三种阳离子脂质体介导血管内皮细胞基因转染效率的比较

目的:评价不同阳离子脂质体介导基因转染血管内皮细胞的转染效率。方法:实验于2006-12/2007-02在中山大学生化实验室及广州市创伤外科研究所完成。采用增强型绿色荧光蛋白基因为报告基因,分别采用Lipofectin、Lipofectamine、Dosper3种不同的阳离子脂质体为载体,转染人脐静脉血管内皮细胞。在24孔板中,每孔加入人脐静脉血管内皮细胞悬液(1×106个细胞),各孔分别加入3种不同阳离子脂质体增强型绿色荧光蛋白质粒复合物,分别于培养24,48h后用荧光显微镜及流式细胞仪测定增强型绿色荧光蛋白在细胞内的表达及转染效率。结果:3种不同阳离子介导的增强型绿色荧光蛋白基因转染的人脐静脉血管内皮细胞内均有绿色荧光蛋白表达,24h后明显,48h后达高峰。Dosper介导组绿色荧光细胞百分比明显高于Lipofectin介导组及Lipofectamine介导组,差异有非常显著意义(P<0.01)。结论:Dosper介导的血管内皮细胞基因转染效率较高,较适合作为血管内皮细胞的基因转染载体。

中西药四联疗法治疗狼疮肾炎探索

目的观察中西药四联疗法治疗狼疮肾炎的效果。方法方案1为小剂量泼尼松+硫唑嘌呤+氨甲碟呤+补肾康,方案2为小剂量泼尼松+硫唑嘌呤+氨甲碟呤+火把花根,疗程3个月,观察半年到1年。结果7例采用方案1,显效4例(其中2例显著改善),无效3例;12例采用方案2,显效8例(其中5例显著改善),无效4例。结论该疗法法治疗狼疮肾炎有一定效果,以方案2较佳。

腺病毒载体的安全性和靶向性

腺病毒载体是基因治疗的极具潜力的载体系统,其安全性和靶向性是影响其临床应用的关键问题。本文就这两个问题的新进展作一综述。

^(99m)Tc-HL91肺肿瘤同机融合显像对肺癌的应用价值

目的探讨乏氧显像剂99mTc-HL91肺显像对肺鳞癌诊断的临床价值。方法使用SPECT对32例肺癌和23例非肺癌患者静脉注射99mTc-HL91925MBq后行1、6h胸部平面显像及4h断层+CT融合显像。利用计算机感兴趣区(ROI)技术计算1、6h靶/非靶放射性计数比值(T/NT),结果32例肺癌1、6h平面显像T/NT比值分别为1·185±0·057及1·435±0·080,配对T检验,两组资料之间的差别有显著性(t=20·299,P<0·01);对照组23例1、6h平面显像双肺中部对应感兴趣区L/R分别为0·978±0·055和0·980±0·030。肺癌组与对照组资料1h与1hT/NT值比较,差异无显著性(F=0·039,t=13·175,P>0·05);6h与6hT/NT值比较,差异有显著性(F=26·349,t=26·035,P<0·01)。32例肺癌患者4h断层显像T/NT比值为4·735±1·337。与1h、6hT/NT分别比较,其差异具有显著性,(t值分别为14·811、13·607P均<0·01)。结论1、6h平面显像T/NT比值分别为随时间增加而增加,静脉注射4~6h肿块显影清晰。肺癌能大量摄取99mTc-HL91,癌组织中存在乏氧细胞。

脐血干细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症

目的比较假肥大型肌营养不良症(Duchennemusculardystrophy,DMD)患者经脐血干细胞移植治疗前后其肌肉再生、抗肌萎缩蛋白表达和运动功能的改变;以及评价治疗的安全性。方法对1例经基因分析和肌肉活检及抗肌萎缩蛋白检测确诊的、已丧失行走能力的DMD患儿,经HLA配型,在脐血库中寻找到一个全相合的脐血供体。采用白消安+环磷酰胺+兔抗胸腺淋巴细胞球蛋白预处理后进行异基因脐血干细胞移植;术后采用环孢素A和骁悉方案预防移植物抗宿主反应(graftversushostreaction,GVHD)。同时定期检测原发病的生化指标如血清肌酸激酶(creatinekinase,CK)、造血重建的植入证据(血型转变、肌肉和血液系统的聚合酶链反应短串联重复序列分析)、缺陷基因是否纠正、新生肌肉是否出现、肌肉中抗肌萎缩蛋白是否表达和运动功能是否改善。结果(1)中性粒细胞在脐血干细胞移植后第15天(+15天)达到0.5×109/L,白细胞在+25天达正常水平;血小板于+22天达到20×109/L;血红蛋白维持于85～100g/L。术后140天骨髓穿刺提示三系生长旺盛;(2)移植后140天血型转为供体AB型。至今没有出现移植物抗宿主反应。(3)术后18天、30天、43天、55天、74天、233天患者外周血DNA和术后140天、183天、235天骨髓细胞DNA经PCRSTR检测为供者独立植入;(4)患儿术后60天取外周血做基因分析,显示19号缺失的外显子得到完全纠正,患儿转变为正常基因型;(5)患儿在移植后75天的肌肉活检可见新生肌管形成,抗肌萎缩蛋白免疫组化呈弱阳性,少数为强阳性反应,DNA分析:供者基因DNA占1%～13%;移植后126天抗肌萎缩蛋白免疫组化检测显示阳性的肌纤维明显增多,供者基因DNA上升至2.5%～25%;(6)患儿血清CK从移植治疗前的5735U/L降至274U/L;(7)术后100天体检发现患儿肌力略有改善,肢端温暖。结论异基因脐血干细胞移植治疗DMD,可在移植后短期内重建造血功能、血清CK显著下降、肌肉抗肌萎缩蛋白表达,患儿运动有所改善,提示造血干细胞移植将有益于DMD的治疗。