干眼症患者435例临床症状分析

目的分析不同类型干眼症患者的临床表现及其特点。方法收集2006年10月至2008年2月就诊于我科的435例(870眼)干眼症患者的资料,并进行相关检查,包括裂隙灯检查、角膜荧光素染色、泪膜破裂时间(breakuptime,BUT)检查和基础泪液分泌试验(Schirmer Ⅰtest,SⅠt)。结果435例干眼患者中,眼部不适症状中最多见者为眼部干涩312例和视疲劳308例,其次是眼痒265例,视物模糊/视力下降247例,眼红241例,异物感213例,畏光/流泪和眼痛均为197例,眼烧灼感112例,睫毛上粘有碎屑、球结膜出血和眼睑痉挛者少见。女性发病率多于男性。非-Sjgren综合征眼患者386例,平均年龄(34.70±12.84)岁。BUT≤5s者410例;角膜荧光素染色阳性患者427例;SⅠt≤5mm者335例,6mm≤SⅠt<10mm者83例。结论干眼症患者的临床症状具有多样性特点,尤以眼干涩、视疲劳、眼痒和视物模糊/视力下降最为多见;角膜荧光素染色检查、BUT、SⅠt检查是诊断干眼症的主要依据。

CD34在翼状胬肉中表达的意义

目的研究翼状胬肉组织中CD34的表达及意义。方法对50例手术切除的翼状胬肉标本行苏木精-伊红染色、过碘酸希夫染色,并进行形态学、免疫组织化学研究和免疫荧光共聚焦显微镜下观察CD34、波形蛋白(VIM)、血管内皮生长因子(VEGF)在翼状胬肉中的表达。结果在翼状胬肉标本中,CD34在血管内皮细胞、血管周细胞以及一些散在的星形、梭形细胞中表达阳性,而在血管壁上及成熟的胶原细胞上呈阴性表达;VIM阳性表达于大部分翼状胬肉组织中;组织中部分疏松排列的网状及裂隙样、管样区结构过碘酸希夫染色呈阳性的紫红色反应;网状区的梭形细胞VEGF阳性表达。结论翼状胬肉组织中CD34阳性细胞来源于间充质干细胞的分化。翼状胬肉除以血管发生和血管新生的方式生成血管外,血管拟态可能是另外一种供血途径。

蛋白质芯片技术在视网膜母细胞瘤患者早期诊断中的运用(英文)

目的:探讨用表面增强基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)筛选视网膜母细胞瘤(retinoblatoma,Rb)血清标志蛋白,为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断寻找新的方法。方法:采用IMAC30和CM10两种蛋白芯片对18例Rb患者和17名年龄匹配的正常小儿血清进行了蛋白质谱检测。统计分析采用Ciphergenproteinchip3.0.2软件,两组间蛋白峰强度的比较采用t检验,率的比较采用Fisher精确概率法。结果:IMAC30蛋白芯片结果显示:与正常幼儿相比,视网膜母细胞瘤患者血清中有26个差异表达的蛋白峰,其中高表达有21个,质/荷比(m/z)分别为:7746,7014,117133049,7084,7299,5888,2544,12575,5489,9658,95759929,10161,8955,1886,10617,6209,2411,7374和6614低表达有5个,分别为:8382,7923,7972,8590和66576,统计学检验P<0.01。其中以m/z7014峰进行两组统计学分析时,敏感性和特异性分别为94.4%和82.4%。与正常小儿相比,经CM10蛋白芯片分析显示:视网膜母细胞瘤患者血清中有4个差异表达的蛋白峰,其中高表达有个,质/荷比(m/z)分别为5888,6097和7798;低表达蛋白峰为m/z8590。统计学检验P<0.01。当选择m/z779峰进行统计学分析时,敏感性和特异性分别是83.3%和70.6%。结论:视网膜母细胞瘤患者血清中存在较多标志蛋白SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术有望成为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断的新的有效工具。

人脐静脉内皮细胞体外分离培养方法改进的探索及鉴定

目的:建立能大量分离人脐静脉内皮细胞的体外培养的简便方法,分析人脐静脉内皮细胞抗原表达的特点。方法:采用玻璃接管连接医用三通管灌注0.133%胶原酶I法分离脐静脉内皮细胞,培养于10%胎牛血清的人内皮细胞培养液(含β-促内皮细胞生长因子和肝素钠),培养皿用1.5%明胶包被,促进内皮细胞贴壁。培养过程中观察细胞的形态特征,同时行免疫组织化学染色检测第八因子相关抗原、CD31表达情况,鉴定内皮细胞来源。结果:成功获取人脐静脉内皮细胞,原代人脐内皮细胞24h贴壁,第5日细胞融合;第八因子相关抗原和CD31呈广泛的阳性表达,第八因子相关抗原阳性染色程度高于CD31,证实为人脐静脉内皮细胞。结论:应用玻璃接管连接医用三通管灌注胶原酶消化法分离脐静脉内皮细胞,利用10%优质胎牛血清的人内皮细胞培养基,添加β-促内皮细胞生长因子和肝素钠,并用1.5%明胶包被培养皿,能简单有效培养人脐静脉内皮细胞。

