建立一种测定细胞色素P450 3A4活性的方法

目的 建立一种细胞色素P450 3A4（cytochrome P450 3A4,CYP3A4）活性定量的新方法.方法 将CYP3A4底物硝苯地平与人肝微粒体进行体外温孵,以高效液相色谱法测定硝苯地平及其氧化产物,以甲醇-水（64：36）为流动相,流速为0.5 mL·min^-1,检测波长为254 nm.结果 在所建立的HPLC条件下,硝苯地平及其氧化产物的出峰时间分别在8.44和6.15 min,能够完全分离,且无其他生物基质峰干扰;氧化硝苯地平在人肝微粒体的最低检测限为25μg·L-1（S/N=3）,线性范围是0.25～32 mg·L^-1（r=0.999 4）,符合检测要求;在0.5,4.0,20.0 mg·L^-1时的萃取率分别为（67.05±3.49）%,（66.63±3.60）%,（67.08±2.78）%（n=5）;方法回收率分别为（100.17±6.97）%,（91.96±3.71）%,（96.55±3.98）%（n=5）;日内及日间RSD均小于7%.结论 本实验所建立的HPLC能够准确、快速检测出硝苯地平及其在人肝微粒体中的氧化产物,能够对CYP 3A4活性进行快速评价,适合于体外药物代谢动力学研究和第三代多药抗药性逆转剂的筛选.

ERCC1基因多态性与结直肠癌奥沙利铂为基础方案化疗疗效的关系

目的研究ERCC1 codon 118基因多态性与晚期结直肠癌患者对奥沙利铂化疗疗效的关系。方法收集经病理学确诊的晚期结直肠癌患者73例,静脉血提取白细胞,用PCR技术检测ERCC1基因型。所有患者均经FOLFOX4方案治疗,以肿瘤化疗疗效评价标准(WHO)评价疗效。结果 C/C、T/T+C/T基因型组化疗的有效率分别为53.1%、22.0%。C/C与T/T+C/T基因型组两组对奥沙利铂为基础方案化疗疗效差异有统计学意义(P<0.05)。C/C基因型组患者无疾病进展时间为9.31个月,而T/T+C/T基因型组患者为7.96个月(P>0.05)。C/C基因型组患者总生存时间为19.40个月,而T/T+C/T基因型组患者为14.73个月(P<0.05)。结论晚期结直肠癌患者ERCC1 codon 118多态性与奥沙利铂为基础方案化疗疗效关系可能存在相关性,基因型检测可能有助于指导晚期结直肠癌的化疗。

miRNA在白血病干细胞中的表达谱

目的观察miRNA在人骨髓白血病干细胞中的表达情况。方法以从人骨髓中分离培养的骨髓白血病干细胞为实验对象,用Mir Va Na试剂盒分离提取细胞内小RNA。用Agilent 2100分析仪分析其完整性和含量。用Agilent人miRNA V12芯片分析miRNA的表达。结果复苏后存活的单核细胞经流式分选出的白血病干细胞群比例为1.58%,细胞数为2.5×105个。分选出的白血病干细胞抽提得到3μg的总RNA。利用安捷伦miRNA芯片一共检测到81个人源miRNA的表达。其中,表达量最高的10个miRNA分别是miR-233、miR-21、miR-142、miR-720、miR-23a、let-7f、let-7a、miR-16、miR-15a和miR-19b。利用Target Scan软件,预测这10个表达量最丰富的miRNA共有2 147个靶标基因。初步进行功能富集分析,发现这些miRNA所调控的基因主要集中在转录调控、生物合成、跨膜运输、免疫系统发育、淋巴系和髓系细胞分化等方面。结论筛选出了在人骨髓白血病干细胞中表达的miRNA,为其参与调控白血病干细胞的增殖分化提供了依据,同时为miRNA在白血病干细胞中潜在应用奠定基础。

