中,ADM,MMC,VDS,DDP,TSPA,MTX 对肿瘤组织的平均抑制率均>30%,优于5-FU,VCR,VP-16和 BLM。乳腺癌患者不同的月经状态、雌激素受体(ER)状态、孕激素受体(PR)状态、腋窝淋巴结状态、临床分期和病理类型与乳腺癌组织在体外对化疗药物的敏感性无明显关系。在生存分析中,实验组3年总生存率为83%,对照组为71%,两组比较无显著性差异(P>0.05)。【结论】在 MTT 体外药敏实验中,ADM,MMC,VDS,DDP,TSPA,MTX 为比较敏感的药物。乳腺癌患者不同的临床和病理情况与乳腺癌组织在体外对化疗药物的敏感性无明显关系。体外药敏实验组的3年总生存率与经验对照组相比未发现明显的优势,需要更长时间的随访观察及更深入的研究。

树突状细胞诱导的CIK细胞对肺癌生长的抑制作用

目的探讨树突状细胞诱导的CIK细胞对肺癌移植瘤细胞生长的抑制作用。方法建立肺癌皮下移植瘤模型;分离患者外周血单个核细胞,培养成熟的DC及CIK细胞;用反复冻融肺癌组织的方法制备肿瘤细胞裂解物并负载DC,诱导DC-CIK细胞;进行肺癌移植瘤内注射,比较两组裸鼠移植瘤体积及重量,观察其抑瘤情况。结果 DC-CIK细胞对肺癌皮下移植瘤细胞的抑制率为70.3%,抑制作用明显强于DC或CIK细胞的抑制作用(P<0.05)。结论树突状细胞诱导的CIK细胞能够有效抑制肺癌移植瘤生长。

ⅢB期结肠癌组织中高迁移率族蛋白1的表达及其临床意义

目的探讨ⅢB期结肠癌组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达与淋巴细胞浸润的关系及其临床意义。方法收集1999年1月-2002年5月在中山大学肿瘤防治中心行手术切除的72例ⅢB期结肠癌标本,采用免疫组织化学染色及免疫双染技术分析HMGB1的表达和淋巴细胞浸润情况。收集2009年8-10月接受手术的10例Ⅲ期结肠癌患者的新鲜组织标本,采用流式细胞术分析组织中CD3+、CD45RO+T细胞的比例。分析HMGB1表达水平、表达部位与淋巴细胞浸润的关系及其与患者5年生存率的相关性。以72例ⅢB期结肠癌患者的5年生存率作为因变量,以各项临床特征、结肠癌组织HMGB1表达水平和表达部位、CD3+和CD45RO+T细胞的浸润密度等作为自变量,采用Cox比例风险回归模型筛选影响预后的独立危险因素。结果ⅢB期结肠癌组织间质中可见不同程度CD3+、CD45RO+T细胞浸润,CD3和CD45RO均表达于细胞膜。流式细胞术分析可见,72%的CD45RO+细胞同时表达CD3。ⅢB期结肠癌组织HMGB1的表达率为90.3%(65/72),其中81.5%(53/65)为核型表达(仅表达在细胞核),18.5%(12/65)为核质共表达。核型HMGB1表达者的CD45RO+T细胞浸润密度高于核质共表达者。ⅢB期结肠癌组织中CD45RO+T细胞的浸润密度是影响患者生存的独立危险因素;HMGB1表达强度和表达部位与患者预后无关,但随访24个月以后,HMGB1核型表达者的5年生存率明显高于HMGB1核质共表达者(P<0.001)。结论ⅢB期结肠癌患者出现HMGB1核质共表达时组织中淋巴细胞的浸润减少,患者长期生存率降低,提示HMGB1表达方式可作为反映局部晚期结肠癌患者预后的标志之一。

重组人血管内皮抑素腺病毒对人癌裸小鼠移植瘤的抑制作用

目的 观察重组人血管内皮抑素腺病毒 (Ad/hEndo)在体内、体外的表达效率 ,以及对裸鼠移植瘤肿瘤血管生成的影响。方法 携带人血管内皮抑素基因的新型重组腺病毒 (Ad/hEndo)及携带β 半乳糖苷酶基因 (LacZ基因 )的重组腺病毒 (Ad/LacZ)为自行构建。Ad/hEndo组 (7只 )瘤内注射 1× 10 9空斑形成单位 (pfu)的Ad/hEndo 10 0 μl,Ad/LacZ注射组 (6只 )瘤内注射 1× 10 9pfu的Ad/LacZ注射 10 0 μl,DMEM液注射组 (5只 )瘤内注射DMEM液 10 0 μl,共注射 5次。人鼻咽癌 (CNE 2 )和人脐静脉内皮细胞 (ECV30 4细胞 )被Ad/hEndo感染后 ,Western印迹和免疫酶联吸附法 (ELISA)检测人血管内皮抑素蛋白的表达。CNE 2细胞株移植到裸鼠背脊部后 ,检测Ad/hEndo对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用 ,微血管密度计数 (microvesseldensity ,MVD)分析Ad/hEndo对肿瘤血管生成的影响。结果 Western印迹和ELISA法检测到人血管内皮抑素基因在CNE 2和ECV30 4细胞高效表达。当感染复数 (MOI)为 2 0pfu/细胞时 ,感染 72h后细胞培养上清中人血管内皮抑素蛋白浓度达 5 88 34ng/ml。Ad/hEndo可明显抑制鼻咽癌CNE 2裸鼠移植瘤生长 ,抑瘤率为 4 6 4 3% (Ad/hEndo治疗组对腺病毒携带基因LacZ注射组 ,t=2 2 2 6 ,P <0 0 5 )和 4 9 70 % (

鼻咽癌患者外周血全基因组表达谱芯片结果初步分析

目的:从外周血水平比较健康对照者及鼻咽癌患者的外周血基因表达谱差异,寻找新的mRNA分子标志。方法:选取20例鼻咽癌患者和20名健康对照者进入本研究,两组性别、年龄基本匹配。采用QIAGENRNeasy○RMini Kit分离纯化外周血mRNA,行Agilent人类全基因寡核苷酸芯片检测。利用Gene Spring 10.0软件采用t-test une-qual unpaired算法,计算P<0.05时的差异基因并按差异倍数排序。利用Gene spring软件及DAVID Bioinformatics Resources 6.7对前期筛选的差异基因进行聚类分析,GO分析、Pathway分析,分析差异基因功能分类及相关通路。结果:差异倍数≥1.5倍且P<0.05的包含1 257个探针(上调687个,下调570个);差异倍数≥2.0倍的包含171个探针(上调132个,下调39个)。差异基因主要与细胞周期、免疫反应及对病毒的反应等生物学过程有关;主要参与肿瘤信号通路、细胞周期通路和p53信号通路等。结论:用全基因组表达谱芯片可以筛选出鼻咽癌患者与健康对照者外周血中的差异表达基因,进一步筛选这些基因可能寻找到鼻咽癌诊断相关的mRNA分子标志。