α2-巨球蛋白对X线照射后人皮肤成纤维细胞的抗氧化及抗纤维化的作用

【目的】研究α2-巨球蛋白(α2M)对X线照射后人皮肤成纤维细胞(HSF)超氧阴离子(.O_2^-)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和HSF细胞向肌成纤维细胞转化过程中的影响。【方法】分别使用0、5、10、15、20 Gy X线照射HSF细胞,在照射后第1天检测细胞培养基上清液中。O_2^-含量、SOD活性的变化,在照射后第5天采用Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达变化,以选定合适的照射剂量。用以上合适剂量照射HSF细胞,分别于照射前1 h、照射后1 h实验组细胞培养基中加入终浓度为0.25 mg/m L,0.5 mg/mL的α2M,检测并比较不同实验组细胞培养基上清液中.O_2^-含量、SOD活性和α-SMA蛋白表达的变化情况。【结果】5~20 Gy X线照射HSF细胞后,.O_2^-含量逐渐增多,SOD活性逐渐降低,α-SMA蛋白表达量逐渐升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。10 Gy X线照射后1 h加入α2M,可明显减少照射后HSF细胞。O_2^-含量,提高SOD活性,下调放射后HSF细胞α-SMA的蛋白表达,差异具有统计学意义(P<0.05),照射前1 h给药则无明显变化。【结论】X线照射后的HSF细胞明显增加.O_2^-释放量,同时SOD活性降低,并有向肌成纤维细胞转化的趋势;而X线照射后加入α2M可明显减少受照射HSF细胞的.O_2^-释放量,提高其SOD活性,并抑制向肌成纤维细胞转化的趋势,说明α2M可通过抗氧化和抗纤维化起到放射保护作用。

p53在低氧调控人牙周膜成纤维细胞增殖与凋亡中的作用

目的:初步探讨p53在低氧抑制人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)增殖、促进其凋亡中的作用。方法:体外正常氧(20%O_2)和低氧(1%O_2)培养PDLCs细胞48 h,Wester n免疫印迹和实时定量PCR检测p53与HIF-1α表达水平;通过小干扰RNA(Si-HIF1α)转染PDLCs,验证敲低HIF-1α表达后p53水平变化;进一步通过小干扰R NA(Si-p53)转染PDLCs,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测敲低p53后PDLCs细胞增殖能力差异;流式细胞术比较敲低p53后PDLCs凋亡变化。结果:PDLCs低氧培养48 h后p53与HIF-1α均显著升高,Si-HIF1α转染PDLCs并在低氧培养后HIF-1α表达明显降低,同时伴随p53下降;进一步Si-p53转染PDLCs并于低氧培养后p53水平降低,但HIF-1α表达变化不大,细胞活性显著抑制,凋亡水平增高。结论:低氧微环境中升高的HIF-1α可进一步激活p53表达,进而抑制PDLCs增殖并促进其凋亡。

亲水性钛表面微纳米形貌对人牙周膜成纤维细胞增殖与成骨分化的影响

目的:探讨亲水性钛表面微纳米形貌对人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)增殖与成骨分化的影响。方法:前期已通过阳极氧化法和喷砂碱热法构建相似微纳米形貌,但显示不同亲水性的钛表面,两组钛片表面接种PDLCs,采用CCK8法在培养1、4、7、14天时检测PDLCs细胞活性;第7天和14天时检测总蛋白浓度与碱性磷酸酶(ALP)活性,并在第7天时检测成骨标志物ALP、I型胶原(COL1)与成骨特异性转录因子2 (RUNX2)的mRNA表达水平。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:相比阳极氧化组,亲水性更强的喷砂碱热组PDLCs在接种4、7、14天后细胞活性更高;培养7、14天后,喷砂碱热组PDLCs的总蛋白浓度、ALP活性均高于阳极氧化组;第7天时,喷砂碱热组PDLCs中ALP、COL1与RUNX2的mRNA表达水平均高于阳极氧化组。结论:喷砂碱热组钛表面微纳米形貌较阳极氧化组显著促进PDLCs增殖与成骨分化,该过程可能与其良好的亲水性有关。

