Akt/NF-κB信号途径在免疫复合物诱导肾系膜细胞增殖中的作用

目的 :观察免疫复合物 (IC)能否诱导体外培养的肾小球系膜细胞 (MC)增殖及其Akt/NF κB信号在其中的作用。方法 :实验设对照组、刺激组及Akt1正义 (SODN)、错义 (MSODN)与反义寡核苷酸 (ASODN)组。寡核苷酸组 :以lipofectin分别介导Akt1SODN、MSODN、ASODN转染MC 8h ;对照组和刺激组 :以lipofectin作用MC 8h。然后刺激组和寡核苷酸组均用聚合IgG(aggregatedIgG ,AIgG ,一种标准的IC模型 )刺激 ,对照组用等量的单体IgG刺激。用MTT比色法检测细胞的增殖 ,流式细胞术分析MC的细胞周期 ,RT PCR分析mRNA的表达 ,Westernblot检测蛋白的表达 ,电泳迁移率变动实验 (EMSA)检测NF κB的活性。结果 :IC可诱导MC中NF κB的活化 ,上调细胞周期蛋白cyclinD1的mRNA及蛋白表达 ,促进MC进入S期。Akt1ASODN可抑制Akt1蛋白的表达 ,抑制IC诱导的MC中NF κB活性 ,抑制cyclinD1mRNA及其蛋白的表达 ,进而抑制IC促进MC进入S期和增殖。Akt1SODN、MSODN则无上述抑制作用。结论 :IC可通过Akt/NF κB信号途径 ,介导体外培养的MC增殖。提示Akt/NF κB信号途径 ,可作为干预IC诱导MC过度增生的一个新的治疗靶点。

Akt/NF-κB信号途径参与免疫复合物诱导肾小球系膜细胞表达趋化因子

目的 :探讨Akt/NF -κB信号途径在免疫复合物 (ICs)诱导肾小球系膜细胞 (MC)表达趋化因子中的作用。方法 :体外培养小鼠MC。对照组 :0 5 % (v/v)lipofectin作用 8h后IgG单体刺激 ;刺激组 :0 5 % (v/v)lipofectin作用 8h后AIgG(一种标准的ICs模型 )刺激 ;反义、正义、错义寡核苷酸组 :0 5 % (v/v)lipofectin转导Akt1反义、正义、错义寡核苷酸 8h后AIgG刺激。ELISA法检测单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP - 1)、巨噬细胞集落刺激因子 (CSF - 1)浓度 ,mRNA半定量用RT -PCR。EMSA法检测NF -κB活性。结果 :MC有低水平NF -κB活化和组成性MCP - 1、CSF- 1mRNA及蛋白表达。AIgG刺激后 ,NF -κB活化增强 (0 35± 0 0 6vs 0 75± 0 16 ,P <0 0 1) ,MCP - 1和CSF - 1mRNA表达上调 (0 4 8± 0 0 3vs 0 72± 0 0 2 ,P <0 0 5 ;0 4 4± 0 0 1vs 0 5 9± 0 0 2 ,P <0 0 5 ) ,蛋白分泌增多 (15 5 2±1 81vs 4 3 0 5± 3 18,P <0 0 5 ;389 0 6± 13 75vs 76 4 2 2± 31 78,P <0 0 5 )。Akt1反义寡核苷酸显著抑制AIgG诱导NF -κB活化 (0 37± 0 0 5vs 0 75± 0 16 ,P <0 0 1)、MCP - 1和CSF - 1mRNA(0 5 2± 0 0 2vs 0 72± 0 0 2 ,P <0 0 5 ;0 4 4± 0 0 1vs 0 5 9± 0 0 2 ,P <0 0 5 )?