海豚链球菌simA和pgmA真核表达质粒对尼罗罗非鱼免疫保护的研究

尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)是世界水产养殖业中的重要经济鱼类,但在养殖生产中易受海豚链球菌(Streptococcus iniae)感染而致病致死,使用疫苗是一种相对理想的防感染措施。该研究采用海豚链球菌simA、pgmA基因构建的真核表达载体作为DNA疫苗,肌肉注射罗非鱼评估疫苗保护效果。免疫后在DNA和RNA水平上,在注射鱼体内检测到2个目的基因。首次免疫后第7至第28天,鳃、肝、肾脏、头肾中疫苗组的白介素1 (Interleukin,IL-1β)与肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)表达量高于PBS对照组;疫苗组的抗体滴度、血清抗菌活性显著(P<0.05)高于PBS对照组。攻毒后,注射pcDNA3.1-pgmA、pcDNA3.1-simA、pcDNA3.1-pgmA与pcDNA3.1-simA等比例混合疫苗的相对保护率(Relative percent survival,RPS)分别为60.7%、49.9%和75.0%。结果表明所制备的疫苗具有免疫保护效果,可作为候选疫苗。

SRIF及CSH对斜带石斑鱼脑垂体生长激素合成和分泌的调控

斜带石斑鱼 (Epinepheluscoioides)属于雌性先成熟、具有性转变的雌雄同体鱼类。生长激素释放抑制因子 (SRIF)是鱼类生长激素 (GH)分泌的主要抑制性调节剂 ,半胱胺 (CSH)可抑制SRIF的作用。本文采用静态孵育系统 ,应用RPA及RIA研究SRIF及CSH对斜带石斑鱼GHmRNA表达及GH分泌的调节。结果显示 ,SRIF能以剂量依存方式抑制斜带石斑鱼脑垂体释放GH ,时间越长作用越强。但SRIF作用 2 4h对GHmR NA水平的影响不显著 ,表明SRIF是斜带石斑鱼GH释放的抑制性调节剂 ,对GHmRNA的表达没有明显影响。较低剂量的CSH (10 -4- 10 -2 mol/L)使斜带石斑鱼的GH释放量增加 ,较高剂量 (10 -1mol/L)的CSH引起的GH增加趋势减缓 ,这种现象可能与较高剂量的CSH不仅抑制下丘脑SRIF的释放 ,同时影响GHRH的释放 ,使得GH的分泌量增幅下降有关 ;无论是较高剂量还是较低剂量的CSH都不能使GHmRNA的水平增加 ,表明CSH只能引起GH的释放量增加 ,不影响GH的合成。GnRH与CSH共同作用引起的GH释放量明显高于CSH单独作用的效应 。

澳洲宝石鲈热休克蛋白90-β基因(HSP90-β)的cDNA克隆与表达

热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)在鱼类的应激与免疫反应中起着重要的作用,HSP90-β是该家族的重要成员。为了探讨澳洲宝石鲈(Scortum barcoo)HSP90-β在免疫应答中的作用,本研究首次克隆得到了澳洲宝石鲈HSP90-β的全长cDNA序列。该序列长2708 bp,其中5’UTR长86 bp,3’UTR长444 bp,ORF长2178 bp,编码725个氨基酸,相对分子质量约为83200,具有5个HSP90家族的特征序列,没有信号肽序列和跨膜结构域,与其他鱼类HSP90-β氨基酸的序列一致性皆超过90%。正常情况下,澳洲宝石鲈HSP90-βmRNA主要在肝脏表达。而感染无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)后,其在肝组织中的表达呈先降低后增加的趋势,在脾脏、头肾和脑组织则呈先上升后下降的趋势。这些结果表明澳洲宝石鲈HSP90-β可能参与了无乳链球菌感染引发的免疫反应。

尼罗罗非鱼TNF-R1和TNF-R2基因克隆及表达

为揭示TNF-α受体基因TNF-R1和TNF-R2在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫过程的作用,本研究利用RACE技术获得了TNF-R1和TNF-R2的cDNA。结果表明,TNF-R1 cDNA全长2275 bp,ORF区1335bp,编码444个氨基酸;TNF-R2 cDNA全长1719 bp,ORF区1476 bp,编码491个氨基酸。TNF-R1含3个富含半胱氨酸结构域(cysteine-rich domain,CRD)和一个死亡结构域(death domain,DD),而TNF-R2有4个CRD,缺少DD。系统进化分析表明:其TNF-R1和TNF-R2分别与其他脊椎动物TNF-R1和TNF-R2基因同源性很高,在进化树中TNF-R1、TNF-R2各自聚类且两者之间分支明显。实时荧光定量PCR结果表明:TNF-R1和TNF-R2在该鱼体的不同组织中均有表达,其中在鳃、头肾和脾脏中表达水平最高,而在肌肉、垂体中表达量低。用脂多糖(LPS)和多聚肌苷酸-胞苷酸(PolyⅠ:C)分别刺激离体孵育的该鱼头肾和脾脏白细胞可不同程度上调TNF-α、TNF-R1和TNF-R2的表达。无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染该鱼可显著上调头肾和脾脏中3种基因的表达。本研究对揭示TNF-R1和TNF-R2免疫调控机制,提高罗非鱼健康养殖水平具有一定参考价值。