p53/CXCL12在亲水性钛表面微纳米形貌促进人牙周膜成纤维细胞成骨分化中的作用

目的:探讨p53/CXCL12在亲水性钛表面微纳米形貌促进人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)成骨分化中的作用。方法:前期已采用阳极氧化法和喷砂碱热法构建相似微纳米形貌但亲水性不同钛表面,两组钛表面接种PDLCs,第7天时Western免疫印迹检测p53、CXCL12表达水平;小干扰RNA (Si-p53、SiCXCL12)转染PDLCs,检测分别敲低其表达后p53、CXCL12表达水平变化,比较碱性磷酸酶(ALP)活性,成骨标志物ALP、I型胶原(COL1)、成骨特异性转录因子(RUNX2) mRNA水平变化。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:相比阳极氧化组,亲水性更优喷砂碱热组PDLCs中p53表达降低,CXCL12表达升高。Sip53转染PDLCs后,p53表达降低,CXCL12表达升高。Si-CXCL12转染PDLCs,CXCL12水平降低,p53水平无明显变化,但ALP、COL1与RUNX2的mRNA水平均显著升高。结论:亲水性钛表面微纳米形貌可下调p53,促进CXCL12表达升高,进而促进PDLCs成骨分化。

镍钛形状记忆合金网状支架矫正单侧唇裂鼻畸形术的护理

目的 探讨用镍钛形状记忆合金网状支架矫正单侧唇裂鼻畸形的效果和护理方法。方法 对24例行镍钛形状记忆合金网状支架矫正单侧唇裂鼻畸形术的患者进行观察和护理。结果 本组24例修复成功率100％。结论 做好网状支架的制备工作;增加患者的舒适度和自信心;做好术后患者体位的护理、鼻部护理及饮食指导是确保手术效果的主要措施。

低氧激活HIF-1α抑制人牙周膜成纤维细胞的成骨分化

目的探讨低氧环境对人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)成骨分化的影响,以及低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在该过程中的作用。方法组织块法原代分离牙周膜标本中PDLCs,采用激光共聚焦检测波形蛋白与细胞角蛋白表达。PDLCs分别在常氧(20%体积分数O_2)培养以及低氧(1%体积分数O_2)培养12~72 h,检测常氧组与低氧组PDLCs碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,比较成骨标志物ALP、I型胶原(Collogen-1,COL1)、成骨特异性转录因子(runt related transcription factor 2,RUNX2)的m RNA表达量变化,Western免疫印迹检测HIF-1α表达水平。进一步转染小干扰RNA(HIF-1α-si RNA 1,2),检测低氧环境中PDLCs的HIF-1α水平、ALP活性与成骨标志物m RNA表达变化。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果组织块法成功获取PDLCs,PDLCs中波形蛋白阳性表达、细胞角蛋白阴性表达。低氧环境中培养48 h后PDLCs中ALP活性下降,ALP、COL1、RUNX2的mRNA表达量显著降低,但HIF-1α蛋白表达升高。HIF-1α-si RNA成功敲低PDLCs中HIF-1α表达,敲低HIF-1α的PDLCs在低氧环境中的ALP活性升高,ALP、COL1、RUNX2的mRNA表达量增加。结论长时间低氧处理能抑制PDLCs成骨分化,敲低HIF-1α表达可逆转低氧对PDLCs成骨分化的抑制作用。

低氧激活HIF-1α对人牙周膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的:初步探讨低氧环境对人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)增殖与凋亡的影响,以及低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在该过程中的作用。方法:体外常氧条件和低氧(1%O2)条件下培养PDLCs,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测低氧诱导前后PDLCs生长速度的差异;流式细胞术比较PDLCs凋亡水平的变化。Western免疫印迹和实时定量PCR检测HIF-1α的表达水平。通过小干扰RNA(HIF1α-Si)转染PDLCs,检测低氧诱导下HIF-1α水平、细胞活性以及细胞凋亡水平的变化。结果:人PDLCs在低氧环境中培养48h后细胞活性显著抑制,凋亡水平增高,H IF-1α在蛋白和m R NA水平均显著升高。小干扰RNA(si RNA)转染PDLCs并于低氧下培养后HIF-1α表达明显降低,同时细胞活性增加、细胞凋亡显著下降。结论:低氧能通过上调HIF-1α表达抑制PDLCs增殖并促进其凋亡。

不同钛表面形貌诱导大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响

目的:比较不同钛表面形貌对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法:构建不同形貌钛表面,包括喷砂碱热高温组的纳米针状表面、喷砂碱热低温组的纳米网状表面、喷砂酸蚀的微米凹坑表面和对照组的光滑纯钛表面。各组钛片表面接种rBMSCs,在培养1、3、5、7天后采用CCK8检测各组rBMSCs增殖情况,7、14天检测总蛋白浓度与碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,同时采用实时荧光定量PCR分析7天时成骨相关基因ALP、I型胶原(collagen-I,COL1)与成骨特异性转录因子(runt related transcription factor 2,RUNX2)的mRNA表达量差异。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:相比光滑纯钛组与喷砂酸蚀组,具有微纳米表面形貌的喷砂碱热高温组与喷砂碱热低温组rBMSCs细胞增殖能力显著增强,总蛋白浓度升高,ALP活性增加,ALP、COL1与RUNX2的mRNA表达水平明显上调。结论:钛表面微纳米形貌可促进rBMSCs增殖与成骨分化。

