大蒜素诱导人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的研究

【目的】探讨大蒜素对人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的影响。【方法】MTT法检测大蒜素对BIU87细胞生长的影响;倒置显微镜、TUNEL法观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化;半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2,bax,caspase-3mRNA表达的变化,比色法测定caspase-3活性变化。【结果】大蒜素能明显抑制BIU87细胞的生长,与大蒜素的浓度和作用时间有关,5mg/L大蒜素作用5d可以杀死50%以上的细胞;可诱导BIU87细胞凋亡,细胞周期阻滞在S-和G2期;凋亡相关基因bcl-2表达减少,bax无明显变化,caspase-3表达及活性增高。【结论】诱导细胞凋亡是大蒜素发挥抗瘤效果的一种重要机制;凋亡发生可能与细胞周期阻滞、bcl-2和caspase-3基因表达及活性变化有关。

某院2008～2012年儿科血培养病原菌变迁及耐药谱分析

目的了解近年来儿童血流性感染的病原体构成变化和药敏情况,以指导临床治疗。方法回顾性分析中山大学附属第一医院2008年1月至2012年12月从儿童血液标本中培养出的病原体资料,用WHONET5.6软件分析病原体的构成情况及其药敏情况。结果共培养出病原菌312株,革兰阳性菌122株;革兰阴性菌190株,其中肺炎克雷伯菌比例最大(25.96%)。所有血培养阳性标本主要来自儿科血液病区患者,占51.60%。革兰阳性菌主要对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺敏感,而革兰阴性菌对碳青霉烯类抗菌药物敏感,对常用抗菌药物如氨苄西林、头孢菌素等存在广泛的耐药。结论该院儿科血流性感染的病原体构成以革兰阴性菌占优势,致病细菌对青霉素类及头孢类抗菌药物存在较高耐药性,临床上应合理应用抗菌药物,根据药敏结果选择药物,减少耐药的出现。

尿红细胞位相检测在肾脏疾病鉴别诊断中的应用

目的探讨尿红细胞位相检查对血尿原因鉴别诊断的临床意义。以尿红细胞>8 000个/ml,其中畸形红细胞>70%;Gl红细胞≥5%,作为肾小球性血尿的诊断标准,评估其准确性及临床应用价值。方法研究238例血尿患者,其中120例(经肾活检证实)为肾小球疾病,118例为非肾小球性疾病。通过评估患者肾脏活检与连续三次不同时间尿红细胞位相显微镜检查达到肾小球性血尿诊断标准与肾小球疾病的符合率,计算出其灵敏度和特异度。结果此诊断标准的灵敏度为93.10%,特异度为90.16%。结论尿红细胞位相检查对肾小球性血尿定位诊断准确可靠,操作简便,适于临床应用。

肾癌G250 MN／CAIX重组质粒DNA免疫效应的初步研究

[目的]观察PCDNA3.0-G250重组质粒在小鼠中诱导产生DNA免疫应答的特点及抑瘤效应。[方法] PCDNA3.0-G250质粒每隔2周肌注射Balb/c小鼠共3次,对照组同法肌注PCDNA3.0质粒。每次免疫10 d后眶后取血,间接免疫荧光法检测血清抗体。6周后取脾细胞观察体外细胞毒效应。同法免疫Balb/c小鼠,第3次免疫时皮下种植sp2/0- PCDNA3.0-G250细胞,观察肿瘤大小及小鼠生存期。[结果]DNA免疫后可检测到特异性抗体,抗体滴度随免疫次数增加逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01)。体外CTL杀伤率与对照组差别有统计学意义。体内实验发现治疗组与对照组抑瘤效应无明显差异(P>0.05)。[结论]G250重组质粒DNA免疫能在小鼠巾诱导产生特异性细胞免疫及体液免疫,无明显体内抑瘤效应。

SARS-CoV GDH株N蛋白全长基因克隆及其可溶性表达

目的构建SARS冠状病毒N蛋白的原核表达质粒,诱导重组蛋白表达并纯化,鉴定其抗原性。方法以我国SARS冠状病毒GDH株总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增N蛋白的全长基因,TA克隆后测序。构建pET-23d的N基因表达载体,用IPTG诱导目的蛋白表达,利用硫酸铵沉淀、分子筛层析及离子交换层析纯化重组蛋白,免疫印迹鉴定重组蛋白。结果RT-PCR扩增出1269bpSARS冠状病毒N蛋白的基因片段,其序列分析结果与SARS-CoVGD01、BJ01株的同源性为99.92%;该基因在大肠杆菌表达系统中高效表达,占可溶性蛋白的33.57%,表达产物为非融合的可溶性蛋白,Westernblot结果显示重组N蛋白具有良好的抗原性;纯化后重组N蛋白纯度为92.9%。结论成功构建了SARS冠状病毒N蛋白的重组表达质粒,并在大肠杆菌中以非融合蛋白的形式得到高效的可溶性表达,为SRAS的诊断和疫苗的研制奠定了基础。

