内皮细胞抑制素酵母工程菌的高密度发酵及产物纯化和活性分析

用 30升发酵罐研究了内皮细胞抑制素 (EDN)酵母工程菌P .pastorisGS115 (pPIC9K EDN)的高密度发酵工艺 ,摸索出发酵培养基 ,pH ,诱导时间等对菌体生长和基因表达的影响 .根据所确定的最适条件进行发酵 ,通过补料和甲醇诱导 4 8h后 ,工程菌GS115 (pPIC9K EDN)生物量的A60 0 值达到 2 5 0 ,分泌量为 15 0mg L .发酵液经StreamlineSP ,SepharoseSPFF离子交换柱和Sepharose HeparinHiTrap亲和柱纯化 ,产物纯度达 97%以上 ,回收率为 6 0 % .Western印迹结果表明 ,酵母工程菌GS115 (pPIC9K EDN)表达的重组人内皮细胞抑制素具有天然EDN的免疫原性 .MTT法和抑癌实验结果显示 :纯化产物能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖并能抑制移植于小鼠的黑色素瘤的生长 ,其平均抑瘤率是 94 2 % .

人p17.3基因及其推导蛋白的结构和功能分析

用生物信息学技术研究人类神经元蛋白p17.3的基因结构、染色体定位、组织表达特征及其推导蛋白的理化特性、空间结构和功能等。以高通量基因组序列(HTGS)数据库及SAGE文库为基础对p17.3基因进行染色体定位及组织表达谱分析。通过DAS和TMpred等程序预测其蛋白质结构及功能。利用PDB程序模拟其三维空间结构。研究表明p17.3基因定位于人类染色体Xp11.2-3,在多种组织中广谱表达,但在前列腺表达量最高。其编码蛋白含有一个PEST区域、一个线粒体靶向序列和一个潜在“跨膜螺旋”结构。p17.3基因可能是一个参与神经元发育调控的基因。

在67种微生物基因组序列中都不存在的最短的碱基组合

对67种微生物基因组全序列进行分析,发现某些碱基组合(及其反向互补序列)在某些基因组中不存在,而这种不存在的概率很低;发现6个11bp的寡核苷酸序列(及其反向互补序列)——AGGGGGGGGTC(GACCCCCCCCT)、AGGGTCCCTAG(CTAGGGACCCT)、ACGTACCTAGG(CCTACGTACGT)、GACACACGTAG(CTACGTGTGTC)、CGCGTAACTAG(CTAGTTACGCG)、CTAGGGACCCA(TGGGTCCCTAG)在这67种基因组中都不存在。上述每个寡核苷酸序列(及其反向互补序列)在由这67种细菌基因组连接而成的DNA分子(长度为169660265bp)中不存在的概率至少小于2.5e-26。

色谱技术在中药指纹图谱研究中的应用

介绍了气相色谱、高效液相色谱、超临界流体色谱和高速逆流色谱等几种色谱技术在中药指纹图谱研究中的应用现状,以及使用模糊聚类分析和人工神经网络分析指纹图谱对中药进行模式识别和质量鉴定的方法。