“低钾”诱导神经元凋亡过程中ARNT2上调表达的分析

目的 :观察“低钾”诱导大鼠神经元凋亡过程中ARNT2的表达变化 ,探讨ARNT2与神经元凋亡的关系。方法 :建立“低钾”诱导神经元凋亡模型 ,应用RT -PCR分析ARNT2在凋亡过程中mRNA的表达变化 ,Westernblotting分析蛋白质的表达变化 ,间接免疫荧光与激光共聚焦确定亚细胞定位。结果 :“低钾”诱导 30min后大鼠小脑颗粒神经元ARNT2mRNA表达水平即明显上调 ,1h后上调表达最明显 ,并持续至“低钾”诱导后 12h左右 ,ARNT2蛋白质水平的表达变化与mRNA水平的表达变化相似 ,免疫荧光结合激光共聚焦分析显示ARNT2蛋白定位于正常大鼠小脑颗粒神经元细胞核内。结论 :ARNT2分布于正常大鼠小脑颗粒神经元细胞核内 ,在“低钾”诱导的凋亡过程中ARNT2mRNA与蛋白均上调表达。

大鼠神经元Arnt2亚细胞定位的预测与分析

目的:分析大鼠小脑颗粒神经元Arnt2的亚细胞定位情况。方法:利用CBS生物信息资源,根据Arnt2氨基酸序列(LOCUS:NP_036913)进行真核生物亚细胞定位预测,并寻找Arnt2核输出信号(NES);最后利用激光扫描共聚焦显微术(LSM)确定Arnt2在正常大鼠小脑颗粒神经元中的亚细胞定位情况。结果:预测Arnt2在真核生物细胞中主要为细胞核定位,并具有线粒体定位的可能性;预测结果还显示Arnt2氨基酸序列上存在着核输出信号,具体位置为氨基端第143位亮氨酸;LSM分析结果证实Arnt2定位于大鼠小脑颗粒神经元细胞核内。结论:Arnt2定位于正常大鼠小脑颗粒神经元细胞核内;Arnt2具有线粒体定位的可能性,并存在核输出信号,提示在某些诱导因素作用下,Arnt2存在线粒体定向转位的趋势。

小脑颗粒神经元低钾性凋亡过程中Arnt2核浆转位的分析

目的:分析大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)“低钾”性凋亡过程中Arnt2亚细胞定位的变化。方法:W estern b lotting法分析“低钾”性凋亡过程中CGNs核抽提物中Arnt2蛋白质的表达变化,间接免疫荧光结合激光扫描共聚焦显微术(LSM)分析Arnt2蛋白质亚细胞定位的变化。结果:在CGNs细胞核抽提物中,“低钾”诱导30 m in后Arnt2蛋白质已明显表达上调,1 h后达至峰值水平,“低钾”诱导6 h后上调表达的Arnt2回落至正常对照水平;LSM分析显示位于正常CGNs细胞核内的Arnt2在“低钾”作用下逐步向胞浆转移,并在CGNs凋亡末期与胞浆线粒体定位的HSP60完全重叠。结论:Arnt2在小脑颗粒神经元“低钾”性凋亡过程中发生了核浆转位;结果提示,Arnt2很可能是通过传递“低钾”诱发的细胞凋亡或存活信号而直接参与小脑颗粒神经元“低钾”性凋亡的调控。