不同年龄段人骨髓间充质干细胞生物学特性的研究

本研究通过对不同年龄段人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSC)的研究探讨MSC生物学特点与年龄的关系,从而为临床寻找合适供体,迅速获取所需MSC提供实验依据。骨髓供体按年龄分为4组:A组(胚胎)、B组(0-20岁)、C组(20-40岁)和D组(40岁以上)。观察各组骨髓MSC的生长、增殖、分化特点;用流式细胞仪检测细胞表面标志,用ELISA方法检测培养上清造血相关因子的水平;进行核型分析及成瘤试验;评价不同年龄段供体骨髓MSC在临床造血干细胞移植中的应用价值。结果显示:各组骨髓均可培养出MSC,各组MSC表面标志无显著差异;各组MSC均具有向脂肪细胞和成骨细胞分化的能力;原代培养B组骨髓MSC含量较多,贴壁时间早,传代时间短,P0至P1时间为5.5天,传至P10需33天,8×106MNC培养至P10时MSC数达(5.19±2.15)×1010;A、C、D组P0至P1时间分别为15、7和13天,传至P10分别需50、60和72天,8×106MNC培养传代至P10时MSC数分别为(4.98±2.08)×1010、(1.86±0.47)×1010、(0.64±0.22)×1010。A组MSC较细长,细胞融合后生长无接触抑制,P15增殖速度开始减缓;B、C、D组MSC形态相似,有生长接触抑制B组P10开始增殖减缓,C、D组P8开始增殖减缓;B组MSC培养上清中SCF、FLT3L、IL6及SDF1水平高于其它各组。各组间细胞的增殖指数无显著差异。核型分析均为正常核型,成瘤实验为阴性。结论:MSC增殖生长特性与年龄密切相关;根据临床造血干细胞移植的需要,0-20岁年龄组骨髓是短时间内获取足够细胞数的理想供体,分泌HGFs水平亦占优势;0-20岁组骨髓MSC的生物学特性优于其他各组,可以作为MSC的供源。

体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为造血干/祖细胞方法的初步研究

目的 :探讨体外定向诱导胚胎干细胞 (ESC)发育为造血干细胞 (HSC)的方法。方法 :将小鼠E14胚胎干细胞在含干细胞生长因子 (SCF)和血管内皮生长因子 (VEGF)的甲基纤维素培养基中首先诱导发育为胚胎体(EB) ,再将EB置于均含SCF、VEGF、IL - 3、IL - 6及促红细胞生成素 (EPO)的 3种不同培养体系中定向分化为HSC ,并观察HSC表面标志性抗原、造血集落形成及瑞氏 -姬姆萨染色的结果。结果 :经两阶段诱导ESC分化为HSC ,发现在甲基纤维素半固体培养体系中HSC发育缓慢 ,分化 14d后CD34+/Sca - 1+细胞数最高为 ( 31 5± 4 7) %;而在骨髓基质细胞饲养层上HSC发育较快 ,细胞数量较多 ,分化第 10dCD34+/Sca - 1+细胞数即达到峰值 ,为 ( 47 8±6 3) %;骨髓基质细胞饲养层 +胎肝基质细胞上清培养体系中HSC发育同样迅速 ,所产生的CD34+/Sca - 1+细胞数量在 3个体系中最高 ,为 ( 5 3 6± 7 2 ) %。经瑞氏 -姬姆萨染色证实上述细胞为早期造血细胞 ,均有形成各系造血细胞集落的能力。结论 :使用骨髓基质细胞饲养层 +胎肝基质细胞上清培养体系及SCF、VEGF、IL - 3、IL - 6及EPO等细胞因子 ,通过两阶段诱导分化 ,可从小鼠ESC获得较高比例的HSC。

CD158分子表达在他克莫司、霉酚酸酯联合甲基强的松龙治疗顽固性慢性移植物抗宿主病中的追踪观察

目的 :探讨慢性移植物抗宿主病 (graft-versus-hostdisease,GVHD)症状期及缓解期CD15 8分子的表达变化。方法 :观察异基因造血干细胞移植后发生广泛性慢性GVHD的儿童患者 ,应用他克莫司 (FK5 0 6 ) ,霉酚酸酯(MMF)和甲基强的松龙 (MP)联合治疗的毒副作用和疗效 ;同时采用流式细胞仪检测外周血中CD15 8在NK细胞和T细胞的表达 ,比较治疗前后CD15 8的表达。结果 :移植前、慢性GVHD症状期和治疗后CD4 + CD15 8a+ 和CD4 +CD15 8b+ 表达水平极其低下 ,但无明显差异。 5例急性GVHD患者CD3+ CD15 8b+ 和CD3+ CD8+ CD15 8b+ 的表达水平分别为 4 . 97%± 2 . 36 %和 4 . 5 8%± 2 90 % ,与移植前相比差异显著 (P <0 . 0 5 ) ,CD3-CD16 + CD15 8b+ 的表达也明显高于移植前 (P <0 . 0 5 )。 6例慢性GVHD患者症状期 ,CD3+ CD15 8b+ 和CD3+ CD8+ CD15 8b+ 的表达均高于移植前的水平(P <0 . 0 5 ) ;在缓解期 ,CD3+ CD15 8b+ 、CD3+ CD8+ CD15 8b+ 和CD3-CD16 + CD15 8b+ 的表达水平逐渐下降 ,与慢性GVHD症状期相比差异显著 (P <0 . 0 5 ) ,与移植前无明显差异。移植后 6 - 12个月CD3-CD16 + CD15 8b+ 表达水平与移植前无明显差异。结论 :CD15 8b分子在T细胞表达水平增加与慢性GVHD的发生有关 ,FK5 0 6 ,MMF和MP联合有?