钛表面微纳米形貌通过p53诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的研究

目的:初步探讨钛表面微纳米形貌对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,r BMSCs)成骨分化的影响,以及p53在该过程中的作用。方法:以光滑纯钛表面为对照,采用喷砂碱热法构建微纳米形貌钛表面。钛片表面接种r BMSCs,在3天、7天时检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,实时荧光定量PCR检测7天时成骨标志物ALP、I型胶原(collagen-I,COL1)与成骨特异性转录因子(runt related transcription factor 2,RUNX2)的m RNA表达,同时比较p53表达水平变化。通过小干扰RNA(p53-Si)转染r BMSCs,检测光滑钛片表面上r BMSCs的p53表达、ALP活性以及成骨标志物m RNA表达变化。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:相比光滑纯钛表面,喷砂碱热组钛表面呈三维网状纳米多孔结构,为微纳米钛表面。喷砂碱热组r BMSCs细胞ALP活性比光滑纯钛组增加,ALP、COL1与RUNX2的m RNA表达水平明显上调,但伴有p53表达降低。小干扰RNA(p53-si RNA)转染r BMSCs并在光滑钛表面培养后,ALP活性升高,ALP、COL1、RUNX2的m RNA表达量显著增加。结论:钛表面微纳米形貌通过下调p53促进r BMSCs成骨分化。

缺血处理降低大鼠缺血再灌注性压疮细胞凋亡的实验研究

目的研究缺血处理对大鼠缺血再灌注性压疮细胞凋亡的影响。方法应用空气压缩机制成缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IPC组)、缺血后处理组(I-Post C组)压疮模型,同时设立正常大鼠为空白组(S组),每组20只。采用Annexin V-FITC/P(I膜联蛋白A 5-绿色荧光素/碘化丙啶)双染流式细胞术检测各组细胞凋亡百分率。结果 IPC组及I-Post C组所对应的大鼠细胞凋亡率水平较低,IPC组细胞凋亡率为(5.80±1.03)%、I-Post C组细胞凋亡率为(5.50±1.09)%。细胞凋亡在S组内罕见,其细胞凋亡率仅为(1.00±0.07)%。IR组所对应大鼠细胞凋亡情况相对严重,其细胞凋亡率达到(9.50±5.60)%。IR组细胞凋亡率明显高于其他3组,差异有统计学意义(P<0.001)。S组与IR组、IR组与IPC组、IR组与I-postC组、IPC组与I-postC组,在细胞凋亡率方面,组间差异无统计学意义。结论缺血再灌注能诱发大鼠细胞凋亡的发生,缺血处理可降低细胞凋亡的发生率,缺血预处理和后处理对降低压疮细胞凋亡率的疗效相似。

不同钛表面形貌诱导人牙周膜成纤维细胞增殖与成骨分化的影响

目的:比较不同钛表面形貌对人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)增殖与成骨分化的影响。方法:前期已构建不同形貌钛表面,包括喷砂碱热高温组的纳米针状表面、喷砂碱热低温组的纳米网状表面、喷砂酸蚀的微米凹坑表面和对照组的光滑纯钛表面。各组钛片表面接种PDLCs,在培养7天后采用MTT检测各组PDLCs增殖与总蛋白浓度,并进一步检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,同时采用实时荧光定量PCR分析成骨相关基因ALP、I型胶原(collagen-I,COL1)与成骨特异性转录因子(runt related transcription factor 2, RUNX2)的mRNA表达量差异。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:相比光滑纯钛组与喷砂酸蚀组,具有微纳米表面形貌的喷砂碱热高温组与喷砂碱热低温组PDLC细胞增殖能力显著增强,总蛋白浓度升高,ALP活性增加,ALP、COL1与RUNX2的mRNA表达水平明显上调。结论:钛表面微纳米形貌可促进PDLC增殖与成骨分化。

