从噬菌体抗体库中筛选D二聚体特异的Fab抗体

目的:从人源性噬菌体抗体库中筛选抗人D二聚体单克隆抗体并进行可溶性表达。方法:以人D二聚体标准品为抗原对所构建的噬菌体抗体库进行两轮“吸附-洗脱-扩增”筛选,从中筛选出抗人D二聚体的噬菌体Fab抗体,并在大肠杆菌细胞中进行可溶性表达。结果:经4次电转化构建了库容为2. 8×108cfu的抗体库,滴度为4. 1×1014PFU/mL,Fab基因重组率为46%。经过淘筛后携带抗人D二聚体抗体的特异性噬菌体得到了明显的富集。用试剂盒以ELISA法检测对人D二聚体的结合活性,得到抗人D二聚体单克隆抗体。筛选出的阳性克隆成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达筛选出的阳性克隆在大肠杆菌细胞中可溶性表达。结论:人D二聚体标准品对抗体库的淘筛,富集了表面呈现抗人D二聚体的单克隆抗体的噬菌体,成功构建了人源性抗D二聚体噬菌体抗体,并成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达。

人源抗D-二聚体抗体的构建和分析

目的:从人源性噬菌体抗体库中筛选抗人D-二聚体单克隆抗体,构建一种导向溶栓抗体。方法:应用噬菌体展示技术构建血栓病人的抗体库,从中淘选出能与血栓主要成份纤维蛋白的降解产物D-二聚体有特异结合作用的抗体。将抗体在XL1-Blu中可溶性表达。再利用抗D-二聚体鼠源抗体进行竞争ELISA检验,证实抗体与D-二聚体结合的活性。结果:获得抗人D-二聚体单克隆抗体D13株。并成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达,在ELISA检测中显示与D-二聚体结合的优势。结论:该抗体株D13可供进一步开展导向溶栓剂的研究。