含恩替卡韦耐药基因的HBV全基因组逆转录病毒载体的构建及包装

目的:构建含恩替卡韦耐药基因的HBV全基因组逆转录病毒载体,同时进行逆转录病毒载体的包装,为进一步产生含恩替卡位耐药基因的假病毒,进一步感染肝源性细胞,进行耐药机制的研究做准备。方法:采用基因扩增、重组和克隆的方法,从构建好的含恩替卡位耐药基因的重组质粒中,扩增出含恩替卡位耐药基因的HBV全基因组,然后插到pLEGFP-N1载体上,再进行重组质粒的转化、提取、纯化和测序,然后将测序成功的重组质粒扩大培养,并转染PT67细胞,最后通过荧光倒置显微镜观察和提取细胞培养上清进行病毒DNA提取。结果:凝胶电泳分析血清HBVDNA扩增可见3.2kb条带,HBVDNA和pLEGFP-N1载体连接后可见10.1kb目的条带,该重组质粒双酶切后可见3.2kb和6.9kb目的条带。突变前质粒测序显示含有HBV基因型为C型血清型adr的全基因组,突变后测序证实存在HBV逆转录酶169、184、202、250位点的预期碱基突变。荧光倒置显微镜显示,转染后的PT67细胞有明显的荧光表达,培养上清DNA提取后,经过核酸分析仪检测,最后换算结果显示培养上清假病毒颗粒可达104-105/cfu。结论:成功构建了含恩替卡韦耐药基因的HBV全基因重组质粒,并进行了包装,产生了含恩替卡位耐药基因的假病毒颗粒。

禽流感病毒感染小鼠前后表面蛋白编码基因变异情况分析

目的了解禽流感病毒（AIV）在感染小鼠前后表面蛋白编码基因的特点及变异情况。方法在A／Goose／Guangdong／NH／2003（H5N1）感染小鼠肺组织的第12小时和第9天各分离1株AIV病毒，通过鸡胚增殖后提取RNA，反转录合成cDNA，经PCR扩增和产物纯化构建重组质粒，用双脱氧链终止法进行核苷酸序列测定并进行基因特性分析。结果3株病毒HA基因的核苷酸序列同源性为99．6％～99．8％，推导氨基酸序列的同源性为99．3％～99．6％。3株病毒NA基因的核苷酸序列同源性为99．8％-99．9％，均为同义突变。M基因未发生任何变异。结论AIV感染小鼠后HA基因出现变异，NA和肘基因未出现有意义的突变。

安络化纤丸联合恩替卡韦治疗可显著提高慢性乙型肝炎病毒感染者肝纤维化的改善率

目的探索慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者接受恩替卡韦单独或联合安络化纤丸治疗78周对肝纤维化的改善作用。方法慢性HBV感染者随机接受恩替卡韦单独或联合安络化纤丸治疗78周,肝穿刺标本采用Ishakscore盲态判读。比较患者治疗前后的肝纤维化改善情况。对计量资料采用Student'st检验、非参数检验(Mann-WhitneyU-Test及Kruskal-Wallis检验)方法分析;计数资料采用Chi-squared检验方法分析;Spearman分级检验法分析双变量相关性。结果治疗78周后肝纤维化改善率为36.53%(80/219)、进展率为23.29%(51/219)。肝纤维化改善与基线纤维化程度和治疗方法相关(P<0.05)。在安络化纤丸联合恩替卡韦治疗且基线肝纤维化评分(F)≥3的患者中,肝纤维改善率(54.74%,52/95)显著高于仅接受恩替卡韦治疗者(33.33%,16/48),P=0.016;联合治疗组肝纤维化进展比例(13.68%,13/95)在数值上低于单独治疗组(18.75%,9/48),P=0.466。在基线F<3的患者中,联合治疗组肝纤维化改善和稳定的患者比例(68.08%,32/47)高于单独治疗组(51.72%,15/29)。结论安络化纤丸联合恩替卡韦治疗可显著提高慢性HBV感染者肝纤维化的改善率,并有提高肝纤维化稳定率和降低进展率的趋势。

树突状细胞MicroRNA表达谱在HBsAg刺激后的变化

目的建立HBsAg刺激树突状细胞（DC）前后microRNA（miRNA）表达的差异谱，为研究miRNA在乙型肝炎病毒感染的免疫机制中的作用提供理论基础。方法体外培养原代DC，分别用HBsAg、LPS、TNFα刺激24h后提取细胞总RNA，利用基因芯片技术进行比较，筛选出HBsAg刺激后差异表达显著的miRNA，利用计算机软件技术进行靶基因初步预测。结果HBsAg刺激前后miRNA差异表达2倍以上者共30个，其中16个上调，14个下调。三个不同刺激组间miRNA差异谱存在不同差异。筛选出的靶基因中包含DC信号通路的相关成分。结论HBsAg刺激DC后的miRNA表达谱的变化存在特异性；靶基因的初步筛选结果进一步提示了miRNA在乙型肝炎病毒感染的免疫机制中可能起着重要作用。

中国汉族丙型肝炎患者代谢综合征患病率及危险因素分析

目的评估中国汉族丙型肝炎患者中代谢综合征的患病率及其危险因素。方法本研究为一项多中心、横断面研究。纳入997例中国汉族丙型肝炎感染者。采集人口统计学、人体测量数据及代谢综合征相关临床指标。统计学处理采用t检验(正态分布)或Mann-WhitneyU双样本检验(非正态分布)和卡方检验。与代谢综合征显著相关的因素进一步采用二元logistic回归分析。结果997例丙型肝炎患者中,170例(17.1%)患者被诊断为代谢综合征。二元logistic回归分析显示,基因2型(OR=1.594;95%CI:1.045~2.431,P=0.030)、高龄(OR=1.040;95%CI:1.022~1.058,P<0.01)、超重(OR=3.876;95%CI:2.593~5.792,P<0.01)、脂肪肝病史(OR=2.106;95%CI:1.384~3.204,P=0.001)、稳态模型胰岛素抵抗指数(OR=1.263;95%CI:1.118~1.427,P<0.01)、空腹胰岛素低水平(OR=0.949;95%CI:0.915~0.985,P=0.006)、低血清白蛋白水平(OR=0.957;95%CI:0.915~1.000,P=0.049)和高γ-谷氨酰转肽酶水平(OR=1.004;95%CI:1.000~1.008,P=0.0041)与代谢综合征的存在具有显著相关性。结论对基因2型、高龄、超重、有脂肪肝病史、稳态模型胰岛素抵抗指数偏高、空腹胰岛素水平偏低、血清白蛋白偏低、高γ-谷氨酰转肽酶水平的丙型肝炎患者,要重视代谢综合征的筛查。