沙利度胺在大鼠炎症性肠病模型中药动学研究

目的研究沙利度胺在炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)SD大鼠模型中的胃肠道吸收过程,对比疾病状态与正常状态下沙利度胺口服吸收的差异,为沙利度胺用药安全性和有效性提供基础。方法使用三硝基苯磺酸造模法建立IBD大鼠模型,连续干预6 d,每天观察、记录大鼠一般状态与疾病活动指数。设置健康大鼠沙利度胺口服组为对照,同时对IBD模型组大鼠于造模6 d后口服给予沙利度胺,给药剂量均为10 mg·kg^(-1),采集不同时间点的大鼠血液样本。经大体形态学及组织病理学综合评估,选取IBD造模成功大鼠样本,采用经验证的高效液相色谱-质谱联用法测定沙利度胺血药浓度,计算药动学参数并与健康大鼠对比。结果IBD模型组体质量明显低于空白对照组,疾病活动指数、结肠形态评分与组织病理学评分均明显高于空白对照组,造模成功率为62.5%。药代动力学结果显示,IBD组大鼠C_(max)(P<0.05)与AUC(P<0.01)相较健康大鼠均升高了2~3倍,而T_(1/2)、T_(max)、MRT等参数无明显差异。结论相较于正常大鼠,在炎症性肠病模型中,大鼠口服沙利度胺的吸收速度与程度显著提高,这可能为临床口服沙利度胺用于IBD的治疗提出新的考量。

基于PGPK及中药-药物相互作用的个体化用药在中国肾移植病人中的应用

他克莫司是目前防治肾移植术后排斥反应的一线免疫抑制剂，然而，药动学个体差异大是其临床合理用药的丰要难题。他克莫司主要经CYP3A4、CYP3A5代谢，同时也是P-糖蛋白（P-gp，由MDR1基因编码）的底物。本课题组前期的研究发现CYP3A5基因多态性能显著影响他克莫司的药动学，

黄芪颗粒和黄芪注射液对CYP1A2、CYP2D、CYP2C亚酶活性影响的实验研究

目的通过体内和体外实验研究黄芪颗粒和黄芪注射液对CYP1A2、CYP2D、CYP2C亚酶的活性影响。方法建立体外"cocktail"反应体系,利用LC/MS/MS法测定酶代谢产物,计算黄芪颗粒和黄芪注射液对CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9和CYP2C19亚酶活性的影响;大鼠随机分为对照组和实验组,不同浓度黄芪颗粒和黄芪注射液连续灌胃10 d,制备肝微粒体并进行"cocktail"反应,评价两种药物体内对大鼠CYP1A2、CYP2D1、CYP2C6和CYP2C11亚酶活性影响。结果在体外"cocktail"实验中,黄芪颗粒和黄芪注射液明显地抑制了CYP2D6、CYP2C19和CYP1A2亚酶活性,而二者对于CYP2C9亚酶活性无影响。在大鼠灌胃给药实验中,黄芪颗粒在剂量32、160和800 mg.kg-1.d-1提高CYP1A2亚酶活性2.13、3.23和2.20倍,黄芪注射液在剂量0.16、0.8、4 g.kg-1.d-1提高CYP1A2亚酶活性1.65、2.26和2.89倍,而二者均未诱导CYP2D1、CYP2C6和CYP2C11亚酶活性增加。结论黄芪颗粒和黄芪注射液对CYP2D6、CYP2C19活性有抑制作用,对大鼠CYP1A2活性有诱导作用。

应用GA-BP人工神经网络预测丙戊酸钠血药浓度

目的利用GA—BP人工神经网络技术预测丙戊酸钠血药浓度。方法收集193例应用丙戊酸钠患者的血药浓度监测数据及其性别、身高、体重、肝。肾功能、用药情况等12个相关指标，构建GA—BP人工神经网络模型，预测丙戊酸钠血药浓度。结果30个病例样本的预测结果表明，与实际测定浓度相比，误差值范围为0．61—23．33μg／mL，误差百分率在±5％的为19例，±5％～±10％的为3例，±10％～±15％的为4例，±15％～±20％的为l例，超过±20％的为3例。结论应用CA—BP人工神经网络预测丙戊酸钠血药浓度是可行的，可将其用于丙戊酸钠个体化给药的研究。

