采用iTRAQ技术研究柚皮苷对烟熏所致小鼠急性肺部炎症相关蛋白表达的影响

采用i TRAQ技术,分析柚皮苷对烟熏诱导急性肺部炎症小鼠肺组织中蛋白表达的影响。20只Balb/c小鼠随机分为模型组和柚皮苷组,每组10只,烟熏诱导急性肺部炎症。柚皮苷组每天于烟熏前按60 mg/kg灌胃给药,模型组给予等量生理盐水。最后一次烟熏16 h后处死小鼠,取肺组织进行i TRAQ蛋白质组学检测,通过定性定量分析筛选差异表达蛋白。共鉴定小鼠肺组织蛋白3 528个,从中找出与柚皮苷作用相关的差异表达蛋白64个,其中表达上调的蛋白29个,下调蛋白35个。经生物信息学分析发现,这些蛋白主要与炎症介质一氧化氮释放和促氧化因子同型半胱氨酸代谢相关,可能是柚皮苷发挥减轻肺部炎症及肺组织损伤、促进炎症消退作用的重要环节;钙调蛋白介导的信号转导途径、表观遗传调控及核糖体蛋白功能调节也与柚皮苷的抗炎作用有密切联系。实验结果显示Arg1、Bhmt、Gnmt等蛋白有可能为柚皮苷抗肺部炎症作用的重要分子靶点,并为阐明柚皮苷的抗炎作用机制提供了基础。

中药谱效学研究过程中差异样品的构建及应用

提出中药谱效学研究过程中差异样品的构建方法:将每味药材看作试验因素,根据原中药组方比例确定各味药材的投料量变化范围,并在该范围内确定合适的水平数;采用均匀设计法,根据因素数、水平数选择合适的均匀设计表,设计几组不同的药材配比;按照标准工艺流程制备差异样品,并用指纹图谱进行监控,采用聚类分析法验证不同差异样品之间的差异性。该方法不同于以往的化学成分逐一分离、再组合的方式,而是从整体上对各味药材用量进行调整,具有实现难度小、适用性高的优点,符合中药的混合性、整体性、统一性特点。

同时测定人血浆中柚皮苷、柚皮素质量浓度的HPLC-MS/MS方法学

采用HPLC-MS/MS建立了同时测定人血浆中柚皮苷、柚皮素质量浓度的方法。以异槲皮苷为内标,血浆样品经乙酸乙酯萃取后,以Agilent Poroshell 120 EC-C18(3.0 mm×30 mm,2.7μm)为色谱柱,甲醇-水(体积比45∶55,均含φ=0.1%甲酸)为流动相,流速为0.4 m L·min-1;采用电喷雾负离子(ESI-)、多反应离子检测(MRM)模式检测,用于定量分析的离子对分别为柚皮苷m/z 579.1/270.8、柚皮素m/z 270.9/150.7、异槲皮苷(内标)m/z 463.1/299.8。经方法学验证,柚皮苷、柚皮素分别在0.251 0~100.4、0.503 0~201.2ng·m L-1质量浓度范围内线性关系良好,批间、批内精密度均符合要求,提取回收率高。结果表明,HPLC-MS/MS法灵敏度好、准确性高、重现性好,适用于测定人血浆中柚皮苷、柚皮素质量浓度。

尖吻蝮蛇凝血酶分离纯化新工艺研究

尖吻蝮蛇凝血酶是从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得到的一种类凝血酶,属于止血一类新药。建立了尖吻蝮蛇凝血酶分离纯化新工艺,采用切向流过滤技术,用两步离子交换层析分离得到高纯度的尖吻蝮蛇凝血酶,再采用两步凝胶排阻层析去除热原和脱盐。该工艺具有简便高效的特点,适合大规模工业化生产。

基于网络药理学探讨丹红注射液成分-抗血栓靶点的相互作用

采用Surflex-Dock分子对接方法,探讨丹红注射液化学成分与抗血栓靶点间的相互作用,利用Cytoscape软件构建丹红注射液活性成分-抗血栓靶点网络,并通过Clue GO插件对靶点涉及的信号通路进行分析。丹红注射液中有60个成分与106个抗血栓作用靶点间存在2 028条关联。其中,丹红注射液成分与F2、F13A、SERPINC1、PGH2、ACE、REN、PLAU和PROC等靶点密切相关,这些靶点涉及凝血、纤溶、内皮功能、血管收缩舒张等多方面的信号通路;与抗血栓靶点关联较多的成分为丹酚酸类。这为进一步阐明丹红注射液多成分、多靶点分子作用机制提供了依据。

复方血栓通胶囊对弥散性血管内凝血模型大鼠肝肾功能的影响

采用脂多糖LPS诱导的弥散性血管内凝血DIC模型,探讨复方血栓通胶囊对肝肾等器官的损伤以及血栓沉积的影响。结果表明,复方血栓通胶囊能够显著抑制DIC模型大鼠天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、尿素氮、肌酐的升高,显著抑制肝肾组织血栓的形成、出血以及炎性细胞的浸润。本研究为复方血栓通胶囊的临床合理用药提供了依据。

尖吻蝮蛇凝血酶在大鼠体内的药代动力学

尖吻蝮蛇凝血酶是从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得到的一种类凝血酶,是本团队研发的止血一类新药。采用125Ⅰ-标记的放射性同位素法和三氯醋酸沉淀结合放射性检测法研究尖吻蝮蛇凝血酶在大鼠体内的药代动力学。结果表明两种方法测定的AUC值与剂量均呈正相关,相关系数分别为0.999 8和0.999 0;肝、脾、心在给药后5 min药物含量最高,其他绝大部分组织在给药后30 min药物含量最高,以后逐渐降低;在各时间点,肝组织含药量显著高于其他组织;此外,尖吻蝮蛇凝血酶排泄较完全,主要由尿排泄。