前臂游离皮瓣舌再造术的围术期护理

对 3 7例舌癌根治术并一期前臂游离皮瓣舌再造术围术期护理的经验进行总结。认为护理人员在协助该项手术成功方面扮演重要角色 ,强调消除一切潜在的不利于皮瓣成活的因素是护理的中心工作。

p53在低氧抑制人牙周膜成纤维细胞成骨分化中的作用

目的探讨p53在低氧抑制人牙周膜成纤维细胞(PDLCs)成骨分化中的作用。方法体外正常氧(20%O2)和低氧(1%O2)中培养PDLCs细胞48 h,Western免疫印迹检测12、24与48 h时p53与HIF-1α的表达水平;小干扰RNA(Si-HIF1α)转染PDLCs,验证敲低HIF-1α表达后p53水平变化;进一步通过小干扰RNA(Si-p53)转染PDLCs,检测低氧下PDLCs中p53表达水平,比较碱性磷酸酶(ALP)活性,成骨标志物ALP、I型胶原(COL1)、成骨特异性转录因子(RUNX2)的mRNA表达量变化。采用SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析。结果相比正常氧培养后HIF-1α/GAPDH蛋白比值0.309±0.052,PDLCs在低氧培养12、24、48 h后HIF-1α/GAPDH蛋白水平显著升高为0.801±0.049、0.881±0.037与0.936±0.039,差异具有统计学意义(t=6.901、9.041、9.704,P=0.002、0.0008、0.0006);同时p53/GAPDH蛋白比值分别为0.463±0.036、0.612±0.040与0.858±0.034,相较常氧的0.233±0.035显著上调,差异具有统计学意义(t=4.595、7.140、12.84,P=0.010、0.002、0.0002)。Si-HIF1α转染PDLCs并在低氧培养后,HIF1α-Si1、Si2转染组比阴性NC-Si组的HIF-1α在蛋白水平分别下降64.57%与59.94%,在mRNA水平分别下降66.67%、63.67%,差异具有统计学意义(t蛋白=9.326、6.985,P蛋白=0.0007、0.002;tRNA=5.319、5.015,PRNA=0.006、0.008);同时p53在蛋白水平分别下降36.47%与38.41%,在mRNA水平分别下降33.43%、30.67%,差异具有统计学意义(t蛋白=4.645、4.135,P蛋白=0.011、0.029;tRNA=4.373、3.912,PRNA=0.012、0.017)。PDLCs经p53-Si1、Si2转染后p53蛋白表达较NC-Si阴性组分别下降56.41%与51.24%,差异具有统计学意义(t=8.194、6.621,P=0.0012、0.0027),但HIF-1α蛋白水平无明显变化,差异无统计学意义(t=1.167、1.391,P=0.308、0.237)。将PDLCs转染p53-siRNA后继续在低氧培养48 h,p53-Si1、Si2组中PDLCs的ALP活性较NC-Si组升高2.05倍与2.17倍,差异具有统计学意义(t=4.889、4.346,P=0.008、0.012);成骨标志物ALP的mRNA水平分别升高2.14倍与2.05倍,差异具有统计学意义(t=5.423、4.078,P=0.006、0.015);COL1的mRNA水平分别升高2.86倍与3.03倍,差异具有统计学意义(t=7.56、6.89,P=0.002、0.002);RUNX2的mRNA水平分别升高3.41倍与3.71倍,差异具有统计学意义(t=8.15、12.21,P=0.001、0.0003)。结论低氧可上调HIF-1α与p53表达,进而抑制PDLCs成骨分化。

纯钛微纳米复合形貌对成骨细胞生物学行为的影响

目的对比研究纯钛表面不同微纳米图案对成骨细胞生物学活性的影响,探讨微米与纳米结构在影响细胞行为当中的不同作用。方法制备4组纯钛微纳米复合表面形貌:喷砂(S)、喷砂-酸蚀(SLA)、喷砂-碱热(SAH)及喷砂-阳极氧化(SAN)。检测各组材料表面理化性能,扫描电镜观察各组材料表面形貌及细胞黏附形态,CCK-8法测定细胞在材料表面增殖能力,碱性磷酸酶(ALP)活性检测细胞在材料表面分化能力。利用单因素方差分析进行统计分析,最小有意义差异(LSD)t检验对同时间点不同组的CCK-8及ALP结果进行比较。结果 (1)粗糙度结果示:SLA组粗糙度大于其余3组,差异有统计学意义(F_(Ra)=38.449,P_(Ra)<0.001;F_(Rq)=29.564,P_(Rq)<0.001)。(2)扫描电镜示:S组仅形成弹坑状一级微米结构,黏附细胞伪足短小,SLA、SAH及SAN组分别修饰沟壑状、网状及管状二级纳米多孔图案,细胞于SAH、SAN组表面伪足更为伸展,其中SAH组表面细胞伪足生长进入孔隙形成机械锁结。(3)CCK-8结果示:第5天,SAH和SAN组细胞增殖A值(1.546和1.528)显著高于S组(1.31),差异有统计学意义(F=3.229,P=0.042);第7天时,SAH和SAN组细胞增殖A值(2.646和2.57)显著高于S组(2.24),差异有统计学意义(F=3.51,P=0.035)。(4)细胞分化检测示:接种7 d后,SAH组ALP活性(77.656)显著高于S、SLA及SAN组(53.132、51.052和62.207),差异有统计学意义(F=29.734,P<0.001);接种14 d后,SAH与SAN组ALP活性(104.107和109.963)显著高于S与SLA两组(82.885和73.303),差异有统计学意义(F=46.052,P<0.001)。结论钛片表面微纳米图案影响细胞伪足形态,促进细胞增殖及ALP活性,其中多孔形貌显著增加细胞活性,碱热处理表面早期ALP活性显著增加,且形成纳米网比纳米管更有利于形成机械锁结。