个体化用药进展及临床应用

正因为临床上存在这样明显的药物反应个体差异,所以一直以来,临床医生都希望可以实现———个体化用药,以期在适当的时间以最适宜的方式给适合的患者以最恰当的药物。

基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型的建立

目的建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型,用来发现PXR、FXR和LXRα受体激动剂。方法利用Real-time定量PCR方法比较HEK293、Hep G2和LS174T细胞中内源性核受体PXR、FXR和LXRα的表达量,将p SG5-h PXR和p GL3-XREM-CYP3A4、p EGFP-N3-h FXR和EcRETK-Luc、p CMX-FLAG-h LXRα和p GL3-XREM-CYP3A4等质粒分别共转染到工具细胞中,优化共转染比例,并考察阳性药与萤光素酶报告基因表达强度的量效关系、模型特异性和稳定性。结果 1根据Real-time定量PCR结果,模型选用低表达PXR、FXR和LXRα的HEK293细胞作为工具细胞;2根据不同共转染比例对报告基因活性的结果,PXR、FXR和LXRα报告基因药物筛选模型的报告基因和过表达质粒比例,最终分别选择1∶1、2∶1和2∶1;3模型中,报告基因活性均与相应阳性药物(PXR/Rif、FXR/CDCA和LXRα/T0901317)呈剂量依赖性增长;4仅PXR激动剂Rif、FXR激动剂CDCA和LXRα激动剂T0901317可分别明显增加相应筛选模型的报告基因活性,分别重复5次试验后,计算得Z'值分别为0.58、0.66和0.63。结论该研究建立的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型,具有良好的特异性和稳定性,适用于对PXR、FXR和LXRα受体激动剂的筛选,进而开发以核受体作为药物靶点的药物。

关于培养药学创新型人才的几点思考

胡锦涛主席在今年1月召开的全国科学技术大会的讲话中，号召“要动员全党全社会力量，为建设创新型国家而奋斗”。在最近召开的十届全国人大四次会议和全国政协十届四次会议上，“建设创新型国家”成为与会代表和委员们最为关注的热点之一。我国要建设创新型国家，加强科技创新能力则是重中之重。作为高校药学专业教师中的一员，也应深刻理解其现实意义．通过创新教育培养和输送更多的创新型药学专业人才，为创新型国家的建设作出努力。如何进行教育创新，实现高水平创新型药学专业人才的培养．一直是我们药学教育工作的重点。结合实际，谈谈我们培养药学创新型人才的几点思考。

炎症反应过程中药物转运体调控的研究进展

炎症状态下机体对药物的处置过程会发生显著改变,众多药物代谢酶及转运体的表达和功能发生下调。研究表明机体在该状态下会释放一系列炎症细胞因子对药物代谢酶的表达和功能产生调控,而近年来的研究表明在炎症状态下药物转运体也受到这些细胞因子的调控,且部分转运体的调控呈现明显的种属差异性。进一步的机制研究表明,一些转录因子在调控的信号通路中发挥了重要的作用。本文对炎症状态下药物转运体的调控研究进展进行综述。

白藜芦醇通过拮抗hPXR对P-gp的影响

目的研究白藜芦醇通过拮抗hPXR对P-gp基因(MDR1)、蛋白表达及活性的影响。方法在LS174T细胞中,采用瞬时共转染报告基因实验研究白藜芦醇对PXR介导的MDR1的转录调节作用,并进一步应用Real-Time定量PCR和Western blot方法检测白藜芦醇作用24 h后对利福平诱导的P-gp基因和蛋白变化的影响,罗丹明转运实验考察P-gp活性的变化。结果双荧光素酶报告基因检测结果显示,25和50μmol.L-1白藜芦醇可通过拮抗PXR将利福平对MDR1的诱导作用由4.70倍分别降至1.76倍和0.69倍(P<0.01),在过表达hPXR的LS174T细胞中,50μmol.L-1白藜芦醇可以将利福平诱导的MDR1 mRNA水平由1.8倍降至1.3倍(P<0.05),Western blot结果表明白藜芦醇也可降低利福平诱导的P-gp表达。此外,罗丹明转运实验显示,25和50μmol.L-1白藜芦醇可以将利福平抑制的累积量由77.7%升至91.7%和95.1%(P<0.05),表明白藜芦醇可降低利福平诱导的P-gp活性。结论白藜芦醇可以通过拮抗PXR而影响P-gp的基因、蛋白表达及活性。