反复-70℃冻融对人眼脉络膜黑色素瘤OCM-1细胞中肿瘤干细胞的杀伤作用

目的:研究反复-70℃冻融对人眼脉络膜黑色素瘤OCM-1细胞中肿瘤干细胞的杀伤作用。方法:复苏OCM-1细胞,使用标准DMEM/F12培养基培养后,改用无血清化学限定培养基(serum-freemedium,SFM)培养,并分离纯化肿瘤干细胞(choroidalmelanomastemcells,CMSCs)。分别对OCM-1和纯化的CMSCs反复-70℃冻融后,MTT比较杀伤比率的差异。光镜及共聚焦显微镜观察细胞形态学改变。结果:在标准DMEM/F12培养基中贴壁生长的OCM-1细胞,使用SFM培养基培养后,贴壁细胞明显减少,第6代的CMSCs细胞,均为悬浮团状集落生长,呈现典型的干细胞生长方式,CD133阳性比率达到79.8%,Musashi-1强阳性表达。MTT比色法显示,反复-70℃冻融对OCM-1和CMSCs的杀伤比率存在显著差异。光镜及共聚焦显微镜观察发现,冻融后OCM-1细胞出现大量的凋亡细胞,而CMSCs则以坏死为主,凋亡细胞少见。结论:反复-70℃冻融对分化良好的OCM-1细胞主要是诱导其凋亡。而OCM-1中存在的肿瘤干细胞CMSCs对冷冻更加敏感,冻融后大量死亡,这是肿瘤在冷冻治疗后发生退变消失的根本原因。

川芎嗪对过氧化氢诱导大鼠离体培养晶状体氧化损伤的抗氧化作用

目的探讨川芎嗪对过氧化氢诱导大鼠离体培养晶状体氧化损伤的抗氧化作用。方法 SD大鼠24只,随机分8组,即正常对照组、过氧化氢对照组、不同浓度川芎嗪组(0.125 mg/ml、0.25 mg/ml、0.5 mg/ml、1 mg/ml、2 mg/ml和4 mg/ml)。摘除大鼠眼球,取晶状体进行体外培养,24 h后取出晶状体,肉眼观察晶状体混浊程度,然后匀浆取上清液,通过黄嘌呤氧化酶反应法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;通过丙二醛可与硫代巴比妥酸缩合法检测丙二醛(MDA)含量。结果 SOD检测结果显示,与过氧化氢组比较,0.5 mg/ml、1 mg/ml和2 mg/ml的川芎嗪浓度可明显升高SOD活性,P<0.05或P<0.01。MDA检测结果显示,与过氧化氢组比较,各个浓度的川芎嗪均可降低晶状体MDA的含量,P<0.01。结论川芎嗪可抵抗过氧化氢所致的大鼠晶状体的氧化损伤,其机制可能与提高SOD活性和降低MDA含量有关。

液相芯片技术及其在泪液细胞因子检测中的应用

液相芯片技术是一种利用混悬在液相中的分类编码微球作为反应及信号检测载体,集合流式细胞技术、激光技术、数字信号处理技术及传统化学技术为一体的新型生物分子检测技术。它充分利用发展成熟的流式细胞术检测原理,对目标分子(如核酸、蛋白质等)进行高通量分析。目前已在生物医学研究中得到了广泛的应用。现就其技术原理、特点及其在泪液细胞因子检测中的应用作简要介绍。

台式压力蒸汽灭菌器的应用及其灭菌效果观察

目的观察台式压力蒸汽灭菌器在特殊物品灭菌中的应用及其灭菌效果。方法通过化学指示剂监测法,观察了小型台式压力蒸汽灭菌器对细胞培养用品和配液的灭菌效果。结果用内源蒸汽台式压力蒸汽灭菌器,在121℃条件下对细胞培养配液灭菌25 m in,对细胞培养配液达到灭菌通过;在132℃条件下灭菌12 m in,对手术器械、玻璃培养器皿、胶塞等物品包达到灭菌通过。灭菌处理的细胞培养器皿和细胞配液都不影响细胞生长。结论用台式压力蒸汽灭菌器对眼科实验室的细胞培养器皿和配液进行灭菌具有良好的适用性和有效性。