抗生素与慢性肝病患者消化道真菌定植和感染的前瞻性研究

目的 :探讨抗生素的使用及其使用方式、使用天数和不同种类的抗生素与慢性肝病患者消化道真菌定植和感染的关系。方法 :选取慢性肝病患者 85例定期取咽拭子和肛门拭子做镜检和培养 ,记录抗生素的使用方式、天数和种类及其它可能的危险因素并进行统计分析。结果 :联合使用抗生素真菌定植和感染发生率最高 ;抗生素使用 10～ 2 0d之间容易出现真菌定植和感染 ;诱发真菌定植和感染的抗生素按其发生率从高到低的顺序为三代头孢类 -青霉素加酶抑制剂类 -喹诺酮类。结论

长期培养的大鼠原代肝细胞功能和形态学观察

目的研究大鼠原代肝细胞长期体外培养后功能和形态的变化。方法采用两步胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞,并用Percoll分离液进行密度梯度离心进一步纯化肝细胞,采用0.4%台盼蓝染色观察细胞活力。然后将细胞接种于HepatoZYME-SFM培养基中培养,定期收集肝细胞培养液上清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白、尿素氮的水平。采用乙氧基试卤灵O-脱乙基酶活性(EROD)方法检测肝细胞P450的CYPⅠA1功能。结果新鲜分离的大鼠肝细胞总数(2-3)×108cells/wholeliver,Percoll分离液纯化后活力和纯度在90%以上。HepatoZYME-SFM培养下肝细胞生长良好并保持正常形态。AST、ALT水平在培养3d后下降显著,6-9d后趋于相对稳定的低水平。白蛋白的分泌功能、尿素合成能力在18d内维持在较高水平。可在3-6d检测到CYPⅠA1酶活性。结论Percoll液纯化新分离肝细胞可提高其活率和纯度,HepatoZYME-SFM培养条件下肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力,适合肝细胞的体外长期培养和功能研究。

HGV NS5A区部分基因的克隆及表达

目的 构建含HGVNS5A区基因的原核表达载体。方法 采用PCR方法从重组了HGV 6 6 72 - 72 92区段基因的pUC19中扩增出HGV 6 86 4- 72 77nt片段 ,定向克隆入pGEMEX1质粒 ,再经SacⅠ、HindⅢ酶切亚克隆入高效表达载体pRSETA。结果 重组pRSETA 经序列测定证实插入基因为目的基因 ,符合表达框架 ,经IPTG诱导 ,在BL2 1(DE3)菌株中表达连接 6个组氨酸的HGVNS5A融合蛋白。Westernblotting显示在Marker约 2 5kDa处可见明显的蛋白带 ,与预期结果一致。结论 成功构建了重组HGVNS5A区基因表达载体 ,在BL2 1(DE3)中能有效表达。

干扰素-γ联合苦参素治疗慢性乙型肝炎肝纤维化20例疗效观察

目的:观察干扰素-γ联合苦参素治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效。方法:将60例患者随机分成3组,每组20倒。A组予以安慰剂,B组予以干扰素-γ,C组予以干扰素-γ加苦参素治疗。结果:A组显效0例,有效1例,无效19例,总有效率5％;B组显效2例,有效5例,无效13例,总有效率为35％;C组显效4例,有效9例,无效7例,总有效率为65％。3组总有效率比较,B组、C组与A组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01)。C组血清HBV—DNA阴转率最高,肝纤维化程度及血清纤维化指标均有明显改善,疗效明显优于其他2组。结论:干扰素-γ联合苦参素对慢性乙型肝炎肝纤维化具有抗肝纤维化作用。

小儿肝硬化38例临床分析

目的 探讨小儿肝硬化的病因和临床特征。方法 对38例小儿肝硬化进行病因、临床特征及治疗和转归的分析,并与同时期成人肝硬化对比。结果 小儿肝硬化23例(60.5％),其中乙型肝炎19例;其次胆汁性肝硬化4例(10.5％)、前瞻性静脉海绵样变性3例(7.9％)。小儿肝硬化主要症状为乏力、纳差、浮肿,体征以肝脾肿大、腹水、黄疸多见,肝掌、蜘蛛痣少见。结论 实验室检查对小儿肝硬化无特异性诊断价值。小儿肝硬化的预后除与病因有关外,还取决于早期诊断和及时治疗。

乙型肝炎病毒基因的巢式聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分型及初步应用

目的 用改进的乙型肝炎病毒 (HBV)巢式聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)的基因分型方法初探广州地区HBV基因型分布状态。方法 设计巢式PCR扩增前S基因 ,经限制性内切酶AvaⅡ和DpnⅡ酶切鉴别HBVA～G基因型 ;并对 14 0份乙型肝炎患者血清进行基因分型 ,其中随机挑选 3份进行克隆测序 ,并对 2 0份患者血清进行巢式PCR RFLP重复分型试验 ,以验证此分型技术的稳定性和特异性。同时采用PCR和巢式PCR对 92份乙型肝炎病毒e抗原 (HBeAg)阴性血清进行HBVDNA阳性率检测比较。结果 基因分型与测序结果一致 ;基因分型重复试验符合率10 0 % ;92份HBeAg阴性血清经PCR和巢式PCR扩增HBVDNA的阳性率分别为 2 0 7%和 6 8 5 %。14 0份乙型肝炎患者血清中HBV基因型以C型 (94份 )和B型 (4 2份 )为主 ,偶见A型 (4份 )。结论 巢式PCR RFLPHBV基因分型方法具有良好的敏感性、特异性、稳定性 ,且操作简便 ,适用于临床和流行病学调查研究。