胸苷激酶基因系统联合大蒜素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究

目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK) /更昔洛韦 (GCV)系统联合大蒜素对膀胱癌细胞的协同杀伤效应及对细胞凋亡的影响。方法 通过脂质体将胸苷激酶 (TK)基因转入膀胱癌BIU87细胞构建BIU87TK细胞,观察GCV(1mg/L)、大蒜素(5mg/L)及GCV+大蒜素(浓度同前)共同作用对BIU87TK细胞形态学、细胞凋亡率及细胞周期变化的影响,检测bcl 2、bax、半胱天冬蛋白酶(caspase 3)表达变化及caspase 3活性变化。结果 药物作用 72h,GCV+大蒜素对BIU87TK细胞的抑制率为 72 50%,高于GCV作用后的 35 00%和大蒜素作用后的 37 00%,二者可发挥协同抑瘤作用; (F=6 46,P<0 05)。GCV+大蒜素联合作用前期凋亡率高于单独作用细胞,细胞周期阻滞在S和G2 期,与单独作用比较阻滞时效提前;二者可抑制bcl 2表达并可促进caspase 3表达及活化。结论 HSV TK/GCV系统联合大蒜素可通过共同诱导凋亡发挥协同作用,抑制膀胱癌细胞生长。细胞周期阻滞,相关凋亡基因表达及活性的变化可能发挥了重要的作用。

真菌通用引物Its1和Its4在丝状真菌鉴定中的价值评价

目的对真菌通用引物Its1和Its4在丝状真菌鉴定中的价值进行评价。方法收集中山大学附属第一医院2012年1月至2012年8月间分离的丝状真菌11株,使用真菌通用引物Its1和Its4采用PCR法扩增核糖体基因,对PCR产物进行序列测定,将测序结果与GenBank中已知标准或临床菌株DNA序列比对,确定丝状真菌的菌种;同时与传统形态学鉴定方法进行比较,从而对真菌通用引物Its1和Its4在丝状真菌鉴定中的价值进行评价。结果从DNA提取到序列测定结束,在2个工作日内即可完成。所有菌株均测序成功,测序结果与GenBank中的序列比对,烟曲霉、杂色曲霉、橘青霉、溜曲霉可以鉴定到种;黄曲霉和米曲霉、阿姆斯特丹散囊菌和冠突散囊菌由于高度同源性无法区分鉴定到种。结论利用真菌通用引物Its1和Its4结合PCR技术和测序技术,可快速、准确将大部分丝状真菌鉴定到种。

mecA基因与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染临床特点的相关性研究

目的探讨mecA基因与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床感染的关系,为临床合理使用抗生素提供依据。方法收集2013年-2015年本院患者感染分离的MRSA 83株,分为血流感染组(39株)和非血流感染组(44株)。2组菌株分别进行mecA、PVL基因检测,mecA基因阳性菌株进行荧光定量PCR测定mecA基因RNA相对表达量。结果83株MRSA mecA阳性77株,阳性率为92.8%,血流感染组mecA基因阳性率为100.0%,非血流感染组86.4%,两者差异有统计学意义(χ2=3.880,P<0.05)。两组mecA基因RNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。利福平耐药菌株的mecA基因mRNA相对表达量高于敏感菌株的相对表达量,差异有统计学意义(P<0.05)。PVL基因阳性率为12.0%,其中血流感染组PVL基因阳性率为7.7%,非血流感染组为15.9%,两者差异无统计学意义(χ2=0.656,P>0.05)。结论 mecA基因在血流感染的MRSA中分布较高,其RNA相对表达量与利福平的耐药性密切有关。因此,检测mecA基因,对治疗及控制MRSA感染具有一定的临床指导作用。

硼酸盐亲和与离子交换层析法检测HbA1C的比较

血红蛋白A1c（hemoglobin A1c，HbA1c）是血红蛋白色谱分离中的一种成分。在健康人血液中，RBC平均寿命（120d）一半时段中所测得的平均血糖浓度与HbA1c最吻合^[1]，因此可反映糖尿病治疗中近期血糖水平的控制情况。作为糖尿病血糖水平控制的一个观察指标，