相关miRNAs对LS174T细胞中MRPs的影响

目的探讨相关miRNAs对多药耐药蛋白MRPs转录的影响。方法经脂质体瞬时转染,将pCMX-miR-328,pC-MX-miR-206及pCMX-miR-613表达质粒转入LS174T细胞,24h后采用荧光定量RT-PCR检测相关MRPs的mRNA变化。结果在LS174T细胞内过表达hsa-miR-328,能够降低MRP3的mRNA表达水平,其抑制率为0.32(P<0.05);hsa-mir-206能够降低MRP1的mRNA表达水平,其抑制率为0.35(P<0.05)。hsa-mir-613对LS174T细胞中的相关MRPs表达无影响。结论 hsa-miR-328和hsa-miR-206在LS174T细胞系中可以抑制MRP3和MRP1的转录表达。

SIRT1在丙戊酸对肝细胞毒性中的作用研究

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)在丙戊酸对肝脏Hep G2细胞毒性中的作用。方法在Hep G2细胞中,丙戊酸(2 mmol·L-1)孵育6、12、24、48 h,或丙戊酸(0.5、1、2 mmol·L-1)分别孵育48 h,通过Western blot方法检测丙戊酸对SIRT1蛋白表达的影响;通过瞬时转染SIRT1表达质粒和si-SIRT1,采用SRB方法,观察对SIRT1基因进行过表达和抑制后,丙戊酸对Hep G2细胞毒性的改变情况。结果丙戊酸对SIRT1的表达有抑制作用,且具有时间和剂量依赖性。过表达SIRT1后,Hep G2细胞对丙戊酸的毒性敏感性下降,转染前后IC50分别为(4.025±0.47)、(10.87±1.50)mmol·L-1;而干扰SIRT1后,Hep G2细胞对丙戊酸的毒性敏感性增加,转染前后IC50分别为(1.938±0.16)、(0.663±0.05)mmol·L-1。结论丙戊酸可抑制SIRT1的蛋白表达,并且过表达SIRT1可拮抗丙戊酸对肝细胞的毒性作用。

野黄芩苷对Caco-2细胞中P-gp蛋白表达及活性的影响

目的:研究野黄芩苷对Caco-2细胞中P-糖蛋白(P-gp)表达及活性的影响。方法:野黄芩苷(25,50及100μmol·L-1)与Caco-2细胞共孵育24 h,48 h及72 h后,通过western blot方法检测野黄芩苷对Caco-2细胞中P-gp蛋白表达的影响;通过罗丹明123转运试验,测定罗丹明123在Caco-2细胞内的累积量变化,以考察野黄芩苷对P-gp活性的影响。结果:野黄芩苷对Caco-2细胞中P-gp蛋白表达具有诱导作用,孵育24 h后,野黄芩苷(25,50及100μmol·L-1)对P-gp蛋白的上调倍数分别为2.34,2.65,2.00;孵育48 h后,野黄芩苷上调P-gp蛋白表达2.70,4.66,3.13倍;孵育72 h后,野黄芩苷(25,50及100μmol·L-1)对P-gp蛋白的上调倍数分别为2.82,2.62,1.84。野黄芩苷上调Caco-2细胞中P-gp蛋白表达的同时增加P-gp外排泵活性,孵育24 h后,野黄芩苷(25,50及100μmol·L-1)降低胞内罗丹明123累积量至70.6%,66.6%,76.6%;孵育48 h后,胞内罗丹明123累积量降低至55.6%,37.5%,65.2%;孵育72 h后,胞内罗丹明123累积量降低至45.5%,53.9%,60.3%。结论:野黄芩苷诱导Caco-2细胞中P-gp的蛋白表达,并能增加P-gp外排泵活性。

基因多态性对吉西他滨疗效影响的研究进展

随着药物基因组学、药物遗传学的发展,基因指导下个体化治疗成为提高化疗疗效的有效途径之一。确定药物的相关预测性分子标志物有助于指导临床治疗,提高疗效。吉西他滨(gemcitabine)作为多种肿瘤的有效化疗药物,其疗效与不良反应的差异与相关基因多态性的关系日益受到人们的关注。本文就吉西他滨各相关酶的基因多态性情况及其对疗效的影响进行综述。