三苯氧胺联合5-氟尿嘧啶对人结肠癌细胞HT-29的抑制作用

目的探讨三苯氧胺(tamoxifen,TAM)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人结肠癌细胞株HT-29的增殖、凋亡及细胞迁移的影响。方法采用MTT法、流式细胞仪分别检测不同浓度(12.5、25、50μmol/L)5-FU及其联合TAM对HT-29细胞增殖的抑制作用、细胞凋亡的诱导作用,应用细胞划痕实验检测TAM(1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4mol/L)、5-FU及其联合TAM对细胞迁移的抑制作用。结果 5-FU及其联合TAM均可提高HT-29细胞增殖抑制率,单用5-FU的抑制率分别为(50.8±8.9)%和(62.8±8.8)%和(69.7±9)%,12.5μmol/L 5-FU联合低浓度TAM(1×10-7、1×10-6 mol/L)的抑制率分别为(82.9±2.9)%和(84.0±1.6)%,其作用呈剂量依赖关系;高浓度(1×10-4mol/L)TAM联合12.5μmol/L 5-FU表现出明显的促细胞凋亡作用[凋亡率为(95.7±4.2)%];划痕实验证实经1×10-6和1×10-5mol/L TAM及单用5-FU处理HT-29细胞72 h后均可明显地抑制细胞的迁移,但联合用药未显示出较TAM单药更明显的抑制作用。结论 TAM和5-FU均具有抑制细胞增殖、迁移和促进细胞凋亡的作用,TAM亦可增加结肠癌细胞株HT-29对5-FU的敏感性。

鼻咽癌高危人群血浆EBV-DNA定量分析

目的:探讨鼻咽癌高危人群E病毒DNA(Epstein-Barr virus DNA,EBV-DNA)的存在情况及其在鼻咽癌早期诊断中的应用价值。方法:2009-08-13-2010-07-27在广东省中山市小榄镇开展鼻咽癌筛查,ELISA法检测16 712名EBV抗体,确定鼻咽癌高危人群386名,同时收集鼻咽癌低危人群273名。收集同期中山市人民医院初诊鼻咽癌患者62例。荧光定量PCR方法检测高危人群血浆EBV-DNA,并随访1年,比较分析高危人群EBV-DNA定量检测的应用价值。结果:初筛鼻咽癌高危人群EBV-DNA阳性率为12.2%(47/386),高于鼻咽癌低危人群的3.3%(9/273),而低于初诊鼻咽癌患者的91.9%(57/62),3组差异有统计学意义,P<0.001。随访复查时,血清学持续高危人群EBV-DNA阳性率为9.7%(18/186),而血清学转变为非高危人群的EBV-DNA阳性率为3.1%(3/97),差异有统计学意义,P=0.045。筛查人群中血清学诊断鼻咽癌的阳性预测值为5.6%(32/572),而在鼻咽癌高危人群中增加EBV-DNA检测,其阳性预测值提高到44.6%(29/65)。结论:鼻咽癌高危人群血浆EBV-DNA定量检测能对血清学EBV抗体检测进行有效的补充,可大大提高筛查准确性,对鼻咽癌高危人群的监测具有重要作用。

重度吸烟对术前放化疗直肠癌患者预后的影响

目的探讨重度吸烟是否影响接受新辅助同期放化疗并手术的直肠癌患者的生存。方法回顾性收集中山大学肿瘤防治中心2008-07-01-2011-06-30所有接受三维适形放射治疗（three dimensional conformal radiotherapy,3D-CRT）的患者资料,患者入组标准为：放射总剂量46Gy/23次,同期XELOX（奥沙利铂＋卡培他滨）方案化疗2个周期,随后行直肠癌根治术。根据吸烟指数（包/d×年数）将符合入组标准的125例患者分为重度吸烟组（≥20包年）83例和非重度吸烟组（〈20包年）42例。统计分析重度吸烟与直肠癌放化疗疗效、复发、转移和预后的关系。结果重度吸烟组与非重度吸烟组在放化疗疗效方面差异无统计学意义,χ^2=0.11,P=0.739;局部复发和远处转移的发生则差异有统计学意义,χ^2=0.35,P=0.037。Logistic多因素分析结果显示,重度吸烟是复发的独立影响因素,Wald=5.00,P=0.026。非重度吸烟患者的无瘤生存期和总体生存期明显好于重度吸烟患者,χ2分别为4.719和5.729,P值分别为0.030和0.017。Cox多因素回归分析结果显示,重度吸烟是影响患者无瘤生存期（Wald=6.20,RR=3.52,95%CI为1.31～9.47,P=0.013）和总生存期（Wald=5.21,RR=3.18,95%CI为1.17～8.58,P=0.023）的独立风险因素。结论患者治疗前的吸烟情况与直肠癌的同期放化疗疗效无相关性,而与患者治疗后的生存及肿瘤复发转移明显相关。