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家蝇泛素编码区cDNA序列的克隆及在原核细胞中的表达
被引量:
9
1
作者
金丰良
许小霞
+1 位作者
张文庆
任顺祥
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期473-479,共7页
泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway)是具有高度选择性的蛋白质降解途径,该途径对细胞内蛋白的选择性降解起着重要作用。本研究根据GenBank已登录的真核生物泛素(ubiquitin)编码框的氨基酸序列,设计一对简并引物,RT-PCR克...
泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway)是具有高度选择性的蛋白质降解途径,该途径对细胞内蛋白的选择性降解起着重要作用。本研究根据GenBank已登录的真核生物泛素(ubiquitin)编码框的氨基酸序列,设计一对简并引物,RT-PCR克隆了家蝇Musca domestica泛素基因的编码区cDNA序列,并进行了测序。序列分析表明,该编码区的长度为228bp,编码76个氨基酸,命名为Mdubi,GenBank登录号为DQ115796。同源性比较发现,Mdubi氨基酸序列与其他真核生物泛素编码框同源性可达94%以上。RT-PCR检测表明,Mdubi在家蝇不同组织中均高效表达,且不受大肠杆菌Escherichia coli刺激的影响,是遍在性表达。为进一步研究Mdubi的结构和功能,将Mdubi克隆到原核表达载体pQE30上,构建重组质粒pQE30-UBI,转化大肠杆菌M15感受态细胞,在IPTG诱导下进行了高效表达,SDS-PAGE检测表明Mdubi在大肠杆菌中可表达相对分子质量为9.6kD的可溶性融合蛋白;Western blot分析表明表达产物能与Ni-NTA鏊合物特异性的结合,表明表达的Mdubi为N端带有6His标签的融合蛋白。利用Ni2+-NTA亲和柱一步纯化了Mdubi,以该融合蛋白免疫新西兰大白兔制备了抗Mdubi血清。本研究成功克隆了家蝇泛素的编码序列,并在原核细胞中得到了表达,为进一步研究泛素在家蝇体内的作用机制奠定了基础。
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关键词
家蝇
泛素
克隆
原核表达
抗血清
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职称材料
题名
家蝇泛素编码区cDNA序列的克隆及在原核细胞中的表达
被引量:
9
1
作者
金丰良
许小霞
张文庆
任顺祥
机构
华南农业
大学
资源
环境学院
昆虫学
系/教育部
生物
防治工程中心
中山大学昆虫学研究所/有害生物控制与资源利用国家重点实验室
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期473-479,共7页
基金
国家重点基础研究发展规划(“973”计划)项目(2006CB102005)
国家“十五”攻关项目(2004BA509B0604)
文摘
泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway)是具有高度选择性的蛋白质降解途径,该途径对细胞内蛋白的选择性降解起着重要作用。本研究根据GenBank已登录的真核生物泛素(ubiquitin)编码框的氨基酸序列,设计一对简并引物,RT-PCR克隆了家蝇Musca domestica泛素基因的编码区cDNA序列,并进行了测序。序列分析表明,该编码区的长度为228bp,编码76个氨基酸,命名为Mdubi,GenBank登录号为DQ115796。同源性比较发现,Mdubi氨基酸序列与其他真核生物泛素编码框同源性可达94%以上。RT-PCR检测表明,Mdubi在家蝇不同组织中均高效表达,且不受大肠杆菌Escherichia coli刺激的影响,是遍在性表达。为进一步研究Mdubi的结构和功能,将Mdubi克隆到原核表达载体pQE30上,构建重组质粒pQE30-UBI,转化大肠杆菌M15感受态细胞,在IPTG诱导下进行了高效表达,SDS-PAGE检测表明Mdubi在大肠杆菌中可表达相对分子质量为9.6kD的可溶性融合蛋白;Western blot分析表明表达产物能与Ni-NTA鏊合物特异性的结合,表明表达的Mdubi为N端带有6His标签的融合蛋白。利用Ni2+-NTA亲和柱一步纯化了Mdubi,以该融合蛋白免疫新西兰大白兔制备了抗Mdubi血清。本研究成功克隆了家蝇泛素的编码序列,并在原核细胞中得到了表达,为进一步研究泛素在家蝇体内的作用机制奠定了基础。
关键词
家蝇
泛素
克隆
原核表达
抗血清
Keywords
Musca domestica
ubiquitin
cloning
prokaryotic expression
antiserum
分类号
Q966 [生物学—昆虫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
家蝇泛素编码区cDNA序列的克隆及在原核细胞中的表达
金丰良
许小霞
张文庆
任顺祥
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
9
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