现代多媒体技术在心脏听诊教学中的应用

心脏听诊是诊断学教学中的重点和难点，传统的教学方法存在下列弊端：心脏杂音听诊病源减少、教患矛盾增加、学生听诊学习难度较大等；现代多媒体教学法相对具有下列优势：（1）减少临床需要实际听诊患者人数，有助于解决心脏杂音病源下降的问题；（2）缓解日益激化的教患矛盾；（3）有助于循序渐进教学；（4）能反复温习，有助于熟悉或掌握心脏听诊体征等。相信随着现代多媒体技术的不断发展，其在心脏听诊教学中的应用会越来越多。将现代多媒体技术和传统的教学法有机结合起来，必将大大提高心脏听诊教学的质量。

白藜芦醇四甲氧基衍生物提高耐药人乳腺癌细胞MCF-7/DOX对阿霉素的敏感性

目的:研究白藜芦醇四甲氧基衍生物(TMS)对人乳腺癌细胞MCF-7和耐阿霉素(doxorubicin,DOX)的人乳腺癌细胞MCF-7/DOX这两株细胞增殖的影响,探讨白藜芦醇四甲氧基衍生物能否提高耐药细胞MCF-7/DOX对阿霉素的敏感性。方法:用SRB法检测白藜芦醇四甲氧基衍生物的细胞毒性,同时检测白藜芦醇四甲氧基衍生物和DOX联用后对细胞株MCF-7/DOX药物敏感性的影响,用Western-blot方法检测不同浓度的白藜芦醇四甲氧基衍生物对P-gp蛋白表达的影响,罗丹明转运实验考察白藜芦醇四甲氧基衍生物对P-gp转运活性的影响。结果:白藜芦醇四甲氧基衍生物(7.5、15、30μg/ml)能够有效抑制耐药细胞MCF-7/DOX的增殖,然而与此相应的浓度范围内白藜芦醇的细胞增殖抑制作用较差,使用非细胞毒性剂量(3、6μg/ml)的白藜芦醇四甲氧基衍生物能有效提高MCF-7/DOX对阿霉素的敏感性,Western-blot结果显示6μg/ml的白藜芦醇四甲氧基衍生物能够明显下调P-gp的表达,此外,罗丹明转运实验显示白藜芦醇四甲氧基衍生物组(3、6μg/ml)细胞内罗丹明123积累量均有上升,表明白藜芦醇四甲氧基衍生物可以抑制P-gp的转运活性。结论:白藜芦醇四甲氧基衍生物可通过抑制P-gp表达和活性的方式增加MCF-7/DOX对阿霉素的敏感性,从而逆转耐药。

环磷酰胺所致小鼠肝损伤的动态变化

环磷酰胺(cyclophosphamide,CPA)是烷化剂类抗肿瘤药物,在体内由细胞色素P450酶代谢为4-羟基环磷酰胺发挥抗肿瘤作用。CPA除引起骨髓抑制、膀胱炎等毒性反应外,还会引起肝损伤。本研究旨在评估CPA在小鼠体内产生肝损伤的动态变化过程。雄性BALB/c小鼠单次腹腔注射CPA(200 mg·kg^-1),分别于0、2、6、12和24 h后采集血清和肝脏样本进行生化和病理检测。动物实验方案经中山大学动物伦理委员会批准。结果表明,小鼠给予CPA 2 h后开始出现肝损伤,在12 h肝损伤最严重,血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和丙二醛(MDA)显著升高,还原型谷胱甘肽(GSH)显著下降,广泛可见肝细胞水肿并伴有空泡变性,而24 h之后肝损伤显著改善。由于CPA产生氧化应激损伤,机体应激性激活核因子红细胞系相关因子-2(nuclear factorerythroid 2-related factor 2,NRF2)信号通路,上调NRF2下游醌氧化还原酶1(quinine oxidoreductase 1,NQO1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)和谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基(glutamate cysteine modifier subunit,GCLM)的表达,从而抵抗氧化应激损伤。本研究阐明了CPA所致肝损伤随时间的动态变化过程,并探讨了NRF2介导的机体保护机制的动态变化,为抵抗CPA所致肝损伤提供了科学数据。