低氧诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡的研究

目的初步探讨低氧环境诱导人牙周膜成纤维细胞(PDLCs)凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法体外正常氧(20%O_2)或低氧(1%O_2)状态下培养PDLCs,光学显微镜观察比较低氧诱导前后PDLCs形态学变化;台盼蓝染色实验检测PDLCs细胞死亡率的差异;凋亡实验比较各组PDLCs凋亡水平的变化。Western免疫印迹检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、p53、Caspase-3、Bcl-2与Bcl-x L蛋白的表达水平。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果随着低氧处理时间延长,人PDLCs细胞数量减少,体积逐渐变小,细胞胞质浓缩。台盼蓝染色实验与凋亡实验均证实低氧处理48 h后PDLCs死亡率(t=3.855,P=0.018)与凋亡率(t=6.621,P=0.003)显著增高。Western免疫印迹结果显示PDLCs中HIF-1α、p53、Caspase-3蛋白随着低氧刺激时间延长逐渐升高,Bcl-2与Bcl-x L蛋白逐渐降低。结论低氧能促进PDLCs形态变化、凋亡及凋亡相关蛋白的表达。

亲水性钛表面微纳米形貌对大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响

目的探讨亲水性钛表面微纳米形貌对大鼠骨髓间充质干细胞(r BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法采用阳极氧化法和喷砂碱热法分别构建微纳米形貌钛表面,检测其亲水性。钛片表面接种r BMSCs,采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)法在培养1、3、5、7 d时检测r BMSCs细胞活性;第7天和14天时检测总蛋白浓度与碱性磷酸酶(ALP)活性,并在第7天时检测成骨标志物ALP、I型胶原(COL1)与成骨特异性转录因子2(RUNX2)的m RNA表达水平。采用t检验比较2组水静态接触角、CCK-8、总蛋白浓度以及成骨分化PCR检测指标。结果阳极氧化组钛表面呈规则有序纳米管阵列,喷砂碱热组呈三维网状纳米多孔结构,二者具有相似的微纳米形貌,阳极氧化组水静态接触角大于喷砂碱热阻[(83.3±2.3)°vs(47.7±2.0)°],差异具有统计学意义(t=11.54,P<0.001)。相比阳极氧化组,喷砂碱热组r BMSCs细胞增殖能力均有所增强,接种3、5、7 d后喷砂碱热组r BMSCs细胞活性均明显高于阳极氧化组(0.66±0.03 vs 0.52±0.03;1.15±0.06 vs 0.85±0.05;1.58±0.07 vs1.26±0.07),且差异具有统计学意义(t=2.962、3.845、3.183,P=0.042、0.018、0.033);培养7、14 d后,喷砂碱热组r BMSCs的总蛋白浓度高于阳极氧化组[(389±45)μg/ml vs(226±32)μg/ml;(1070±59)μg/ml vs(760±65)μg/ml],差异具有统计学意义(t=3.319、3.518,P=0.029、0.025);第7、14天时喷砂碱热组钛表面r BMSCs的ALP活性高于阳极氧化组[(2.11±0.32)U/gprot vs(1.00±0.21)U/gprot;(6.13±0.57)U/gprot vs(3.92±0.51)U/gprot],差异具有统计学意义(t=2.912、2.976,P=0.043、0.041);第7天时,喷砂碱热组r BMSCs中ALP、COL1与RUNX2的m RNA表达水平均高于阳极氧化组(1.86±0.24 vs 1.00±0.15;2.05±0.16 vs 1.00±0.14;2.28±0.18 vs 1.00±0.12),差异具有统计学差异(t=3.383、5.012、5.710,P=0.028、0.007、0.005)。结论相比阳极氧化组,喷砂碱热组钛表面微纳米形貌具有更强的促r BMSCs增殖与成骨分化能力,该过程可能与其良好的亲水性有关。