利用荧光RT-PCR法检测环境水体中诺如病毒

目的：建立一种快速敏感的方法检测环境水体中的诺如病毒。方法：选择诺如病毒阳性的粪便标本,10倍梯度稀释,模拟被污染水体,用16%聚乙二醇8000-0.525mol/L NaCl溶液浓缩病毒,用实时定量RT-PCR检测病毒核酸。结果：重组质粒标准品做标准曲线,标准品拷贝数的对数（x）与Ct值的关系为Ct=39.886-3.485x,相关系数R2=0.995,灵敏度为100拷贝,比普通RT-PCR高1个数量级,比ELISA高3个数量级,重复性佳,回收率在14%~44%之间,随着样品中NV浓度降低而下降,。用实时定量RT-PCR、常规RT-PCR和ELISA方法检测了42份现场水样,阳性率分别为40%、24%和0。结论：为环境水体中诺如病毒的检测提供了一种灵敏、可行的定量检测方法。