CD40L表达在异基因造血干细胞移植中GVHD发生的意义

目的 初步探讨在异基因造血干细胞移植 (HSCT)中发生移植物抗宿主病 (GVHD)患者CD40L表达的变化以及意义。方法 HSCT治疗重型 β 地中海贫血 (n =1 2 )和遗传性溶血性贫血 (n =1 )成功植入的儿童患者 ,其中脐血移植 (UCBT)8例 ,异基因外周血造血干细胞移植 (allo PBSCT ) 5例 ,在移植前、移植后发生GVHD时采用流式细胞仪检测和比较外周血中CD40L和CD40的表达。结果 3例UCBT无GVHD ,其余均发生了Ⅰ～Ⅳ度急性GVHD。急性GVHD发生时CD4+CD40L+和CD8+CD40L+T细胞表达明显升高 ,allo PBSCT者更明显 ;慢性GVHD发生时患者的CD40L+、CD2 5+和CD69+在CD4+和CD8+T细胞上的表达亦增加。CD1 9+CD40 +B细胞的表达在UCBT和allo PBSCT的 3个月内则一直处于低于正常的水平。结论 CD40L高表达与GVHD的发生相关 ,提示CD40

儿童腺病毒感染162例临床分析

为加深对腺病毒感染的临床认识，本文收集了近1年来我院腺病毒感染患儿162例临床资料，回顾性分析其特点。并探讨如下。

植入辅助细胞与异基因造血干细胞移植

植入辅助细胞是近来发现的一组独特的细胞群,其在异基因造血干细胞移植中有辅助促进异基因造血干细胞植入,减少移植物抗宿主病的发生及提高移植成功率的作用,具有潜在而广泛的临床应用价值。本文主要介绍植入辅助细胞的特性及最新研究进展。

利多卡因、蒙脱石混悬液治疗儿童手足口病伴发口腔溃疡48例疗效观察

目的：观察利多卡因、蒙脱石混悬液治疗儿童手足口病伴发口腔溃疡的疗效。方法：48例手足口病患儿随机分人对照组和治疗组。对照组应用抗病毒、对症支持治疗,治疗组在对照组的基础上加用利多卡因、蒙脱石混悬液涂于口腔溃疡处。结果：治疗组口腔溃疡愈合和进食改善至正常的时间较对照组明显缩短(P＜0.05)。结论：利多卡因、蒙脱石混悬液在加快儿童手足口病并口腔溃疡的愈合和改善进食情况方面具有一定效果。

肾脏疾病合并头孢曲松相关假性胆结石患儿的临床分析

目的探讨肾脏疾病患儿合并头孢曲松相关假性胆结石的临床特点。方法回顾性分析3例合并头孢曲松相关假性胆结石的肾脏疾病患儿临床资料。结果病例1，男，11岁，诊断“肾病综合征”，因“胃肠炎”予头孢曲松2g/d[50mg／（kg·d）]抗感染，3d后发现胆囊内泥沙样沉积，伴纳差、恶心；停药16d后胆囊结石消失。病例2，男，10岁，诊断“急性链球菌感染后肾小球肾炎、肾功能不全”，因“胃肠炎”予头孢曲松1．5g/d[30mg／（kg·d）]，疗程6d时发现胆囊结石，伴恶心、呕吐和腹痛，Murphy’s征阳性；停药18d后胆囊结石消失。病例3，男，12岁，诊断“。肾病综合征”，因“胃肠炎？”给予头孢曲松2g/d[40mg／（kg·d）]联合甲硝唑抗感染、疗程2周，感染控制，但有中上腹压痛，停药3d后发现胆囊结石；停药2个月后复查结石回声消失。结论上述3例患儿出现胆囊结石时头孢曲松治疗剂量较低、结石出现早、临床表现相对重，可能与肾脏疾病患儿同时存在血液浓缩、高凝状态、肾功能不全或补充钙剂等高危因素有关。

含氟达拉滨的预处理方案在脐血移植治疗重型β地中海贫血的疗效观察

目的观察在'Bu+Cy+ATG'典型预处理中加入氟达拉滨(Flu)对脐血造血干细胞移植(UCBT)治疗重型β地中海贫血(地贫)的植入和移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法 2000年6月至2004年6月中山大学附属二院儿科对22例行脐血干细胞移植的地贫患儿,按预处理方案是否含Flu分为无Flu组(8例)和Flu组(14例).无Flu组:Bu,Cy和马抗人胸腺细胞球蛋白(ATG);Flu组在此基础上加Flu.观察两组植入率,急、慢性GVHD(aGVHD、cGVHD)的发生率及其程度.结果无Flu组8例患儿HLA全相合5例,不全相合3例,接受单个核细胞(MNC)为7.03×107/kg[(4.7～12.7)×107/kg],其中CD34+数为4.0×105/kg[(0.6～11.7)×105/kg],6例植入,中性粒细胞绝对计数(ANC)≥0.5×109/L时间平均为18d,血小板(BPC)≥20×109/L时间平均为36.5d,4例发生aGVHD,1例发生cGVHD;Flu组14例,HLA全相合6例,不全相合8例,平均输入供者MNC为7.53×107/kg[(3.4～10)×107/kg],其中CD34+数为5.01×105/kg[(0.6～11.7)×105/kg],4例植入,ANC≥0.5×109/L时间平均为16d,BPC≥20×109/L时间平均为72d,2例发生aGVHD,3例发生cGVHD;两组植入率、aGVHD及cGVHD发生率无明显差异.Flu组的HLA不全相合病例多于非Flu组.结论 allo-HSCT治疗地贫中,不限定HLA相合条件下,预处理中加入Flu对植入率、aGVHD及cGVHD发生率无明显影响.