miRNA与口腔潜在恶性病变的发生发展

口腔潜在恶性病变(OPMD)是一类具有增高癌变风险的口腔疾病的总称。OPMDs早诊、早防、早治是降低患者癌变率、提高患者总体预后的关键所在。微小RNA(miRNA)是一类小的非编码RNA,参与多条细胞通路的调控,对生物生理、发育及病理过程具有重要影响。miRNA的异常表达在口腔癌中已被广泛报道,其可在OPMDs发生发展中发挥促癌或抑癌的重要作用。本文概述了miRNA在OPMD发生发展中的作用、机制,及其在风险预测、预后评估、靶向治疗方面的潜在应用价值。

ROS/HIF-1信号通路调控口腔鳞状细胞癌肿瘤浸润T淋巴细胞分化的机制

目的:探究口腔鳞状细胞癌(OSCC)肿瘤微环境中活性氧(ROS)对肿瘤浸润T淋巴细胞分化的作用。方法:流式细胞术分析OSCC肿瘤组织和远端正常组织T淋巴细胞各分化亚群比例,ROS试剂盒检测T淋巴细胞各分化亚群ROS表达情况,实时荧光定量RT-PCR检测癌及远端正常组织中低氧诱导因子1A(HIF1A)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、己糖激酶2(HK2)等T淋巴细胞代谢相关基因,利用GEPIA2数据库分析T细胞HIF1A在肿瘤及远端正常组织的差异表达及其与预后的相关性。结果:与正常组织相比,效应T淋巴细胞(CD45RA+CCR7-)在癌组织中所占比例较高(P<0.05);癌组织中CD3+T淋巴细胞的ROS含量高于正常组织(P<0.05),癌组织中效应T淋巴细胞的ROS含量高于效应记忆性T淋巴细胞(P<0.05),正常组织中效应T淋巴细胞和效应记忆性T淋巴细胞中ROS含量未见统计学差异(P>0.05);癌组织中T淋巴细胞HIF1A、GLUT1、HK2表达高于正常组织T淋巴细胞(P<0.05);T细胞HIF1A水平在肿瘤组织中比较高,但未见统计学差异(P>0.05),肿瘤组织中效应T细胞的HIF1A水平明显高于远端正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05);T细胞高表达HIF1A的肿瘤相对预后较好(P<0.05)。结论:OSCC肿瘤微环境中ROS/HIF-1信号通路上调与肿瘤组织中高比例的效应T淋巴细胞存在高度相关性。

M2巨噬细胞外泌体对高糖高胰岛素条件下小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨M2巨噬细胞外泌体(M2 macrophage exosomes,M2-exo)对高糖高胰岛素条件下小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchyml stem cells,BMSCs)成骨分化及Hedgehog信号通路的影响。方法诱导小鼠巨噬细胞系RAW 264.7向M2极化后,提取并鉴定M2-exo,检测BMSCs对外泌体的摄取内吞。将BMSCs分为正常对照组(Control组,使用不含胰岛素、不含M2-exo,且葡萄糖浓度为5.5 mmol/L成骨诱导培养基)、高糖高胰岛素组(HGI组,使用含25 mmol/L葡萄糖及174 nmol/L胰岛素的成骨诱导培养基)及高糖高胰岛素M2-exo干预组(HGI+M2-exo组,使用与HGI组相同的培养基,并分别添加6、30、60μg/mL的M2-exo),成骨诱导7 d后行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色,成骨诱导14 d后行茜素红染色,评估各组BMSCs成骨分化能力。另取Control组、HGI组、HGI+30μg/mL M2-exo组BMSCs细胞,成骨诱导培养14 d后(qPCR)及成骨诱导21 d后(Western blot)检测成骨及Hedgehog信号通路相关基因及蛋白的表达。结果成功诱导M2巨噬细胞极化,M2极化表面标志物CD206呈强阳性表达。M2-exo呈典型的类圆形双层膜性囊泡结构,粒径主要分布于50~125 nm之间(占总粒子数的99.14%),外泌体标志蛋白CD9、CD63和CD81呈阳性表达。免疫荧光显示M2-exo可被小鼠BMSCs摄取内化。成骨诱导7 d后,HGI组BMSCs的ALP活性低于Control组,经6μg/mL、30μg/mL及60μg/mL的M2-exo干预后,HGI+M2-exo组ALP活性有所逆转,与HGI组相比差异有统计学意义(P<0.05);成骨诱导14 d后,HGI组矿化结节数量较Control组减少,仅HGI+30μg/mL M2-exo组干预后其矿化水平高于HGI组(P<0.05)。qPCR结果显示,HGI组成骨分化相关基因Alp、Runx2、Ocn及Hedgehog通路相关基因Gli1、Smo、Ptch1 mRNA水平与Control组相比均有不同程度的降低,而30μg/mL M2-exo干预可促进这些基因的上调,与HGI组相比差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,HGI组成骨相关蛋白RUNX2、COL1A1及Hedgehog通路蛋白GLI1的表达下调,而经30μg/mL M2-exo干预可促进COL1A1及GLI1的表达上调,与HGI组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论高糖高胰岛素对BMSCs成骨分化具有抑制作用。M2-exo干预后,BMSCs的Hedgehog信号通路激活且成骨分化能力增强,提示M2-exo具有用于糖尿病骨修复的潜力。