五味子醇乙促进小鼠肝增大的脂质组学研究

五味子醇乙(schisandrol B, SolB)是传统中药五味子的活性单体之一。前期研究发现SolB在抵抗药源性肝损伤和促进肝再生的过程中,具有促进良性肝增大的作用,但肝增大过程中内源物质的变化尚不清楚。本研究通过脂质组学研究SolB所致肝增大过程的脂质组变化。本动物实验经中山大学动物伦理委员会批准。雄性C57BL/6小鼠腹腔注射SolB (100 mg·kg^-1·d^-1) 5 d后采集血清和肝脏样本进行生化和病理检测,采用基于Q Exactive UHPLCMS/MS系统的脂质组学方法对肝脏样本进行脂质组学检测与分析。结果发现SolB显著促进正常小鼠的良性肝增大(与肝损伤、炎症无关),小鼠肝脏出现脂质累积。脂质组学分析发现35种有显著差异的脂质,其中甘油三酯(triglycerides, TG)变化最为显著,其含量显著升高,提示SolB所致肝增大过程能量合成增加。本研究阐明了SolB所致肝增大的脂质组变化,初步解释了SolB促进肝增大过程对脂质的影响。

五酯片不同给药间隔抵抗扑热息痛所致肝损伤的作用及机制研究

扑热息痛(paracetamol)又称对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP),其导致的药源性肝损伤在世界范围内普遍存在。五酯片(南五味子醇浸膏,Wuzhi Tablet,WZ)是临床上常用的护肝药。作者前期研究表明,WZ预处理三天后与APAP同时给药可抵抗APAP所致肝损伤,但单次给予WZ与APAP不同给药间隔对肝损伤的作用及机制尚不清楚。本文研究了单次给予WZ与APAP不同间隔给药后的肝损伤指标变化、APAP代谢物生成情况和细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)代谢酶活性,考察了WZ单次不同给药间隔抵抗APAP所致肝损伤的作用及机制。动物实验经中山大学动物伦理委员会审核通过。结果表明,单次给予WZ 0、0.5及2 h后再给予APAP,均可显著减轻APAP所致肝损伤,其机制为抑制CYP450酶介导的APAP代谢激活,减少APAP毒性代谢物的生成。本研究进一步确证了WZ与APAP间隔0、0.5及2 h给药具有显著抵抗APAP所致肝损伤的作用,WZ通过抑制APAP代谢激活相关的CYP450酶活性,从而抵抗APAP所致肝损伤,为五酯片防治APAP所致肝损伤提供新数据。

微探针电喷雾串联质谱方法快速检测睾酮和右美沙芬的代谢稳定性

探针电喷雾电离(probe electrospray ionization,PESI)技术是原位电离技术的典型代表之一,但由于其载样稳定性差,该技术在定量分析中的应用受到很大制约。作者前期对现有PESI技术的定量分析性能进行改进,开发了新型微探针电喷雾串联质谱(micro-pen electrospray ionization tandem mass spectrometry,μPen-ESI-MS/MS)。本研究旨在探索其在药物代谢稳定性及CYP450酶活力评价中的应用。建立检测肝微粒体孵育体系中的CYP3A4底物睾酮与CYP2D6底物右美沙芬的μPen-ESI-MS/MS检测方法,并对分析方法的线性、精密度和准确度进行考察;并应用该分析方法检测睾酮和右美沙芬在肝微粒体孵育体系中的代谢稳定性。结果表明,该μPen-ESI-MS/MS方法分析效率高,一个样品的喷雾时长约为0.3 min。在设定的定量范围内,睾酮和右美沙芬分析方法的标准曲线线性良好(R2>0.99),睾酮的批内和批间准确度为95.9%~109.3%,批内和批间精密度(RSD)为2.4%~13.5%。右美沙芬的批内和批间准确度为90.5%~107.3%,批内和批间精密度(RSD)为3.4%~12.1%。睾酮和右美沙芬在肝微粒体孵育体系中快速代谢(浓度下降一半所需时间分别为12和14 min)。综上,本研究建立了睾酮及右美沙芬的代谢稳定性评价快速灵敏的μPen-ESI-MS/MS分析方法,为药物代谢酶CYP3A4和CYP2D6的活性检测提供了新方法和新策略。